关于HPLC法测定丹参酚酸渗透泵片中丹酚酸B的含量

【摘要】 目的 建立测定丹参酚酸渗透泵片中丹酚酸B含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相:甲醇乙腈水甲酸（体积比30∶10∶59∶1），流速1.0 mL·min-1，检测波长286 nm。结果 丹酚酸B的质量浓度在20～80 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 5），精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。结论 本法准确、专属性好、简便，可用于丹参酚酸渗透泵片的质量控制。
【关键词】 高效液相色谱法；丹酚酸B；丹参酚酸渗透泵片
Abstract:Objective To establish an HPLC method for determining the content of salvianolic acid B in salvianolic acid Bbased controlled porosity osmotic pump tablets.Method Salvianolic scid B was analyzed on a Diamonsil C18 column (250 mm×4.6 mm，5μm). The mobile phase consisted of methanolacetonitrilewatermethanoic acid (30∶60∶59∶1) at the flow rate of 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was 286 nm.Results The standard curves of salvianolic acid B were linear over the concentration range of 20-100 μg·mL-1 (r=0.999 5) with satisfied precision， repetition， stability and recovery. Conclusion The method is convenient， accurate and specific， which could be used for the quality control of salvianolic acid Bbased osmotic pump tablets.
　　Key words:HPLC; salvianolic acid B; controlled porosity osmotic pump tablets
丹参酚酸渗透泵控释片的主要有效成分是丹参酚酸，临床上用于治疗冠心病和脑动脉硬化［1］。目前国内在丹参酚酸的开发主要集中在静脉注射粉针。但丹参酚酸静脉注射后在体内分布快，消除快，每天1次静注，给药7 h后，体内药物存留不到1%［2］。如多次静注，顺应性也差。应用渗透泵控释片技术，在12 h内药物零级释放，有利于药物在体内形成平稳的血药浓度，延长药物的有效作用时间，具有良好的临床顺应性和治疗效果。丹参水溶性成分主要由丹酚酸B、丹参素、原儿茶醛、丹酚酸C等［3-4］，以丹参酚酸B（SAB）的含量最高，在药材中约含3%～5%［5］。目前在丹参酚酸的缓控释制剂的研发中，主要是以丹酚酸B作为指标性有效成分来测控释放度。所以建立有效、可靠的丹参酚酸渗透泵控释片中丹参酚酸B的含量测定方法，是丹参酚酸渗透泵控释片研制的前提。
　　1 仪器与试药
　　高效液相色谱仪：LC10ATVP 泵，SPD10AVP紫外检测器（日本SHIMADZU公司）；色谱工作站：HW2000（南京千谱软件有限公司）。
　　丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111562-200504），甲醇、乙腈（DIKMA公司）均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯，丹参酚酸渗透泵片（广东药学院药剂教研室提供，批号：070701，070702，070703，规格：100 mg/片）。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱：Diamonsiol C18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6mm）；流动相:甲醇乙腈水甲酸（体积比33∶10∶60∶1）；流速：1 mL·min-1；温度：室温；检测波长：286 nm；进样量：10 μL。
　　2.2 溶液的制备
　　2.2.1 对照品溶液的制备 称取经五氧化二磷减压干燥24 h的丹酚酸B对照品约5 mg，精密称定，置25 mL棕色量瓶中，用体积分数为50%的甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取粉末约0.3 g，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，加体积分数为50%的甲醇适量，超声处理10 min，放冷，加体积分数为50%的甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置50 mL棕色量瓶中，加体积分数50%的甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
　　2.2.3 阴性对照液的制备 按处方配比称取除丹参酚酸外的其他辅料，按工艺要求，制成不含丹参酚酸的阴性样品，按“2.2.2”项下的方法操作，即得。
　　2.3 系统适用性及专属性试验
　　取对照品溶液、供试品溶液按“2.1”项下色谱条件进样测定，丹酚酸B的保留时间约为14.2 min，理论塔板数不低于4 000，与相邻峰的分离度分别为2.7、5.1，拖尾因子1.11，色谱图见图1。从图1可见，SAB和其他组分分离良好，且阴性无干扰，专属性好。
　　空白辅料(A)、丹酚酸B对照品(B)和丹参酚酸渗透泵片(C)的色谱图
　　Fig.1 HPLC chromatograms of negative control (A) ， salvianolic acid B (B) and salvianolic acid Bbased osmotic pump tablets (C)
　　2.4 线性关系考察
　　称取经五氧化二磷减压干燥24 h的丹酚酸B对照品约10 mg，精密称定，置50 mL棕色量瓶中，用体积分数50%的甲醇稀释至刻度，分别吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置10 mL棕色量瓶中，用体积分数50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为20、40、60、80、100 μg/mL的系列溶液，按“2.1”项下的色谱条件，依次进样10 μL，测定峰面积，以峰面积（A）为纵坐标，对照品质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程

转贴于 　　A=6140.2ρ-2917.2（r=0.999 5）
　　结果表明丹酚酸B的质量浓度在20～80 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
　　2.5 稳定性试验
　　取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、1、2、4、8、12 h测定，结果丹酚酸B峰面积的RSD值为1.9%，表明供试品溶液在12 h内测定结果稳定。
　　2.6 重复性试验
　　取同一批号SAB微孔渗透泵控释片，按“2.2.2”项下操作，配制平行样6份，每次进样10 μL，测定其峰面积的RSD为1.8％。
　　2.7 加样回收率试验
　　取已知含量的SAB微孔渗透泵控释片细粉6份，分别加入对照品适量，按“2.2.2”项下方法处理后，依法测定，结果见表1。表1 丹酚酸B回收率试验结果
　　2.8 样品的含量测定
　　分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，依法测定，外标法计算3批SAB渗透泵片（批号070701，070702，070703）含SAB的平均含量分别为（n＝3）68.5、67.5、67.8 mg/片。
　　3 讨 论
　　3.1 取丹酚酸B对照品溶液进行紫外扫描，得其最大吸收波长为286 nm，确定为本实验的检测波长。
　　3.2 由于丹酚酸B吸水性较强且具有多羟基，稳定性较差，在样品预处理时进行超声时间考查，以超声10 min为宜。
　　3.3 在文献［6］的基础上曾以甲醇5%冰乙酸、甲醇乙腈水36％乙酸以及甲醇乙腈水甲酸以不同比例为流动相，综合各项指标以后者效果最佳，达到分离的目的。
【

参考文献

】
［1］ 中国医学科学院.中草药现代研究:第二册［M］.北京：北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社，1996:472-541.

［2］ 高蕊，张颖，王书臣，等.丹参酚酸盐在健康志愿者的药代动力学和药效学研究［J］.中国临床药理学与治疗学， 2004，9（11）： 1209-1212.

［3］ 周长新.丹参水溶性化学成分的研究［J］.中国药科大学学报，1999，30（6）：411-416.

［4］ 李政雄.丹参中水溶性酚性酸成分的研究［J］.药学通报，1981，16（9）：24-28.

［5］ 游勇基，陈铭辉.高效液相色谱法测定丹参中丹参酚酸B等3种有效成分［J］.中国药学杂志，2003，38（12）：950-951.

［6］ 赵洪芝，卢滨，高钧，等.HPLC法测定丹参中丹酚酸B［J］.中草药，2006，37（1）：131-133.

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