治萎防变胶囊对慢性萎缩性胃炎模型大鼠SOD、GSHPx活性及MDA、LPO含量的影响

　　　　 作者：李万义 段永强 朱立鸣 成映霞

【摘要】 目的 探讨治萎防变胶囊对慢性萎缩性胃炎(CAG)模型大鼠胃组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性及丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)含量的影响。方法 采用综合法成功复制CAG动物模型。施药治疗后分别对各组大鼠胃组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性及丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)含量进行检测。结果 与空白组比较，模型组大鼠胃组织SOD、GSHPx活性显著下降(P&<0.01，P&<0.05)，MDA、LPO含量显著升高(P&<0.01，P&<0.01);与模型组比较，治萎防变胶囊可显著提高SOD、GSHPx活性(P&<0.05，P&<0.05)，显著降低MDA、LPO含量(P&<0.05，P&<0.05)，且以治萎防变胶囊大剂量组作用显著。结论 治萎防变胶囊具有提高机体抗氧化酶活力，减轻自由基损伤和抑制脂质过氧化物反应的作用。

【关键词】 治萎防变胶囊;胃组织;SOD;GSHPx;MDA;LPO

　　【Abstract】 Objective To study effects of Zhiweifangbian capsule (ZWFB) on activity of glutathione peroxidase (GSHPx)， superoxide dismutase (SOD) and content of malondialdehyde (MDA)， lipid peroxidation (LPO) in gastric tissue of rats with chronic atrophic gastritis (CAG). Methods CAG model was established with synthetic method. The effect of ZWFB on activity of SOD， GSHPx and content of MDA， LPO in gastric tissue were observed. Results In successful model group， activity of SOD， GSHPx were much lower than those of normal group (P&<0.01; P&<0.05)， content of MDA， LPO were much higher than those of normal group (P&<0.01; P&<0.01). Compared with model group， ZWFB could increase activity of SOD， GSHPx (P&<0.05; P&<0.05) and decrease content of MDA， LPO (P&<0.01; P&<0.05) significantly. Conclusions ZWFB has functions of elevating antioxidation enzyme activity， lessening free radical impairment and restraining lipid peroxidation.

　　【Key words】 Zhiweifangbian(ZWFB); Gastric tissue; Superoxide dismutase; Glutathione peroxidase; Malondialdehyde; Lipid peroxidation

　　老年慢性萎缩性胃炎(CAG)是消化系统疾病治疗中的难点之一，属于癌前病变。老年CAG病变特别是伴肠上皮化生和异常增生者，其胃癌发生率高达10%〔1〕，而自由基损伤在胃黏膜炎症、萎缩病变中具有重要的诱导作用〔2〕。故研究CAG发生过程中的自由基损伤机制及中药干预效应，对于该病症的防治有着较高的理论价值及临床指导意义。治萎防变胶囊是基于临床效方而研制的疗效确切的医院制剂，主要由党参、枳实、白术、半夏、白花蛇舌草、三七等药味经过提取、分离而组成，主治气虚血瘀型慢性萎缩性胃炎。本研究旨在通过实验观察治萎防变胶囊对CAG大鼠胃组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活力及丙二醛(MDA)、脂质过氧化物(LPO)含量的影响，进一步探讨其防治CAG的作用机制。

　　1 材料与方法

　　1.1 动物造模与分组 Wistar大鼠90只，体重(180±20) g，雌雄各半，标准饲料喂养，均由由甘肃中医学院医学实验中心提供(SPF级动物合格证号：SCXK〔甘〕 200400060000202)。除空白组10只大鼠正常饲养不予造模外，其余大鼠气虚血瘀型CAG造模参照陆为民方法〔3〕。用灭菌水将甲基硝基亚硝基胍(MNNG)配成 0.1 mg/ml的浓度给大鼠自由饮用(避光)，每日配制一次。采用饥饱失常喂养法：2 d足量喂养，1 d禁食。盐酸雷尼替丁胶囊按每天0.03 g/kg 灌胃，每日一次。综合造模60 d后，每隔一周杀检大鼠，胃黏膜做病理检查判定肠化生的情况，至第12周，大鼠胃黏膜肠化生形成后开始治疗。将CAG大鼠按体重编号，用随机数字表法分为模型组、治萎防变胶囊大、中、小剂量组、维酶素组，每组9只，雌雄各半分笼饲养。灌胃给药治疗共90 d。空白组、模型组给予同体积蒸馏水灌胃;治萎防变大、中、小剂量组分别予0.6，0.3和0.15 g·kg-1·d-1治萎防变药剂灌胃(相当于60 kg成人剂量的10倍、5倍和2倍);给予维酶素组0.25 g·kg-1·d-1维酶素灌胃(相当于60 kg成人剂量的5倍)，等效剂量按人与动物体型系数折算〔4〕，给药容积均为 1 ml/100 g体重。

