【摘要】 目的 评价化疗对晚期非小细胞肺癌生存期的影响。方法 建立C57BL/6小鼠晚期肺癌模型，实验组采用临床常用的紫杉醇/顺铂联合化疗方案，对照组给予等量生理盐水，观察两组小鼠的生存期、精神状态及体质量变化。结果 实验组较对照组能延长小鼠的生存期，差异有显著性（P&<0.01）；实验组精神状态评分高于对照组，差异有显著性（P&<0.01）；两组小鼠体质量降低程度差异无显著性（P&>0.05）。结论 对于一般状态较好的C57BL/6小鼠晚期非小细胞肺癌，紫杉醇/顺铂联合化疗能延长其生存期，改善生存质量。
【关键词】 Lewis肺腺癌；化疗；生存期；动物模型
Abstract:Objective To assess the utility of paclitaxel and cisplatin to increase the survival time of C57BL/6 mice with advanced non-small cell lung cancer (NSCLC).Methods Advanced lung cancer model was established in C57BL/6 mice. One group was treated with the standard therapeutic regimen of paclitaxel and cisplatin. The control group was injected only with 0.9% isotonic NaCl. Survival time，mental state and weight of each group were recorded.Results The survival time of the experimental group was significantly greater than the control group (P&<0.01). The two groups were not significantly different in weight loss (P&>0.05) and the experimental group had significantly better mental score index than the control group (P&<0.01). Conclusion The combination of paclitaxel and ciplatin can prolong the survival time and improve quality of life of mice with advanced NSCLC.
Key words:Lewis lung carcinoma; chemotherapy; survival time; animal model
肺癌是最常见的死亡率最高的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占80 %以上［1 ］ 。由于80％的肺癌患者在确诊时已属晚期，失去手术机会，化疗为其治疗的主要手段之一。然而，系统化疗在NSCLC治疗中的作用至今仍是肿瘤学中有争议的问题，有关化疗延长NSCLC患者生存期的报告结论不一致，且化疗带来的毒副作用可能令病人难以承受。许多医生认为，晚期肺癌的化疗，其毒性作用可能超过其治疗的益处［2］。因此，化疗对晚期肺癌的意义究竟如何尚需探讨和进一步研究证实，为此笔者对这一问题进行了实验研究。本研究用免疫功能正常的C57BL/6小鼠建立晚期肺癌模型，模拟临床用药，客观评价小鼠的生存期及生存状态等，为临床治疗方案的选择和疗效评价提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 6～7周龄C57BL/6小鼠56只，SPF级，合格证号：SCXK（粤）2006-0015 2006B023 2006A046，体质量15～18 g，雌雄各半，由南方医科大学实验动物中心提供。
1.1.2 瘤株 Lewis肺腺癌细胞株(LLC，来源于C57BL/6小鼠的肺腺癌细胞），购自上海科学院。瘤细胞培养于DMEM高糖完全培养液中。
1.1.3 药物 ①紫杉醇注射液：30 mg/5 mL（海口市制药有限公司生产，批号：国药准字H10980170），以生理盐水配成1.2 mg/mL 浓度的溶液，贮存于4 ℃冰箱备用。②注射用顺铂：10 mg/支（齐鲁制药有限公司生产，批号：国药准字H37021358），以生理盐水配成0.5 mg/mL浓度的溶液贮存于4 ℃冰箱备用。
1.2 方法
1.2.1 晚期肺癌模型的建立及初次给药时间的确定 ①取培养的处于对数生长期的LLC细胞1×107/mL 0.2 mL接种于小鼠右腋皮下，成瘤后于无菌条件下取局部肿瘤组织并称重，将瘤组织(g) 与生理盐水(mL) 以1∶10的比例混合匀浆；将准备好的上述细胞悬液（50 μL/只）原位接种于小鼠左肺。②确定初次给药时间 原位接种后第6、9、11、13天各处死小鼠2只，用以确定小鼠接种后形成晚期肺癌的时间并重复1次；以出现恶性胸水或双肺均有癌结节为晚期（相当于人肺癌ⅢB期或Ⅳ期）。
1.2.2 动物分组 将小鼠随机分成实验组20只，对照组20只，具体给药方案如下:①实验组:接种后第11天化疗（紫杉醇60 mg/kg 第11天一次性给予；顺铂6 mg/kg 第12、14、16天各给药1次），腹腔注射。小鼠用药剂量由人的剂量换算而得［3］ 。②对照组：接种后第11天腹腔注射生理盐水，注射日期及剂量同实验组。观察两组的生存期、体质量变化及精神状态，小鼠质量变化按相对于接种后第11天体质量（给药前体质量）减轻的百分比计算，公式如下:
体质量减轻百分比＝治疗前小鼠体质量－治疗后小鼠体质量/治疗前小鼠体质量×100％
小鼠死亡后，解剖并全身取材观察肿瘤生长及转移情况。
