关于羟苯磺酸钙胶囊不同含量测定方法的比较

【摘要】 目的 建立UV吸收系数法和HPLC法测定羟苯磺酸钙胶囊的含量，并与文献方法进行比较。方法①UV吸收系数法:溶剂为水，测定波长为301 nm，吸收系数Ε1%1 cm为188（以C12H10CaO10S2计）；②UV对照品法:溶剂为水，测定波长为301 nm；③铈量滴定法；④HPLC法:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，0.2%磷酸二氢钾甲醇（体积比90∶10）为流动相；检测波长为301 nm。 结果 UV吸收系数法、UV对照品法和铈量滴定法3种方法的结果基本一致，HPLC法测定结果较其他3种方法的低。结论 HPLC法的可以有效分离可能存在的降解产物，比其他3种方法更能有效反映产品的真实质量，有利于产品的质量控制。
【关键词】 羟苯磺酸钙胶囊；高效液相色谱法；紫外吸收系数法
Abstract:Objective To establish an HPLC and UV spectrophotometry for analyzing the content of calcium dobesilate in calcium dobesilate capsules， and compare the results with those of references.MethodsIn UV absorbance coefficient， water was used as the solution， the detection wavelength was 301 nm. The absorption coefficient was 188(calculated as C12H10CaO10S2）.In control method， water was used as solution And the detection wavelength was 301 nm. In HPLC， samples were analyzed on a C18 column by using 0.2% potassium dihydrogen phosphatemethanol (90∶10) as the mobile phase. The detection wavelength was 301 nm.Results Result among UV absorbance coefficient， control method and(3) was conformable， but the result of HPLC was lower than others.Conclusion Degradated substances or other related substances can be separated effectively by HPLC. So the method of HPLC was more suitable for quality control than other three methods.
　　Key words:calcium dobesilate; HPLC; bsorption coefficient; UV
　　2，5羟苯磺酸钙（羟苯磺酸钙），是一种微循环血管改善剂，能选择性作用于毛细血管壁，调节和改善毛细血管的渗透性和脆性，主要用于各种原因引起的毛细血管疾病，是目前唯一防治糖尿病视网膜病变的有效药物。
　　目前，对本品的含量测定文献报道的有UV对照品法［1，2］和铈量滴定法［3］，本文建立UV吸收系数法和HPLC法用于本品的含量测定，并与文献方法进行比较分析，现将结果报道如下。
　　1 仪器与试药
　　日本岛津UV2450紫外分光光度计，Waters2996 Series高效液相色谱仪，Mettler100型电子天平。羟苯磺酸钙对照品（质量分数：95.0%，批号：100573-200401，由中国药品生物制品检定所提供），羟苯磺酸钙胶囊（批号：0705301、0705302、0705303，规格：500 mg，由国内某药厂提供），对苯二酚（广州化学试剂厂），甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾为分析纯。
　　2 UV吸收系数法
　　2.1 测定方法
　　取本品20粒内容物，精密称定，研细，混合均匀，精密称取适量（约相当于羟苯磺酸钙100 mg），置100 mL量瓶中，加水适量振摇使溶解，并加水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置200 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，照紫外可见分光光度法（中国药典2005年版二部附录Ⅳ A），在301 nm的波长处测定吸光度；按C12H10CaO10S2的吸收系数为188［4］计算即得。
　　2.2 专属性考察
　　2.2.1 溶剂的选择 根据文献和试验，本品在水中极易溶解，故选用水为溶剂。
　　2.2.2 专属性与测定波长的选择 取羟苯磺酸钙对照品适量，加水溶解并稀释制成每1 mL中约含羟苯磺酸钙25 μg的溶液，照紫外-可见分光光度法，在250～350 nm的波长范围内扫描。另取空白辅料和胶囊壳，同法配置成空白辅料的水溶液，在200～350 nm的波长范围内扫描。图谱见图1。结果表明，羟苯磺酸钙在301 nm波长处有最大吸收；空白辅料和胶囊壳的水溶液在301 nm处无干扰吸收，不影响本品的测定。
　　2.3 线性试验
　　取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.25 mg的溶液，分别精密量取1.0、3.0、5.0、7.0及10.0 mL，各置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别制成每1 mL中含羟苯磺酸钙5、15、25、35及50 μg的供试品溶液，分别于301 nm波长处测定吸光度，以吸光度（A）对质量浓度（ρ）作线性回归，得回归方程：ρ=0.1236A+0.0229，r=0.999 7，n=5，表明羟苯磺酸钙的质量浓度在5～50 μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。
2.4 回收率试验
　　取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每1 mL中含羟苯磺酸钙20、25、30 μg的溶液各3份，在301 nm的波长处测定吸光度，计算，测得平均回收率为99.99%（RSD为0.12%，n=9）。
　　2.5 重复性试验
　　取同一批号（0705301）样品6份，按“2.1”项方法测定含量，结果分别为100.8%、101.2%、100.6%、101.3%、100.7%和100.9%，平均含量为100.9%，RSD为0.3%（n=6）。
　　2.6 稳定性试验
　　取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h测定吸光度，吸光度基本不变，RSD为0.3%。
　　3 HPLC法
　　3.1 色谱条件
　　采用Kromasil C18柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），以0.2%磷酸二氢钾甲醇（体积比90∶10）为流动相，检测波长为301 nm。该色谱条件下，羟苯磺酸钙的理论板数为4800，保留时间约为10 min，对苯二酚的保留时间约为14 min。见图2。
　　3.2 专属性考察
　　3.2.1 酸降解产物的检测 取本品适量，加1 mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成约2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L氢氧化钠溶液中和后，进样，记录色谱图，见图3。
　　HPLC chromatogram of sample in acid solution
　　3.2.2 碱降解产物的检测 取本品适量，加1 mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释制成约2 mg/mL的溶液，放置15 h，加1 mol/L盐酸溶液中和后，进样，记录色谱图，见图4。
　　3.2.3 氧化产物的检测 取本品适量，加3%过氧化氢溶液溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，放置4 h，进样，记录色谱图，见图5。
　　3.2.4 光降解产物的检测
　　取本品适量，加水溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，置4 500 LX光照下照射24 h，进样，记录色谱图，见图6。
　　取本品适量，置4 500 LX光照下照射10 d，加水溶解并稀释制成约1 mg/mL的溶液，进样，记录色谱图，见图7。检测结果显示，各条件下的降解物质在该色谱条件下均能达到较好的分离。

