关于糖尿病患者T3 核受体各亚型mRNA与中医辩证关系

作者：李晓苗　李源　谢永红　拓步雄

【关键词】 糖尿病
　　关键词: T3 核受体;糖尿病;中医辩证
　　摘 要:目的 了解糖尿病患者外周血白细胞T3 核受体与糖尿病（无/有慢性并发症）中医辩证的关系. 方法 根据是否并发慢性并发症将20例糖尿病患者分为无慢性并发症组（A组、气阴两虚型）、慢性并发症组（B组、阴阳两虚型），应用半定量RT-PCR法，观察T3 核受体各亚型mRNA变化. 结果 B组比A组糖尿病患者外周血白细胞中T3 Rα1 ，T3 Rα2 表达增强（P&<0.05），T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 mRNA变化不大（P&>0.05）. 结论 在外周血白细胞中，T3 R mRNA各亚型表达有助于临床对中医气阴两虚、阴阳两虚型的确立.
　　
　　Keywords:T3 nuclear receptor;diabetes mellieus;traditional Chinese medicine
　　
　　Abstract:AIM To study the association of thyroid hormone receptor mRNA inperipheral ldukocytes in diabetes mellieus（DM）with the syndrome differentiation of TCM.METHODS By using semi-quantitative RT-PCR method，we examined T3 R mRNA levels in peripheral leukocytes of DM（A，B）.RESULTS T3 Rα1，T3 Rα2mRNA levels were all increased in DM.But B was more than A（P&<0.05）.CONCLUSION Measurement of the distribution of T3 R mRNA is helpful to the syndrome differentiation of TCM.
　　
　　0 引言
　　
　　中医理论现代化是目前国内外医学界研究的方向，也是中医走向世界的基础，许多学者对此已做了大量的临床和实验工作.我们已对糖尿病患者气阴两虚型、阴阳两虚型与甲状腺功能做了研究［1］ ，但其与甲状腺激素受体还未见报道.我们对糖尿病患者低T3 综合征时气阴两虚型/阴阳两虚型外周血白细胞中T3 R mRNA的表达进行了半定量分析，旨在了解气阴两虚型/阴阳两虚型时低T3 综合征状态下T3 R mRNA各亚型变化与中医的辩证关系.
　　
　　1 对象和方法
　　
　　1.1 对象 按1999年WHO诊断标准确诊的糖尿病患者20（男11，女9）例;平均年龄49（29～67）岁;病程2mo～15a，其中1型糖尿病1例，2型糖尿病19例.根据是否并发慢性并发症将患者分为2组.A组（无慢性并发症组、气阴两虚型）10（男7，女3）例;平均年龄46（29～67）岁;病程2mo～6a，其中1型糖尿病1例，2型糖尿病9例.B组（慢性并发症组、阴阳两虚型）10（男4，女6）例，并发有糖尿病肾病或（和）糖尿病视网膜病变，平均年龄57（41～67）岁;病程4～15a，均为2型糖尿病.C组（正常对照组）15（男7，女8）例;平均年龄45（18～60）岁.
　　
　　1.2 方法 外周血白细胞RNA的提取采用异硫酸肽-酚-氯仿一步法［2］ ，随后取RNA加入随机引物，70℃水浴5min，0℃水浴5min，后加入AMV（禽源反转录酶）逆转录酶，5×AWV缓冲液，10mol・L-1 dNTP，0.67kat・L-1 RNA酶抑制剂，加DEPC处理的水至总体积20μL，37℃恒温1h，95℃灭活5min后的cDNA存于-20℃冰箱，以逆转录产物cDNA为模板，以GAPDH为内参照，在DNA自动扩增仪上进行PCR.T3 Rα的扩增条件为94℃变性30s，59℃复性45s，72℃延伸45s.T3 Rβ的扩增条件为94℃变性30s，55℃复性45s，72℃延伸45s.28个循环后，取反应产物8μL，以GADDH为对照，20g・L-1 琼脂糖凝胶电泳后，用凝胶图像分析系统（GDS8000）进行灰度分析.
　　
　　统计学处理:扩增后产物灰度值与内参照灰度值进行比较，所得数值以x ±s表示，组间用方差分析法.
