参芪合剂对衰老小鼠抗氧化功能的影响

　　　　　　作者：单玉兴 施溯筠 张善玉

【摘要】 目的 观察参芪合剂(MGA)对老龄小鼠和D半乳糖致衰老小鼠抗氧化功能的影响。方法 ①40只老龄小鼠随机分为对照组和MGA 10、20、40 ml/kg组，药物组连续腹腔注射给药30 d后，测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性和丙二醛(MDA)含量;② 50只小鼠随机分为对照组、模型组和MGA10、20、40 ml/kg组，除对照组均皮下注射D半乳糖制备衰老小鼠模型，同时分别腹腔注射MGA10、20、40 ml/kg，连续造模和给药56 d后，分别检测血清和肝组织中SOD、GSHPX活性和MDA含量。结果 ①与对照组比较，MGA 20、40 ml/kg组老龄小鼠血清SOD和GSHPx活性均明显提高(P<0.05)，MGA 10 ml/kg组小鼠血清SOD和GSHPx活性均无明显改变(P>0.05);② 与对照组比较，D半乳糖致衰老模型组小鼠血清及肝组织SOD、GSHPX活性均明显降低(P<0.05)，MDA含量则明显提高(P<0.05);与模型组比较，MGA 20 ml/kg小鼠血清GSHPx活性及肝组织SOD和GSHPx活性明显升高(P<0.05)，MGA 40 ml/kg组小鼠血清及肝组织SOD活性均明显升高(P<0.05)，MGA各剂量组肝组织MDA含量均明显降低(P<0.05)，血清MDA含量无明显改变(P>0.05)。结论 MGA具有降低老龄小鼠和D半乳糖致衰老小鼠的脂质过氧化作用，并能明显提高内源性抗氧化酶活性，提示其可能具有较好的抗衰老作用。

【关键词】 黄芪多糖;人参总皂苷;抗氧化功能;D半乳糖;老龄小鼠

人参和黄芪都是补气的主药，二药配伍可明显增强机体的免疫功能和抗病能力，在临床应用较为广泛。目前对人参与黄芪复方的研究多停留在临床疗效的观察和实验药理学的药效的观察〔1，2〕，缺乏对有效成分配伍的系统研究。另外，就人参总皂苷和黄芪多糖的免疫调节作用和抗氧化作用方面的研究也较多〔3，4〕，但两者有效部位配伍时的生物活性研究报道甚少。在前期研究中发现人参总皂苷与黄芪多糖联用较单用时具有更好的增强人外周血淋巴细胞增值〔5〕和提高衰老小鼠抗氧化物酶活性的作用〔6〕。本文探讨不同剂量参芪合剂(由人参总皂苷与黄芪多糖按1∶5配伍组成，以下简称MGA)对自然衰老和D半乳糖致衰老小鼠抗氧化物酶活性的影响，为两者的配伍应用及其有效剂量的确定提供实验基础。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验动物 雌性昆明种小鼠，18月龄，体重46～55 g;青年昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～22 g，均由吉林省延边大学医学部实验动物科提供。

　　1.2 实验药品 超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)和丙二醛(MDA)测试盒由南京建成生物工程研究所提供;其他试剂均为分析纯。

　　1.3 人参总皂苷提取 人参干燥根于2006年11月末采集于吉林敦化市(由吉林延边大学药学院生药学教研室鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根)，称取干燥粉碎的人参药材230 g，分别加70%乙醇(8、6倍)回流提取2次(2、2 h)，滤过，滤液浓缩，过D101大孔吸附树脂柱，收集70%乙醇洗脱部分，浓缩，干燥，得4.53 g人参总皂苷(比色法〔7〕测定含量为62.9%)。

　　1.4 黄芪多糖提取 黄芪干燥根于2006年10月末采集于吉林省和龙市(由吉林延边大学药学院生药学教研室鉴定为膜荚黄芪Astragalus membraneaceus (Fisch.)的干燥根)，称取干燥粉碎的黄芪药材300 g，分别加水(20、10、10倍)于80℃下提取3次(2、1、1 h)，过滤，滤液浓缩至约0.5 L，加入95%乙醇至醇度为80%，放置过夜，沉淀加水溶解，过滤，经酶三氯醋酸法除蛋白，用氨水调pH=8，加入3%过氧化氢后于37℃ 水浴中放置12 h，过滤，滤液置于透析袋中流水透析12 h，浓缩、醇沉，放置过夜，沉淀用无水乙醇和丙酮洗涤，干燥，得6.5 g类白色粉末状粗多糖(苯酚硫酸法〔8〕测定多糖含量为83.2%)。

　　1.5 MGA的制备 称取人参总皂苷0.4 g和黄芪多糖2.0 g，加蒸馏水溶解并定容至200 ml，分装，在120 ℃高温下消毒30 min，冷却，即可。

　　1.6 实验方法

　　1.6.1 对老龄小鼠抗氧化功能的影响 取40只老龄小鼠，按体重随机分为4组，即对照组和MGA 10、20、40 ml/kg组。各实验组连续腹腔注射相应药物30 d，第31天眼眶取血，测定血清中SOD、GSHPx活性和MDA含量。