　　1.2 试剂与仪器 治萎防变胶囊，批号061208(甘肃中医学院附院制剂室制备，0.4 g/粒);维酶素，批号060407(山东鲁北药业有限公司，0.2 g/片);考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒，批号20071119;LPO试剂盒，批号：20071120;MDA试剂盒，批号：20071118;SOD试剂盒，批号：20071120;GSHPx试剂盒，批号：20071120(南京建成医学生物研究所);MNNG批号68051，Fluka公司产品;盐酸雷尼替丁胶囊，批号0611025(江西汇仁药业有限公司);DF110型电子分析天平;721型可见光分光光度计;XYJ802离心机;HH4数显恒温水浴箱。

　　1.3 标本采集 CAG造模成功并药物干预后，各组动物于末次灌胃给药后，禁食不禁水24 h，测体重作记录后，全部杀检。胃组织匀浆制备：采血后断头处死，低温条件下快速剖取胃组织，以冰冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重后用眼科小剪刀尽快剪碎，置于匀浆器中，用组织重9倍生理盐水匀浆(匀浆器的末端置于放冰块的冷水中)，后以3 500 r/min离心10 min，取上清液置4℃冰箱保存，待测效应指标。

　　1.4 统计学处理 采用SPSS13.0 统计软件，实验数据以x±s表示，组间样本均数差异的比较选用F检验，在F检验有统计学意义时，进一步用q检验进行两两比较。

　　2 结 果

　　2.1 各组大鼠胃组织SOD活力和MDA含量 与空白组比较，模型组大鼠胃组织SOD含量降低、MDA含量升高(P&<0.01);治萎防变胶囊各剂量组SOD含量升高、MDA含量降低，且以治萎防变胶囊大剂量效果显著(P&<0.05)，见表1。表1 各组大鼠胃组织SOD活力和MDA含量　　表2 各组大鼠胃组织GSHPx活力和LPO含量

　　2.2 各组大鼠胃组织GSHPx活力和LPO含量 如表2所示，与空白组比较，模型组大鼠胃组织GSHPx含量降低、LPO含量升高(P&<0.05，P&<0.01);治萎防变胶囊各剂量组GSHPx计数水平升高、LPO计数水平升降低，且以治萎防变胶囊大剂量效果显著(P&<0.05)。

　　3 讨 论

　　近年来氧自由基(ROS)对胃黏膜致炎、致癌致突变的作用日益受到重视。ROS作用于生物膜上不饱和脂肪酸可产生大量的LPO，可以导致胃黏膜炎症、萎缩甚至异形增生发生。研究表明大鼠受MNNG攻击的早期反应主要是过氧化反应增强〔5〕，蓄积在体内的自由基(FR)可以攻击脂类、蛋白质、核酸，而由磷脂和蛋白质结合生成的脂蛋白为主要成分的生物膜极易受到FR攻击，生物膜的磷脂由于自由基反应而生成LPO，在脂质过氧化的同时还可引起新的FR生成。LPO可分解成MDA，而MDA、LPO易与膜蛋白、膜脂上的Nh3交联形成mchiff′s碱，使生物膜结构发生变化，降低了膜的流动性，使膜功能降低甚至丧失，影响到整个细胞代谢功能、结构的改变，从而引起细胞的老化、死亡。同时FR还能破坏酶的活性，攻击DNA或RNA，造成遗传信息的改变，通过DNA突变等途径诱发癌变〔6〕。在这些损害中，脂质过氧化是FR引起胃黏膜组织损伤的主要机制，LPO代表了脂类与FR反应的中间产物，MDA则是终末产物之一。因此通过测定LPO、MDA水平，可以间接判定自由基的产生、生物活性、病理损伤过程及抗氧化物质对FR活性的抑制等情况。

　　机体具有自由基的清除系统〔7〕，包括低分子清除剂和酶性清除剂两种。SOD、GSHPx是体内自由基清除系统中最重要的酶类，在胃壁细胞内活性很高，其重要意义在于清除h3O2和OH的前身O2，可以歧化O2，生成h3O2从而保护细胞不受毒性FR的损伤，若SOD、GSHPx减少或活性降低，则机体清除FR的能力显著下降，脂质过氧化反应加剧，LPO、MDA等代谢物蓄积〔8〕。

　　治萎防变胶囊主要由党参、枳实、白术、半夏、白花蛇舌草、三七等药味经过提取、分离而组成，主治气虚血瘀型CAG。现代药理研究证明党参〔9〕、枳实〔10〕、白术〔11〕、半夏〔12〕、白花蛇舌草〔13〕、三七〔14〕所含有效成分具有不同程度改善胃肠平滑肌运动、解痉镇痛、抗自由基损伤、抑制血小板聚集、抑杀幽门螺杆菌以及诱导肿瘤细胞凋亡、抗肿瘤的作用。

　　本研究说明CAG状态下所造成的胃损伤已影响到机体氧化/抗氧化系统的不平衡。而CAG造模成功并经药物治疗后，治萎防变胶囊能显著提高GSHPx、SOD活性，显著降低MDA、LPO含量，且以治萎防变胶囊大剂量作用显著，说明治萎防变胶囊具有提高抗氧化酶活性，减轻自由基损伤和抑制脂质过氧化物反应的作用，从而具有拮抗胃黏膜发生炎症、萎缩的作用。

参考文献

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