关于氨氯地平对兔主动脉PDGF A表达的影响

代写论文网： 【关键词】 氨氯地平 PDGFA 动脉硬化
　　1对象和方法
　　实验分为3组（每组3只），正常对照组：普通饲料喂养大白兔；动脉硬化组：高脂肪、高胆固醇饲料喂养的动脉硬化模型兔（吉林省科技开发中心提供）；氨氯地平组：动脉硬化模型兔服用氨氯地平（美国辉瑞Pfizer公司），3 mg/(kg·d)，连续6 wk后，活体分离兔主动脉壁，液氮速冻后研碎. 向1 g组织碎末中加入5 mL异硫氰酸胍变性溶液，混匀，用16号针头低温下反复抽吸裂解液，直至溶液不再粘稠，加0.5 mL 的2 mol/L乙酸钠(pH 4.0)，5 mL 饱和酚和1 ml氯仿异戊醇混合液(49∶1)，混匀，冰浴15 min，沉降、离心、干燥后，采用紫外分光光度法测量所提取的组织中RNA的A260nm值和A280nm值，通过甲醛琼脂糖凝胶电泳分离RNA. 用含有DNA探针（100 ng/mL）的杂交液，经过转膜、预杂交、杂交、滤膜及显色反应，对主动脉壁平滑肌细胞的RNA进行斑点和Nouthern杂交. 对各组检测结果进行分析.
　　2结果
　　由碱裂解法提取DNA的电泳结果可以看出，质粒的大小与预期的结果一致. 探针DNA的电泳结果显示PDGF的基因片段大小约600 bp，而标记后的DNA中由于用修饰后的脲嘧啶取代了部分胸腺嘧啶，所以探针DNA的分子质量比原基因片段的分子质量要大，电泳结果也与预期一致. 紫外分光光度法测定探针DNA浓度显示A260 nm=1时，双链DNA的浓度为50 μg/mL. 探针DNA浓度：2.0 μg/mL. 紫外分光光度法测定总RNA显示当A260 nm=1时，单链RNA的浓度为40 μg/mL. 动脉硬化组：A260 nm/A280 nm=1.95，RNA浓度为5.3 μg/μl. 氨氯地平组：A260 nm/A280 nm=2.01，RNA浓度为5.5 μg/μL. 对照组：A260 nm/A280 nm=1.95，RNA浓度为4.3 μg/μL. 斑点杂交结果显示动脉硬化兔主动脉壁平滑肌细胞总RNA中PDGF的表达水平很高；氨氯地平组PDGF基因的表达水平较动脉硬化组明显降低约200倍；正常对照组PDGF的mRNA表达水平很低，斑点杂交时几乎检测不到PDGF基因的表达. Nouthern杂交可见与斑点杂交相似的结果，而且各组动脉平滑肌细胞总RNA经电泳分离后只有一条特异的杂交带出现，说明DNA探针的特异性较高.
　　3讨论
　　血小板衍生生长因子（plateletderived growth factor，PDGF）是动脉壁平滑肌细胞中主要的细胞有丝分裂原，能促平滑肌细胞分裂、增殖，与动脉粥样硬化密切相关. PDGF的表达受到严格控制，在正常动脉存在着PDGF的基因转录，但正常细胞表达水平很低甚至检测不出. 而在动脉硬化的血管平滑肌细胞中却能大量表达PDGFA，故认为平滑肌细胞移行、增生是动脉硬化形成发展的重要因素，而能刺激平滑肌细胞移行、增生的生长因子PDGF则更为关键［1］. 由于本研究用RTPCR法从动脉硬化模型兔的主动脉壁平滑肌细胞分离得到了PDGF基因的高表达，说明在动脉硬化的平滑肌细胞中含有大量的PDGF，进一步证实了PDGF的表达与动脉硬化的关系及其意义. 本研究通过观察动脉硬化时平滑肌细胞PDGF的表达水平以及钙通道阻滞剂氨氯地平对PDGF表达的影响，发现动脉硬化组PDGF表达明显增强；氨氯地平组PDGF表达明显低于动脉硬化组，证实了氨氯地平能有效降低动脉硬化的平滑肌细胞PDGF的合成，进而抑制平滑肌细胞增生、移行，防止抗动脉硬化的病变. 也为氨氯地平抗高血压、预防动脉硬化的作用提供了分子水平上的依据.

【参考文献】
　　［1］Nadar SK， Blann AD， Lip GY，et al. Plasma and plateletderived vascular endothelial growth factor and angiopoietin1　in hypertension: effects of antihypertensive therapy［J］.Intern Med. 2004，256(4):331-337.