1.3 统计学处理
采用SPSS13.0统计软件，两组小鼠生存率的变化采用Kaplan-Meier法进行生存分析，两组间生存率差异显著性检验用Log rank 检验；两组小鼠精神状态分值的变化及质量的变化采用重复测量数据的方差分析及两样本t检验，以P＜0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 小鼠晚期肺癌模型的建立及病理学观察
左肺原位接种Lewis肺腺癌细胞悬液50 μL/只，接种后均成瘤。接种后第6 、9天左肺表面均可见灰白色节结（见图1 ①、②），部分小鼠可见胸腔积液，虽然涂片中未见肿瘤细胞，但肿物石蜡包埋切片中可见肿瘤组织（见图1 ⑤、⑥）；接种后第11天小鼠双肺可见肿块或出现血性胸水（见图1 ③、④），石蜡切片HE染色可见癌组织（见图1 ⑦）或胸水涂片中可见癌细胞（见图1 ⑧）。
①－④小鼠接种后不同日期的大体表现；⑤－⑦相应的石蜡包埋切片(HE染色×100) ；⑧胸水图片(巴氏染色×400)
图1 小鼠接种后不同日期的大体表现及组织切片、胸水涂片（略）
Fig.1 The gross view，tissue section and hydrothorax smear in the different days after inoculation
2.2 两组小鼠生存期的变化
两组小鼠生存期的变化见图2，化疗组、对照组小鼠的中位生存期分别为22 d、15 d，两组生存率比较差异有显著性（P&<0.01）。
2.3 两组小鼠精神状态的表现
将精神状态分为好、中、差及死亡4个级别，分别记为3、2、1、0分。治疗前两组小鼠的精神状态评分均为3分。各组小鼠的精神状态的分值变化见表1，可见实验组精神状态评分高于对照组，差异有显著性（F＝27.89，P＝0.000）；治疗后第2天小鼠精神状态两组间差异无显著性；治疗后第3～7天，精神状态评分实验组高于对照组，差异有显著性。
图2 两组小鼠的生存曲线图（Kaplan-Meier法）（略）
Fig.2 Survival functions of two groups（Kaplan-Meier methods）
2.4 两组小鼠治疗前后体质量的变化
两组小鼠治疗前后体质量的变化见表2，两组小鼠体质量降低程度差异无显著性（F＝1.719，P＝0.204）；治疗后第2、3天实验组体质量降低程度较对照组明显，差异有显著性。治疗后第4～7天，两组间小鼠体质量降低程度的差异无显著性。
表1 两组治疗后2～7d小鼠精神状态分值的变化（略）
Tab.1 The changes of mental status of mice between two groups on day 2 to 7 after treatment
与实验组比较：﹡P&<0.05，﹟P&<0.01； n为存活小鼠数量（只）
表2 两组治疗后2～7 d小鼠体质量降低程度的变化（略）
Tab.2 The changes of weight loss of mice between two groups on day 2 to 7 after treatment
与实验组比较：﹡P&<0.05，﹟P&<0.01； n为存活小鼠数量（只）
肺癌是常见的恶性肿瘤，数十年来肺癌的发病率和死亡率均明显增高，系统化疗是其主要的治疗方法。然而大部分的晚期非小细胞肺癌目前仍然是不可治愈的，因此晚期肺癌治疗的目的是减轻患者的症状和延长生存时间。由此引发的问题是，既然化疗的毒副作用大又不能治愈病人，那么，是否可不用化疗而采用最好的支持治疗来达到减轻症状和延长生存时间的目的？有关化疗延长NSCLC患者生存期的报告结论不一致，可能与各家采用的治疗方案不同有关。一项包括了207例不能手术切除或已有转移（ⅢB期或Ⅳ期）的NSCLC病人的Ⅲ期临床治疗研究［4］，比较了紫杉醇+最佳支持疗法（best supportive care，BSC）与单用BSC的临床疗效。结果显示，化疗组生存期较BSC组延长（P＝0.026），化疗组2年生存率为12％，而BSC组最长的生存时间为20个月。Fauzia F［5］等的回顾性研究显示：采用一线化疗药物治疗组（n＝335人）的累积生存率明显高于仅接受BSC组（n＝229人），差异有显著性（P&<0.001）。Woods ［6］比较了长春地辛/顺铂与BSC的疗效，其中化疗组97例，对照组91例，中位生存期分别为27周、17周，差异无显著性（P＝0.33）。
目前大多数新的肺癌治疗方法的研究及发展仍依靠动物皮下肿瘤模型，这种模型与肺组织的实际癌肿相差甚远。与皮下生长的肿瘤相比，肺内肿瘤对紫杉醇的敏感性低，因此肺内原位肺癌模型对评价肺癌化疗及其他治疗方法更接近临床实际［7］。
本文采用C57BL/6小鼠肺原位接种方法，建立了晚期肺癌模型，成瘤率为100％，实验组采用目前临床常用且疗效较好的联合化疗方案紫杉醇/顺铂，模拟临床用药。结果显示实验组的中位生存期延长，差异有统计学意义（P&<0.01）。在精神状态方面，实验组精神状态评分高于对照组，差异有显著性（P&<0.01）。在小鼠体质量变化方面，两组小鼠体质量降低程度差异无显著性（P＝0.204），由此可见联合化疗能延长晚期非小细胞肺癌的生存期并提高其生活质量。
本实验还观察到，在小鼠精神状态欠佳、体质量下降时用同样化疗方案给予治疗，小鼠会迅速死亡，这与Ruckdeschel［8］等进行的ECOG临床试验中的结果一致：PS评分为2分者，治疗相关死亡率高达10％，且中位生存期明显降低。
因此并不是所有的ⅢB/Ⅳ期NSCLC病人均适于化疗，对于行为状况评分较好的病人，联合化疗能延长其生存期并提高其生活质量；而对于行为状况评分较差的病人笔者不推荐进行化疗，对这类病人而言，化疗毒副反应大，生存期反而会缩短。
参考文献
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