虎金颗粒对免疫性肝纤维化大鼠肝功能和肝纤指标的影响

　　　　 作者：施旭光 黄兆胜 吕健 葛峥

【摘要】 探讨虎金颗粒对免疫性肝纤维化模型大鼠肝功能和血清中肝纤指标的变化的影响。［方法］用猪血清腹腔注射诱导免疫性肝纤维化模型，并用不同剂量的虎金颗粒进行干预，用全自动生化分析仪测定肝功能，用放射免疫分析法测定血清肝纤指标。［结果］猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中AST、ALT、HA、LN、IVC和PCⅢ含量均明显升高，虎金颗粒对上述指标有一定的逆转作用，并能升高血清中白蛋白含量。［结论］虎金颗粒对免疫性肝纤维化有一定的防治作用，能降低肝纤维化程度，同时有效减轻肝细胞损伤，改善肝功能。

【关键词】 虎金颗粒；免疫性；肝纤组化；肝功能

　　Abstract: ［Objective］ To explore the effect of Hujin Granule on liver function and serum fiber index of rats with immune hepatic fibrosis. ［Method］ Make abdominal injection with pig serum to induce immune hepatic fibrosis model， make intervention with different dosages of the Granule， measure liver function with automatic biochemical analyzer， and test serum hepatic fibrosis index with radioimmune analyse. ［Result］ The AST，ALT，HA，LN，IVC and PCⅢ contents in rats serum with hepatic fibrosis induced with pig serum rose obviously， the Granule had definite reversion to the indexes above and could raise albumin content in serum. ［Conclusion］ Hujin Granule has definite prevention to immune liver fibrosis， can reduce fibrosis degree， meanwhile effectively decrease liver cell injure and improve liver function.

　　Key words: Hujin Granule; immune; liver fibrosis; hepatic function

　　虎金颗粒是我校肝病专家的经验方，该方由虎杖、郁金、泽泻、三七、山楂、灵芝所组成，有活血祛瘀、疏肝益气、清热祛湿的功效，临床上用于治疗肝纤维化和肝硬化有较好的疗效。本文拟采用猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型，从血清酶、血清蛋白、血清肝纤指标等方面，进一步探讨该方的抗肝纤维作用。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物

　　健康SD大鼠，雄性，体重120～140g，由广州中医药大学实验动物中心提供（动物合格证：2003A010）

　　1.2 药品与试剂

　　(1)虎金颗粒：由广州中医药大学中药研究所提供，系按处方比例取虎杖、郁金、山楂、灵芝等药物，用70%乙醇回流提取，浓缩而得的稠膏经真空干燥粉碎后再与适量三七粉混合，制成颗粒剂，批号：030604。使用前用蒸馏水配制成24%、12%、6%三种浓度的混悬液，放置于4℃冰箱保存。(2)阳性对照药：秋水仙碱（Colchicines），为昆明制药集团股份有限公司产品，批号002509。(3) 猪血清：从广州市加禾屠宰厂取新鲜猪血，静置数小时后取猪血上清部分，3500rpm离心10min，回收上清，即得猪血清，用0.45μm微孔滤膜过滤除菌，分装后于-20℃冷冻结冰，后转-70℃保存备用。(2)谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供。(5)透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（ ⅣC）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）试剂盒，由北京北方生物技术研究所提供。

　　1.3 主要仪器

　　SN695B型放免γ测量仪（上海日环仪器厂生产）；7060型日立全自动生化分析仪。

　　1.4 分组

　　将SD大鼠随机分为6组。①正常组：不经造模阶段，同等条件下喂养作正常对照。②模型组：同等条件下喂养，不给治疗药物。③秋水仙碱组：每日灌服秋水仙碱1次，用量为0.1mg/kg。④虎金颗粒大剂量组：每日灌服虎金颗粒1次，用量2.4g/kg。⑤虎金颗粒中剂量组：每日灌服虎金颗粒1次用量为1.2g/kg。F组：⑥虎金颗粒小剂量组：每日灌服虎金颗粒1次用量为0.6g/kg。