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 糖尿病（A+B）组与正常对照（C）组总T3 R mRNA变化 20例糖尿病患者外周血中白细胞T3 mRNA明显高于正常对照组（Tab1）.
　　
　　表1 糖尿病组和正常对照组T3 R mRNA比较　略
　　
　　2.2 各组糖尿病外周血白细胞中T3 R各亚型mRNA表达水平 各组糖尿病患者T3 Rα1 ，T3 Rα2 mRNA较对照组都明显增加（P&<0.05），且随慢性并发症而增强，T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 mRNA虽然与对照组无明显差异，但是有一定的增长趋势（Tab2）.
　　
　　表2 A，B，C组T3 R各亚型mRNA比较　略
　　
　　3 讨论
　　
　　糖尿病属于中医的“消渴”，是临床常见多发病，由高血糖引起的机体代谢紊乱可从不同水平影响甲状腺功能，出现低T3 、高rT3 血症，血糖越高，低T3 综合征越重，有急、慢性并发症者，这种甲状腺功能的改变尤为突出［3，4］ .但是T3 调节机体功能，主要是在基因水平.T
3 必需与靶细胞核受体（T3 R）结合，才能发挥其生物效应.基于此种情况，我们研究了低T3 综合征的糖尿病患者T3 R表达情况，以冀了解糖尿病患者T3 R各亚型mRNA与糖尿病及其并发症的中医辩证关系.从实验结果看，糖尿病（虚证）患者普遍存在T3 Rα1 ，T3 Rα2 mRNA表达水平升高，且随糖 尿病慢性并发症出现而愈明显，阴阳两虚型高于气阴两虚型（P&<0.05）.而T3 Rβ1 和T3 Rβ2 mRNA虽有增加趋势，而无统计学意义. 　　T3 R存在多个亚型，其中T3 Rα1 ，T3 Rβ1 ，T3 Rβ2 结合T3 ，对T3 调节起正性作用，而T3 Rα2 不结合T3 ，对T3 调节起负性作用.低T3 综合征时，患者T3 Rα1 mRNA上升，可使在低T3 状态下，机体合成T3 Rα1 增加，增加了机体对T3 的反应性，以对抗低T3 对机体影响.T3 Rα2 不与T3 特异性结合，相对于与配基结合的其他T3 R的调节作用，是一个内源性抑制因子，从而对T3 调节基因转录起负性作用.当机体处在低T3 状态时，T3 Rα2 mRNA上升，可能是由于T3 Rα1 和T3 Rα2 mRNA为同一基因α所转录，T3 Rα的基因转录增加，编码T3 Rα的mRNA剪接产物同时增加，但T3 Rα1 mRNA变化的幅度高于T3 Rα2 mRNA变化幅度，所以在低T3 状态下以正性效应为主.T3 Rβ1 表达水平与其他三个亚型受体不同，与T3 水平无关.T3 Rβ2 被认为是在T3 R各亚型中调节能力最强的受体，低T3 状态时，机体β基因转录上升，T3 Rβ
2 mRNA水平上调合成T3 Rβ2 增加，机体对T3 反应性上升，以对低T3 状态进行代偿性反应［5-7］ .
　　
　　T3 Rα和T3 RβmRNA对不同甲状腺状态（阴虚/阳虚）表现出不同的反应［8］ .在外周血白细胞中T3 RαmRNA的表达大于T3 RβmRNA的表达，这也许是T3 Rα作用大于T3 Rβ的作用.在慢性非甲状腺疾病病程中，常出现低T3 综合征，在低T3 状态下，T3 R mRNA总体是上升，这是由于甲状腺功能的异常，机体产生反馈性作用增加T3 R合成，从而增加反应基因上T3 结合位点处T3 R的数目，增加机体对T3 的反应性，以减少在T3 浓度降低时机体平衡被打破而对机体产生不良影响，是机体的一种代偿反应.如果T3 R mRNA水平的变化能引起受体蛋白增加，那么这种变化可能是维持低T3 综合征患者正常甲状腺功能状态的一个重要环节，同时也从理论上支持了低T3 综合征不需要甲状腺激素替代治疗的观点
［9］ ，当机体低T3 状态被纠正后，T3 含量恢复到正常水平，其基因水平的转录亦逐渐恢复平衡，T3 R合成接近正常，细胞对T3 反应性恢复正常水平.
　　参考文献:
　　
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