反应性关节炎患者淋巴细胞亚群和免疫球蛋白检测的临床意义

【摘要】 目的： 研究反应性关节炎(ReA)患者外周血淋巴细胞亚群以及血清免疫球蛋白的变化及临床意义。方法： 采用流式细胞术检测56例ReA患者和53例健康对照组外周血CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD16+56+NK、CD19+B细胞的百分率;免疫比浊法检测血清IgG 、IgA及IgM含量。结果： ReA患者与正常对照组比较，CD4+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴细胞百分率均明显增高(P&<0.01);血清IgG水平升高(P&<0.05);CD15+56+NK细胞百分率明显降低(P&<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴细胞的百分率及血清IgM、IgA含量与正常对照组相比差异无统计学意义。结论： 反应性关节炎患者体内细胞和体液免疫功能紊乱，监测ReA患者体内淋巴细胞亚群和免疫球蛋白水平，对于ReA的免疫治疗具有重要的临床意义。

【关键词】 反应性关节炎; T细胞亚群; NK淋巴细胞; B淋巴细胞; 血清免疫球蛋白

　　[Abstract] Objective: To study the changes of lymphocyte subsets in peripheral blood and serum immunoglobulin of patients with reactive arthritis (ReA) and their clinical significance. Methods： CD3+T， CD4+T， CD8+T，CD16+56+NK， CD19+B positive rate (with flow cytometry) and serum IgG， IgA， IgM levels (with immunoturbidity) were measured in 56 patients with ReA and 53 normal controls. Results： Compared with the normal controls， the percentage of CD4+T lymphocyte，CD4+/CD8+ratio and CD19+B cell percentage increased significantly (P&<0.01) in ReA patients. IgG level slightly increased (P&<0.05). While， NK cell percentage reduced obviously (P&<0.01). There were no statistical difference between ReA patients and normal controls about the levels of CD3+T， CD8+T cell and IgM， IgA (P&>0.05). Conclusion： Cellular and humoral immune function were significantly abnormal in patients with reactive arthritis. Detection of lymphocyte subsets and serum immunoglobulin had important clinical significane for ReA’s immunotherapy.

　　[Key words] reactive arthritis; T lymphocyte subsets; NK lymphocyte; B lymphocyte; serum immunoglobulin

　　反应性关节炎(reactive arthritis， ReA)是在关节外远端部位发生微生物感染后产生的慢性无菌性炎症，其病因与病原体、免疫、遗传有关。该疾病发病机制尚未明确，目前认为其本质上都有抗原微生物侵入黏膜内，而且机体免疫防御系统存在功能紊乱[1]。本研究采用流式细胞技术检测反应性关节炎患者与健康人群外周血T淋巴细胞亚群、NK淋巴细胞及B淋巴细胞百分率，采用免疫比浊法检测血清IgA、IgG、IgM含量，观察ReA患者体内细胞免疫、体液免疫指标的变化和规律，并探讨其临床意义。

　　1 材料和方法

　　1.1 材 料

　　1.1.1 对象 病例来源于2007年9月至2009年10月我院免疫风湿科住院患者。诊断标准符合1990年公布的Amor诊断标准[2]。ReA患者56例，男30例，女26例，年龄25～74岁，中位年龄53岁。正常对照组为53例本院健康体检者，男27例，女26例，年龄17～78岁。

　　1.1.2 试剂 试剂均由BD公司提供，包括:荧光抗体CD3percp/CD4FITC/CD8PE;CD3FITC/CD16+CD56+PE;CD19cy5;溶血素，鞘液等。免疫球蛋白试剂盒由BEHRING 公司提供。

　　1.2 方 法

　　1.2.1 标本采集 抽取病例组和对照组外周静脉血1 ml，注入EDTAK2抗凝管中，室温保存，在24 h内用于流式细胞仪检测;同时抽取4 ml静脉血注入真空采血管中，用于检测血清免疫球蛋白。

　　1.2.2 淋巴细胞亚群检测 取50 μl上述抗凝血分别加入两个试管中，一管加入10 μl荧光抗体CD3percp/CD4FITC/CD8PE;另一管加入荧光抗体CD3FITC/CD16+CD56+PE和CD19cy5各10 μl，充分混匀后避光室温孵育20 min后，每管加入溶血素(1∶10稀释)1 ml，避光放置至透明后1 000 r/min离心5 min，弃去上清液体，加入1 ml PBS洗涤细胞2次，最后加入500 μl PBS溶液混匀直接上流式细胞仪(德国PARTEC公司)检测。