　　1.5 造模

　　腹腔注射猪血清，0.5ml/只，每周2次，连续12周，于造模之日起，开始灌胃给药，至第12周，每组随机选取存活的大鼠 8只，在乙醚麻醉下打开腹腔，经下腔静脉采血，分离血清-70℃保存待检。

　　1.6 谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）的检测。采用全自动生化分析仪进行检测。

　　1.7 透明质酸（HA）、层黏蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（ⅣC）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）的检测。采用放射免疫分析法，按说明书严格操作。

　　1.8 统计方法

　　全部数据均以 表示，采用SPSS11.5统计软件进行数据分析，组间比较采用t检测法。

　　2 结果

　　2.1 由猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型大鼠血清中ALT、AST明显升高，与正常组比较，差别有显著性（P<0.01），而虎金颗粒组血清中ALT和AST的含量明显减少，且有一定的量效关系（见表1）。表1 各组大鼠血清中ALT、AST含量变化（略）与正常组比较：##P<0.01; 与模型组比较：*P<0.01，**P<0.05

　　2.2 模型组大鼠血清白蛋白含量明显减少，白蛋白和球蛋白的比值（A/G）下降，而虎金颗粒组血清白蛋白有不同程度的恢复，特别是虎金颗粒大剂量组，白蛋白含量和A/G比值几乎接近正常组（见表2）。表2 各组大鼠血清中ALB、TP、A/G含量变化（略）与正常组比较：##P<0.01; 与模型组比较：*P<0.01，**P<0.05

　　2.3 猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中HA、LN、IVC和PCⅢ均明显高于正常组，差别有显著性（P<0.01）。虎金颗粒不同剂量组与模型组比较，血清中HA、LN、IVC和PCⅢ均有不同程度的下降，且呈现出一定的量效依赖关系（见表3）。表3 各组大鼠血清中HA、LN、 ⅣC、PCⅢ含量变化（略）．与正常组比较：##P<0.01; 与模型组比较：*P<0.01，**P<0.05

　　3 讨论

　　结果表明，由猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型大鼠血清中ALT、AST明显升高，与正常组比较，差别有显著性，而虎金颗粒组血清中ALT和AST的含量明显减少，且有一定的量效关系，表明虎金颗粒对猪血清所致的免疫性肝纤维化大鼠有较好的保肝降酶作用。

　　血清白蛋白（ALB）的水平可反映肝脏功能。 但由于炎症肝细胞破坏，或抗原性改变刺激免疫系统导致球γ蛋白增高，弥补了血清蛋白的减少部分，因此总蛋白（TP）可能变化不大，但白蛋白和球蛋白的比值（A/G）可能变小。因此，临床上常把测定血清白蛋白的浓度及A/G作为慢性肝病患者肝功能实际情况的重要指标［1］。实验结果表明，模型组大鼠血清白蛋白含量明显减少，白蛋白和球蛋白的比值（A/G）下降，而虎金颗粒组大鼠血清白蛋白有不同程度的恢复，特别是虎金颗粒大剂量组，白蛋白含量和A/G比值几乎接近正常组。因此认为，虎金颗粒能促进免疫性肝损伤大鼠的白蛋白的合成，并能提高血清白蛋白的含量度，恢复A/G比值。

　　猪血清诱导的肝纤维化大鼠血清中HA、LN、ⅣC和PCⅢ均明显高于正常组，差别有显著性。虎金颗粒不同剂量组与模型组比较，血清中HA、LN、 ⅣC和PCⅢ均有不同程度的下降，且呈现出一定的量效依赖关系。结果表明，虎金颗粒对免疫性肝纤维化有一定的防治作用，能降低肝纤维化程度，同时有效减轻肝细胞损伤，改善肝功能。

参考文献