阿托伐他汀对心肌梗死后大鼠梗死区及非梗死区心肌细胞凋亡及血浆BNP水平的影响

　　　　 作者：宋显晶 杨萍 魏群 赵东明 杨春艳

【摘要】 目的 通过持续结扎Wistar大鼠前降支冠状动脉制造心肌梗死动物模型，探讨阿托伐他汀对梗死后大鼠梗死区及非梗死区心肌细胞凋亡及血浆B型钠尿肽(BNP)水平的影响。方法 取雄性Wistar大鼠60只，随机取8只作为假手术组，另外52只通过持续结扎前降支冠状动脉建立大鼠动物模型，ELISA法测血清中心脏肌钙蛋白T(CTnT)水平，将CTnT水平大于4.00 ng/ml的31只大鼠随机分为2组，对照组15只，实验组16只。假手术组及对照组正常饮食，实验组给予正常饮食+阿托伐他汀(10 mg·kg-1·d-1)，继续喂养5 w后通过ELISA法测血将中BNP水平，流式细胞法测梗死区及非梗死区心肌细胞凋亡率。结果 喂养9 w后测血浆中BNP水平：对照组和实验组高于假手术组(P<0.05)，实验组明显低于对照组(P<0.05);流式细胞法测梗死区心肌细胞凋亡率：实验组梗死区心肌细胞凋亡率明显低于对照组，实验组非梗死区凋亡率低于对照组;实验组和对照组梗死区和非梗死区心肌细胞凋亡率均高于假手术组(均P<0.05)。结论 阿托伐他汀可以减少心肌梗死后大鼠梗死区及非梗死区心肌细胞凋亡，并降低血浆中BNP水平，在一定程度上起到改善心脏功能作用。

【关键词】 心肌细胞凋亡;阿托伐他汀;心脏肌钙蛋白T(CTnT);B型钠尿肽(BNP)

最新报道表明在缺血再灌注(I/R)早期，他汀可以抑制心肌细胞的凋亡，减轻I/R损伤，并能减小梗死面积，从而改善心功能〔1〕。但是对梗死后缺血中他汀是否对心肌细胞的凋亡有影响目前尚无报道。本实验通过持续结扎前降支冠状动脉制作心肌梗死动物模型，研究阿托伐他汀对实验性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡及血浆B型钠尿肽(BNP)水平的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物及分组 Wistar雄性大鼠60只购自吉林大学动物实验中心，平均体重(279.3+8.6)g。采用结扎左冠脉前降支方法，乙醚吸入麻醉后，仰卧位固定于手术台，剪去胸前鼠毛，75%酒精消毒，先用10号缝线在开胸部位做一荷包，自左侧3～4肋间开胸，打开心包膜，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房找出做冠状动脉前降支，除假手术组8只仅穿线不结扎外，其余各组均以0号线结扎冠脉，术后将心脏送回胸腔，并挤出胸腔内的血液和气体，迅速收拢荷包关闭胸腔，整个开胸时间不超过30 s，假手术组仅穿线不结扎。术中大鼠死亡18只，死亡率30%。术后常规给予腹腔注射青霉素20万U/kg抗炎7 d。将CTnT水平大于4.00 ng/ml的31只大鼠随机分为对照组15只，实验组16只。假手术组及对照组正常饮食，实验组给予正常饮食+阿托伐他汀(10 mg·kg-1·d-1)。

　　1.2 试剂及测定方法 ELISA试剂盒、BNP、心脏肌钙蛋白T(CTnT)购自武汉博士德。结扎大鼠前降支冠状动脉后48 h取大鼠尾静脉血清2 ml，加入0.5 ml组织裂解缓冲液(1%Triton X100，pH7.5，50 mmol/L TrisHCl;150 mmol/L NaCl;2 mmol/L EDTA;2 mmol/L PMSF;1 mmol/L NaF;4 μg/ml亮抑酶肽;1 μg/ml抑肽酶)，4℃组织匀浆，以2 000 r/min，4℃离心10 min，取上清液再以12 000 r/min，4℃离心30 min，回收上清液，操作严格按说明书进行，并计算CTnT水平，对假手术组和手术组CTnT大于4.00 ng/ml的大鼠继续常规喂养。采用ELISA法测血浆BNP水平〔2〕。

