多因素复合造模法致肺阳虚大鼠模型的研究

　　　　 作者：温慧萍 陈素红 吕圭源 刘建明 苏洁

【摘要】 [目的]探讨肺阳虚大鼠病理模型方法。[方法]采用烟熏(外邪犯肺)、冰水游泳(形寒劳倦)、常温游泳(劳倦)、服用他吧唑冰水溶液(免疫抑制、内饮生冷)多因素复 合造模法来制备肺阳虚证大鼠模型。观测大鼠体征，测定血液流变学指标。[结果]造模后期，大鼠出现喘鸣、呼吸急促、畏寒少动、精神萎靡、毛发凌乱无光泽、饮水量下降等症状;模型大鼠体重、背部温度、肛温、抓力呈显著性下降(P<0.05);低切变率下的全血粘度、全血还原粘度、红细胞刚性指数、电泳指数均显著性升高(P<0.05)。[结论]该造模方法能较好的与肺阳虚之临床症状相吻合，表明该方法是可行的。

【关键词】 肺阳虚;大鼠;血流变

　　Abstract：[Objective]We established a model of LungYang Deficiency.[Methods]The factors such as smoking(exogenous evil effect on lung)，swimming in ice water(cold body and exhaustion)，swimming in common water(exhaustion)，and taking the methimazole ice solution(immune suppression and inhale cold)were adopted to establish this LungYang Deficiency model.SD rats were treated for 35 days，and their physical signs(diet changes，drinking and other typical symptoms)were observed.The hemorheological parameters of the treated animals were measured.[Results]At the later period，rats in the LungYang Deficiency model showed several symptoms，such as wheeze，breathlessness，meanwhile，accompanied with dullness，drinking less water，chill.Compared with the normal group，the body weight and the back temperature of the treated rats were decreased significantly.The whole blood viscosity(WBV)and whole blood reduced viscosity(WBRV)on the low shear rate were significantly increased from the normal.So was found the rigidity finger，deformed finger and electrophoresis finger of RBC parameters.[Conclusion]This model is fit to the clinical investigation of LungYang Deficiency，resulting in that our method for model establishment is feasible.

　　Key words： lungyang deficiency;rats;blood hemorheology

　肺阳虚是由寒邪犯肺，伤及肺阳，以及脏腑功能失调或虚弱等引起的。中医肺阳虚动物模型的研究较少。本实验在参照烟熏结合寒冷刺激建立模型[12]的方法之上予以改进，我们前期实验采用烟熏(外邪犯肺)、冰水游泳(形寒劳倦)、服用他吧唑冰水溶液(免疫抑制、内饮生冷)等复合因素造模，四个模型组小鼠均出现体重增长缓慢，自主活动减少，抓力降低，心、肺指数增加。其中三因素组合对体征以及肺组织和血清MDA、SOD的影响，优于二因素组合;增加冰泳优于服用冰水，抓力下降、心肺指数升高更明显。为进一步观察肺阳虚模型在大鼠上的重现性，我们采用烟熏+冰泳+服他吧唑冰水溶液复合因素造模，观察其对相关指标的影响。

　　1 实验材料

　　1.1 材料 柠檬酸钠(分析纯，上海化学试剂公司，20090527)、甲巯咪唑薄膜衣片(他吧唑)，规格10mg×50，批号5728801，德国默克公司，购自浙江省中医院，配制成0.1mg/ml溶液，冷藏;雄狮过滤嘴香烟(焦油量：10mg、烟气烟碱量：0.8 mg、烟气一氧化碳量：12 mg)，浙江中烟工业有限责任公司)。

　　1.2 动物 健康SD大鼠，雌雄各半，250g，20只，浙江省实验动物中心，合格证号SCXK(浙)20080033。

　　1.3 仪器 烟熏箱(0.6×0.8×1.0m);LP123电子天平：常熟市衡器厂;IMS40全自动雪花制冰机：郑州南北仪器设备有限公司;YLS13A大小鼠抓力测定仪：山东省医学科学院设备供应维修站; THEMOCHECKER(BTM);DTITB电子体温计：上海华辰医用仪表有限公司;LBYN6B自动血液流变学测定仪、PLSF2008血浆粘度计、XC40全自动动态血沉测试仪：北京普利生有限责任公司。

