关于九节龙皂甙对8株人癌细胞的抑制作用

作者：梁克明，王四旺，王晓娟

【关键词】 人癌细胞
　　关键词: MTT;九节龙皂甙;药物敏感性;人癌细胞
　　
　　川产九节龙（Ardisea pusilla A.PC）系紫金牛科紫金牛属植物的全草，九节龙皂甙（Ardipusilloside）是从该全草中分离出的C 53 H 86 O22 .2h3 O，经初步药理试验表明具有提高免疫功能的作用［1］ .我们采用MTT法观察九节龙皂甙对8株人癌细胞的细胞毒作用.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料
　　肝癌（SMMC-7721），本校西京医院中医科提供;肝癌（HCC-9204），本校病理科提供;胃癌（SGC-7901），本校西京医院消化内科提供;卵巢癌（HO-8910）本校西京医院妇产科提供;宫颈癌（Hela）本校403研究所提供;肺癌（A549）、食管癌（Eca-109）、肾癌（GRC-1）本校实验动物研究中心提供.九节龙皂甙由本校药物研究所提纯，批号:971017;丝裂霉素（MMC）日本协和发酵工业株式会社生产，批号:174AGF;MTT（SIGMA公司产品）.两种药物终浓度均为:50.0mg L-1 →25.0mg L-1 →12.5mg L-1 →6.25mg L-1 →3.13mg L-1 →1.56mg L
　　
　　1.2 方法
　　将8株人癌细胞制成单细胞悬液，接种于96孔平面培养板中，调正细胞数为5×104 mL-1 ，每孔细胞悬液100μL.将96孔板置于37℃，50mL L-1 CO2 饱和温度的二氧化碳培养箱培养24h，设实验，阴性对照及阳性对照孔.实验和阳性对照孔分别加入50.0mg L-1 ，25.0mg L-1 ，12.5mg L-1 ，6.25mg L-1 ，3.13mg L-1 ，1.56mg L-1 的九节龙皂甙及MMC，阴性对照孔加入等量的培养液，以不含细胞的1640完全培养液为空白对照，每组6个平行孔，继续培养72h，去除培养液，加入5g L-1 MTT20μL，继续培养4h，加入二甲基亚砜（DMSO）150μL/孔，并振荡待紫蓝色结晶完全溶解，采用DG-3022型酶标仪（国营华东电子管厂）测各孔的吸光度值（A490nm ），按公式（实验孔平均A490nm 值/阴性对照孔平均A490nm 值）×100%计算，并以实验药物浓度的对数为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制剂量效应曲线，并求半数细胞抑制剂量值（IC50 ）.
　　
　　统计学处理:采用SPLM软件方差分析，q检验.
　　
　　2 结果
　　对照孔光镜下见细胞贴壁生长，细胞界限清楚，核分裂相明显，有伪足伸出;加药孔细胞生长缓慢，可见细胞皱缩，分裂相减少或停止，胞质粗糙，死亡脱落细胞增加.人癌细胞各细胞株对九节龙皂甙敏感性即IC50 （mg L-1 ）分别为:SMMC-77213.74;HCC-92044.53;A5494.31;SGC-79017.09;HO-89103.56;Hela3.43;Eca-1096.10;GRC-19.36.九节龙皂甙对8株人癌细胞的IC50 ≤9.36mg L-1 ，同时，随药物浓度的增加，细胞存活率逐渐下降呈现剂量―效应依赖关系（P&<0.01，图1）. 转贴于 　3 讨论
　　自1983年Mosman［3］ 发表MTT法以来，许多实验证明 ［2-4］ MTT法是一种敏感、稳定、快速、简便、经济的方法.
　　
　　我们采用MTT法观察了九节龙皂甙对8种人癌细胞株的杀 伤作用，以IC50 为指标，发现Hela对九节龙皂甙最敏感;而GRC-1，SGC-7901，Eca-109敏感较差，这一结果恰好与临床上化学治疗对肾癌、胃癌、食管癌大多疗效不佳极为相似［5］ .癌细胞株存活率与九节龙皂甙的剂量、作用时间有密切关系，剂量大，作用时间长，其存活率低，反之，则相反.8种人癌细胞株MMC处理1h，MMC≥12.5mg L-1 组，光镜下可见癌细胞呈散在碎片坏死，看不见完整的细胞结构，MMC≤6.25mg L-1 组，细胞皱缩不等;相同剂量和作用时间相同情况下，九节龙皂甙处理组癌细胞变化不明显，而处理24h，九节龙皂甙组细胞出现皱缩，多呈圆形，胞质粗糙，死亡脱落细胞增多;处理72h，九节龙皂甙≥25.0mg L-1 与MMC组细胞存活率相比无差异（P&>0.05）.表明MMC具有较强细胞毒作用，而九节龙皂甙直接作用癌细胞的细胞毒较低.至于九节龙皂甙影响癌细胞的生长机制，还有待进一步研究.
　　
　　参考文献:
　　
　　［1］Zhang QH，Wang XJ，Miao ZC，Feng R.Studies on the saponin constituents of jiujielong（Ardisia pusilla）［J］.Yaoxue Xuebao（Acta Pharm Sin），1993;28（9）:673-678.
　　［2］Mosman T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival:application to prolifention and cytotoxici by assays ［J］.J Immunol Methods，1983;65:55.
　　［3］Cole S，Rapid chemosensitivity testing of human lung tumor cells using the MTT assay ［J］.Cancer Chemother Pharm，1986;17:259.
　　［4］Sargent JM，Taylor CG.Appraisal of the MTT assay as a rapid test of chemosensitivity in acute myeloid leukacmia ［J］.Br J Cancer，1989;60:206.
　　［5］Fditor in Chief:Han R.Chemoprevention and drug therapy of cancer ［M］.Beijin:Beijin Yike Daxue.Zhongguo Xiehe Yike Daxue Lianhe Chubanshe（United Press of Chinese Xiehe Medi-cal University），1994:611-613;582-583;574-576.