3.3 线性试验
　　取供试品内容物适量，精密称定，用水制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.202 3 mg的溶液，分别精密量取1、5、10、20、35、50及100 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积（A）对进样量（m）作线性回归，得线性回归方程
　　m=1.4648×10-6A-0.03717，r=0.999 9（n=7）。
　　3.4 回收率试验
　　取本品中各空白辅料，按处方比例配制，分别按标示量的80%、100%、120%加入羟苯磺酸钙对照品，加水适量配制成每1 mL中含羟苯磺酸钙0.16、0.2、0.24 mg的溶液各3份，按“3.9”项方法测定，平均回收率为99.67%，RSD为0.41%(n=9)。
　　3.5 精密度试验
　　精密量取供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，测得羟苯磺酸钙峰面积的RSD为0.23%。
　　3.6 重复性试验
　　取同一批号（0705301）样品6份，按“3.9”项方法测定含量，结果分别为100.9%、100.8%、100.8%、100.9%、100.3%和100.3%，平均含量为100.7%，RSD为0.3%（n=6）。
　　3.7 稳定性试验
　　取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10 h进样测定，羟苯磺酸钙的峰面积基本不变，RSD%为0.32%。
　　3.8 方法耐用性考察
　　取3条不同品牌的色谱柱，分别测定，各系统适用性参数见表1。结果表明 ，本方法耐用性良好。表1 方法耐用性考察结果
　　3.9 含量测定方法
　　取本品20粒内容物，精密称定，混合均匀，精密称取适量（约相当于羟苯磺酸钙250 mg），置100 mL量瓶中，加水适量，振摇使溶解后加水稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2 mL，置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取20 μL，注入色谱仪，记录色谱图；另取羟苯磺酸钙对照品20 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
　　4 4种含量测定方法的比较
　　分别采用以上建立的UV吸收系数法、HPLC法和文献报道的UV对照品法［1］及铈量滴定法［2］对3批样品进行含量测定，测定结果见表2。表2 4种含量测定方法的结果比较 标示量
　　5 讨 论
　　5.1 羟苯磺酸钙的分子结构中含有2个酚羟基，决定了其光不稳定性和易氧化等化学性质［4］。为此，本文建立了专属性较高的高效液相色谱法，该方法可有效分离羟苯磺酸钙在合成过程中引入的杂质对苯二酚以及在储存过程中产生的其他降解产物。
　　5.2 从表2的结果分析，铈量滴定法、UV对照品法和UV吸收系数法3种方法的结果基本一致，而HPLC法的结果较前3种方法低约0.3%～1.7%，表明HPLC法对可能存在的降解产物有较好的专属性和分离效果，较其他3种方法更能有效反映产品的真实质量，有利于产品的质量控制和政府监管部门的稽查监督工作。
　　5.3 国家标准收载的铈量滴定法，需要使用剧毒物质三氧化二砷标化滴定液，不利于实验室的管理和环境的保护，建议控制使用或尽量避免使用该方法。
　　5.4 5.5 从HPLC的专属性考察，本品在水溶液中对光的敏感度比固体粉末更强，提示在实验过程中除避免阳光直射外，溶液配制后不宜放置太长时间。
【参考文献】
［1］ 中国药品生物制品检定所.进口药品复核标准汇编［M］.2002.

［2］ BP:2008［S］.2008：351.

［3］ 国家药典委员会.国家药品标准新药转正标准:34册［S］.34-49.

［4］ 王绯，陈英.羟苯磺酸钙有关物质方法的建立［J］.广东药学院学报，2006，22（3）：279-280.

［5］ 陈英.羟苯磺酸钙吸收系数的测定和应用［J］.今日药学，2008，18(4)：32.