　　2 方法

　　2.1 造模方法 SD大鼠20只，随机分为2组：正常对照组、模型组，每组10只。模型组大鼠置于透明烟熏箱中香烟烟熏20min/d，使其外邪犯肺;接着常温游泳30 min/d，冰水(0±2℃)游泳10min/d，使其劳倦，耗伤阳气;并饮用他吧唑冰水溶液(0.1mg/ml)，使其免疫低下。以上处理，每天一次，连续35天，使其外感于寒、内伤于阳，内外合邪，从而使肺阳虚衰。

　　2.2 指标检测 每日定时称量体重、进食量、饮水量，并观察其一般体征是否有肺阳虚症状(如咳声低弱、皮毛潮湿、乏力少动等)。测定以下指标：①体重：造模前后的体重差异。②于造模第15、24、31天测定背温;第16、25、32天测定肛温。③于温慧萍，等: 多因素复合造模法致肺阳虚大鼠模型的研究

　　造模第5、20、34天测定抓力大小。④35天后，下腔静脉取血，加肝素钠抗凝，取血后4h内测其血液流变学指标。取全血约2ml，测定全血粘度控制切液锥按高切变率(HS，150s-1)、中切变率(MS，50s-1)和低切变率(LS，10s-1)旋转，待转速稳定后测定该切变率下全血粘度(WBV);另取全血约1ml，离心，测定血浆粘度(PV);取全血加入血沉管(不得有气泡)，测定红细胞压积(HCT)、血沉(ESR)、血沉方程K值(K);计算全血还原粘度(BRV)，根据BRV=(WBV-PV)/HCT，得出各切变率(HS、MS、LS)下的BRV;计算红细胞聚集指数(AI)、变形指数(DI)、刚性指数(RI)、电泳指数(EI)，RAI=LS/HS，DI=[1-(PV/HS)0.4]/HCT，RI=(HS-PV)/(PV×HCT)，EI=RAI/HCT。

　　2.3 统计分析 数据以x±s表示，组间比较采用ttest检验。

　　3 结果

　　3.1 一般体征 造模后期大鼠出现喘鸣、呼吸急促、畏寒少动、精神萎靡、毛发凌乱无光泽、扎堆等症状。造模第25与26天，各有只大鼠在造模过程中死亡，解剖时发现腹腔积水，肉眼观察其肺颜色偏暗，可能是因为肺呼吸衰落，呛水导致死亡。

　　3.2 肺阳虚大鼠的体重变化 表1显示造模一个月后，模型组大鼠体重与正常对照组相比，显著性下降(P<0.05)。这与肺气耗损肺气，脾肺有相生关系，日久子盗母气，殃及脾土，土不生金，以致肺脾两虚，则见哮喘气促，面白体瘦，说明造模成功。表1 实验组鼠体重的比较

　　3.3 肺阳虚大鼠饮水变化趋势 由图1可知，模型组大鼠与正常对照组比，后期模型组的大鼠饮水量明显少于正常对照组大鼠。肺阳虚者肺寒气化不行，则通调水道之职失司，痰饮内停，从而不渴，表现为饮水量减少，说明模型的建立与临床症状相吻合，造模成功。图1 实验动物饮水变化趋势图3.4 肺阳虚大鼠的背部体表温度的变化 表2显示，与正常对照组相比，模型对照组的背部温度有降低趋势，造模前期无差异。造模后期模型组体表温度低于正常对照组，呈显著性差异(P<0.05)。肺阳虚因阳虚阴盛，肺失温煦，肌肤失温，故形寒肢冷，其临床的主症之一就是背部畏寒，背部体表温度下降，说明造模成功。表2 实验组鼠体表背部温度的比较

　　3.5 肺阳虚大鼠的肛温的变化 表3显示，与正常对照组相比，模型组大鼠肛温降低(P<0.05)。肺阳虚肺阳不足，阴寒内盛，寒性凝滞，故造模后，大鼠肛温降低，说明机体阳虚，造模成功

　　3.6 肺阳虚大鼠抓力的变化 表4显示，与正常对照组相比，模型组大鼠抓力降低(P<0.05)。提示可能与肺阳虚者卫阳不足，肺寒胸阳不展，温煦无力，肺气无化而更加衰弱有关。表4 对肺阳虚大鼠抓力的影响