　　1.6.2 对D半乳糖致衰老小鼠抗氧化功能的影响 取50只青年小鼠，按体重随机分为对照组、模型组和MGA 10、20、40 ml/kg组。各实验组连续腹腔注射相应药物，给药同时，模型组和药物组小鼠每天颈背部皮下注射5%D半乳糖0.5 ml，对照组注射等量生理盐水，造模8 w后称其体重，眼眶取血，脱颈椎致死后，分离肝脏，按测试盒操作方法测定和计算血清和肝组织SOD、GSHPX活力和MDA含量，用考马斯亮蓝法测定肝匀浆中蛋白质含量。

　　1.7 统计学处理 应用SPSS12.0进行两组间t检验。

　　2 结 果

　　2.1 MGA对老龄小鼠血清SOD和GSHPx活性及MDA含量的影响 给药30 d后，MGA 20、40 ml/kg组小鼠血清SOD和GSHPx活性均明显高于对照组(P<0.05，P<0.01);各剂量组血清MDA含量与对照组比较有降低的趋势，但无统计学意义(P>0.05)，见表1。

　　2.2 MGA对D半乳糖致衰老小鼠血清SOD、GSHPx及MDA的影响 与对照组比较，D半乳糖致衰老模型组小鼠血清SOD及GSHPX活性均明显降低(P<0.05)，MDA含量则明显提高(P<0.05);与模型组比较，MGA 20 ml/kg组小鼠血清GSHPx活性明显升高(P<0.05)，MGA 40 ml/kg组小鼠血清SOD和GSHPx活性均明显升高(P<0.05)，MGA各剂量组血清MDA含量无明显改变(P>0.05)，见表2。表1 MGA对老龄小鼠血清SOD、GSHPx及MDA的影响与对照组比较:1)P<0.05，2)P<0.01表2 MGA对D半乳糖致衰老小鼠血清SOD、GSHPx及MDA的影响与对照组比较：1)P<0.05;与模型组比较:2)P<0.05;下表同

　　2.3 MGA对D半乳糖致衰老小鼠肝组织SOD、GSHPx及MDA的影响 与对照组比较，D半乳糖致衰老模型组小鼠肝组织SOD、GSHPX活性均明显降低(P<0.05)，MDA含量则明显提高(P<0.05);与模型组比较，MGA 20及40 ml/kg组小鼠肝组织SOD活性均明显升高(P<0.05)，MGA 20 ml/kg组GSHPx活性升高(P<0.05)，MGA各剂量组肝组织MDA含量均明显降低(P<0.05)，见表3。表3 MGA对D半乳糖致衰老小鼠肝组织SOD、GSHPx及MDA的影响

　　3 讨 论

　　以D半乳糖制备亚急性衰老模型的方法是目前国际上公认的建模方法，该模型使机体细胞内半乳糖浓度增高，在醛糖还原酶催化下还原成半乳糖醇。这种物质不能被细胞进一步代谢而堆积体内影响正常渗透压，导致细胞代谢紊乱，破坏机体抗氧化防御系统使自由基积聚，导致衰老〔9〕。本实验中衰老模型组在连续注射D半乳糖8 w后，小鼠血清和肝组织SOD活性、GSHPx活性显著下降，MDA含量显著升高，说明本实验中衰老模型的建立是成功的。

　　根据自由基学说理论，机体衰老时，抗氧化系统抗氧化能力下降，自由基代谢产物增加，进而加速机体衰老。因而提高抗氧化酶活性，降低自由基代谢的生成，是延缓衰老的重要途径〔10〕。本研究表明：MGA腹腔注射一定时间后，可使老龄小鼠血清SOD活性和GSHPx活性明显提高;也使D半乳糖致小鼠血清和肝组织中SOD 和GSHPX活性降低和肝组织中MDA含量的升高。说明其具有一定的拮抗D半乳糖致小鼠抗氧化功能损伤和提高老龄小鼠抗氧化功能的作用。

　　药品剂量与疗效有着密不可分的关系。药品在一定剂量范围内，随着剂量的增加，疗效会相应提高，但是当剂量超过一定的限度，不仅疗效不会提高，而且会出现毒副反应，有的疗效反而下降，甚至产生不同的药效作用。因此，必需通过大量药理和临床的实验研究确定药品的有效剂量范围。本实验结果表明，MGA 20 ml/kg 和40 ml/kg组小鼠的大部分抗氧化指标较模型对照组均有改善，而10 ml/kg组小鼠只有肝组织中MDA含量指标有显著降低，可见MGA抗氧化活性与其剂量有关，20 ml/kg 和40 ml/kg为有效剂量。目前对人参总皂苷和黄芪多糖配伍规律及寻找2个有效部位最佳配伍比例的研究尚处于探索阶段，应利用先进的科技手段，进行更广泛、更深入的研究，为其合理的临床应用提供科学依据。

参考文献

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