　　1.3 流式法测梗死区心肌细胞凋亡率 大鼠取血后将心肌组织处理成单细胞悬液，70%冷乙醇固定，离心洗去乙醇，弃上清，调整细胞数为1×106个/ml，过350目滤网，RNAse水浴30 min，加入PI(碘化丙锭)混匀，4℃作用30 min，上机检测。细胞周期各时相DNA含量用百分比表示。

　　1.4 统计学处理 数据用x±s表示，采用SPSS12.0软件进行单因素分析和方差下的t检验。

　　2 结 果

　　2.1 各组大鼠血清中CTnT水平变化 结扎前降支48 h后测血清中CTnT水平：假手术组〔(0.85±0.13)ng/ml〕明显低于手术组〔(4.086±0.24)ng/ml〕(P<0.05)，表明结扎冠状动脉后出现心肌坏死。

　　2.2 各组大鼠血浆中BNP水平变化 实验组血浆中BNP水平〔(280.77±28.36)pg/ml〕明显高于假手术组〔(91.71±13.52)pg/ml〕，明显低于对照组〔(561.52±37.12 )pg/ml〕(均P<0.05)。

　　2.3 各组大鼠心肌细胞凋亡检测结果 梗死区心肌细胞凋亡率对照组(37.16%±4.5%)和实验组(21.45%±5.1%)均明显高于假手术组(0.98%±0.21%)(P<0.05);实验组梗死区心肌细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05)。对照组非梗死区凋亡率(16.70%)明显高于实验组(10.80%)(P<0.05)。实验组和对照组梗死区和非梗死区心肌细胞凋亡率均高于假手术组(P<0.05)。

　　3 讨 论

　　目前已经在多种心脏标本中，如：急性心肌梗死、缺血性心肌病、扩张型心肌病等患者的心脏中都证实有细胞凋亡现象存在，而且凋亡是老年心脏心肌细胞数量减少的主要原因〔2，3〕。干预心肌细胞凋亡已成为治疗心血管疾病的重要目标之一。他汀类药物为羟甲基戊二酰辅酶A(HMGCoA)还原酶抑制剂，抑制内源性胆固醇的合成，为血脂调节剂。目前其“多效性”作用包括抗炎〔4，5〕、抗氧化〔6，7〕、稳定斑块、改善内皮功能〔8〕及调节免疫、动员内皮祖细胞〔9〕、抗心律失常及预防猝死〔10〕等作用。BNP由心室肌合成，与左室舒张末压、心力衰竭严重程度和短期或长期预后相关，当全身血流动力学参数未发生改变时，心肌缺血、坏死、损伤和局部心室肌机械应力均可改变BNP表达。目前临床上正在把BNP水平和其他临床指标相结合的用于充血性心力衰竭病人管理的方案。

　　本实验结果表明阿托伐他汀有抑制心肌梗死后期心肌细胞凋亡的作用，可以通过抑制心肌细胞凋亡从而在一定程度上使心脏功能得到改善。

　　凋亡对于各种生理和病理情况起着重要作用，然而，在心血管系统中，我们刚刚开始认识凋亡的作用并开始探索抑制凋亡的治疗办法，尚需理解心力衰竭中调控凋亡的分子机制及其重要性，将抗凋亡通路作为治疗心力衰竭的靶点具有很大的潜力。目前的对于心肌细胞凋亡的研究有些结果是合理的，但是还不成熟，最重要的问题是对于心肌细胞的凋亡在多大程度上引起心脏功能受损和能否开发出新的建立在阻止心肌细胞凋亡通路上的治疗方法。

参考文献

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