　　3.7 对血流变的影响

　　3.7.1 对全血粘度的影响 表5显示：与正常对照组比较，模型对照组低切变率(LS，10s-1)下的全血粘度显著升高(P<0.05);中、高切变率下的全血粘度呈上升趋势。表5 对肺阳虚大鼠三个切变率下全血粘度的影响与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01

　　3.7.2 对全血还原粘度的影响 表6显示：与正常对照组比较，模型对照组低切变率(LS，10s-1)下的全血还原粘度显著升高(P<0.01);中、高切变率下的全血还原粘度呈上升趋势。表6 对肺阳虚大鼠低、中、高切全血还原粘度的影响　与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01

　　3.7.3 对血浆粘度、红细胞压积、血沉、血沉方程K值的影响 表7显示与正常对照组比较，模型对照组的血浆粘度有升高趋势，红细胞压积、血沉、血沉方程K值差异不大。表7 对肺阳虚大鼠血浆粘度、红细胞压积、血沉、血沉方程K值的影响

　　3.7.4 对全血聚集指数、刚性指数、变形指数、电泳指数的影响 表8显示与正常对照组比较，模型对照组的刚性指数、变形指数、电泳指数呈显著性升高(P<0.01)。表8 对肺阳虚大鼠全血聚集指数、刚性指数、变形指数、电泳指数的影响

　　肺朝百脉，主治节，血的运行有赖于肺气的敷布与调节。肺阳虚者，温煦无力，致心血不运，使血液“浓、粘、凝、聚”。从血流变学的研究结果可以看出肺阳虚组大鼠全血比粘度、全血还原粘度、刚性指数、红细胞变形指教比正常组高，有显著性差异(P<0.01)，说明造模成功。

　　4 讨论

　　为进一步观察多因素复合造模方法致肺阳虚模型在大鼠上的重现性，我们采用烟熏+冰泳+服他吧唑复合因素造模，观察其对相关指标的影响。本实验在经典的烟熏与寒冷结合的方法上加以改进，常温游泳30min使其劳倦，耗其阳气;立即予以冰水中游泳10min，给予“形寒劳倦”刺激;在此基础上，我们给予模型组大鼠饮用免疫抑制剂他吧唑冰水溶液(0.1mg/ml)，造成免疫功能低下，脾土虚弱，母病及子(土藏金)，肺阳虚衰。观察指标尽可能符合肺阳虚中医临床：①肺阳虚者，肺气虚冷，阴寒内盛，寒性凝滞，无力温煦机体，故考察大鼠肛温。②阳虚阴盛，肺失温煦，肌肤失温，故形寒肢冷，故考察了其背部温度。③肺阳虚者卫阳不布，倦怠无力，故考察了大鼠抓力。④肺朝百脉，主治节。《医学真传·气血》曰：“人之一身之气，皆气血之所循。”肺阳虚衰，必然导致气血失调，肺阳虚者多寒邪犯肺，导致肺失温煦，寒性凝滞，表现出“血瘀”，故测定血流变。实验结果表明模型组大鼠毛色无光、喘鸣、尿量减少、饮水减少、体重增长缓慢;其背部温度、肛温、抓力显著性降低(P<0.05);其血液低切变率下的全血黏度、全血还原粘度、红细胞刚性指数、电泳指数均显著性升高(P<0.05)。说明该模型符合临床诊断标准主证[3]：喘息气短、背畏寒、四肢不温，沉迟无力或迟缓。

　　综上所述，我们依据其中医病因“形寒饮冷则伤肺，劳倦内伤而耗阳气”，将经典的烟熏与寒冷结合的方法上加以改进，在冰水游泳的基础上增加常温游泳(劳倦)，服用他吧唑冰水溶液(免疫抑制、内饮生冷)来制备肺阳虚证大鼠病理模型。观察指标结果显示，该造模方法能较好的与肺阳虚之临床症状相吻合，表明该方法是可行的。

参考文献

　[1] 王鹏，文小野，赵鸿云，等.肺阳虚证的实验研究[J].湖北中医杂志，1998，20(4)：53.

　　[2] 文小敏，王鹏，刘青，等.“肺阳虚”动物模型的探索[J].中国中医基础医学杂志，1998，4(4)：4547.

　　[3] 董祥，任中代.肺阳虚证与肺心病相关性的临床研究[J].湖北中医杂志，2004，26(2)： 9.