　　1.2.3 免疫球蛋白检测 每个样本分离出血清，在特种蛋白分析仪(德国BEHRING公司)上测定血清中IgG 、IgA、IgM的含量。

　　1.3 统计学处理

　　应用SPSS13.0处理数据，结果以±s表示， t检验比较各组间差异，P&<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 ReA患者的淋巴细胞亚群流式细胞仪检测散点图

　　采用CD3+T为总T细胞，CD3+CD4+T细胞为辅助性T细胞，CD3+CD8+T为抑制性T细胞，CD3-CD16+CD56+为NK细胞，CD19+为B细胞。设门分析各淋巴细胞亚群的百分比。典型检测结果见图1。

　　a为FSC和SSC的散点图，R1区为淋巴细胞区;b为CD3和CD4的散点图，Q2区为辅助性T细胞(CD3+CD4+);c为CD3和CD8的散点图，QA2为抑制性T细胞(CD3+CD8+);d为CD4和CD8的散点图，QB4为CD4+T细胞，QB1为CD8+T细胞;e为CD3和CD19的散点图，Q4为B细胞(CD19+);f为CD16+56和CD3的散点图，QB1为NK细胞(CD3-CD16+56+)。

　　图1 流式细胞仪检测ReA患者外周血淋巴细胞亚群

　　Fig 1 Lymphocyte subsets in peripheral blood with ReA detected by flow cytometry

　　2.2 ReA患者的淋巴细胞亚群检测结果

　　ReA患者CD4+T淋巴细胞百分率、CD4+/CD8+比值及CD19+B淋巴细胞百分率均明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P&<0.01);而CD16+56+NK细胞百分率明显低于正常对照组(P&<0.01);CD3+T、CD8+T淋巴细胞百分率与正常对照组相比差异无统计学意义(P&>0.05)，见表1。表1 ReA患者及正常对照组外周血T淋巴亚群，NK细胞及B细胞水平与对照组比较，a:P&<0.01

　　2.3 ReA患者的免疫球蛋白检测结果

　　ReA患者的血清IgG含量与正常对照组相比明显增高，差异有统计学意义(P&<0.05);血清IgA、IgM水平与正常对照组相比差异无统计学意义(P&>0.05)，见表2。表2 两组血清免疫球蛋白水平与对照组比较，b:P&<0.05

　　3 讨 论

　　T细胞亚群对机体免疫功能的稳定起着重要的调节作用，尤其是辅助性T细胞和抑制性T细胞之间的相互协调与制约，产生适度的免疫应答，使之既能清除异物抗原，又不至于损伤自身组织。CD4+T细胞为辅助/诱导T细胞(Th/Ti)，CD8+T细胞为抑制/杀伤细胞(Ts/CTL)。正常情况下CD4+和CD8+T细胞之间始终保持一恒定的比例，构成宿主细胞免疫调节的重要环节。CD4+与CD8+T细胞的平衡在抑制肿瘤、抗感染和自身免疫性疾病中起着重要作用[3]。本组资料分析了56例反应性关节炎患者的T淋巴细胞亚群，发现ReA患者CD4+T细胞百分率、CD4+/CD8+比值明显升高，CD3+和CD8+T细胞百分率无明显变化，与文献报道的类风湿关节炎(RA)及强直性脊柱炎(AS)结果基本一致[4，5]。这些提示反应性关节炎患者辅助性T细胞数量增多，抑制性T细胞数量相对减少，导致Th细胞功能亢进，Ts细胞抑制功能相对不足，使T细胞的免疫调节网络失衡，引起细胞介导的免疫损伤。

　　免疫球蛋白是由浆细胞合成和分泌的一组能与抗原发生特异性结合的球蛋白，是免疫细胞受到病原微生物等抗原刺激后产生的重要免疫分子。CD19+是B淋巴细胞膜表面标志，B细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞，浆细胞分泌免疫球蛋白进而介导体液免疫。本研究结果显示反应性关节炎患者CD19+B细胞百分率明显升高，血清IgG含量也升高。王喜英等[6]在类风湿关节炎中也有类似的报道。这些表明ReA患者的体液免疫存在一定程度上的亢进，外周血中B细胞明显增多，免疫球蛋白表达失控，产生大量自身抗体，导致免疫病理反应造成组织器官的损伤。

　　CD16+CD56+是NK细胞的标志物，表达的量可能与NK细胞的数量或功能有关。NK细胞作为先天性免疫系统中的重要成分，与先天性和获得性免疫系统其他成分间存在广泛而复杂的相互关系，在机体免疫监视过程中发挥重要功能。Ohtsuka等[7]研究表明系统性红斑狼疮(SLE)患者NK细胞的数量和功能较正常人低下。AzuzLiberman等[8]研究发现AS患者的NK细胞活性被抑制，NK细胞在AS发病机制中起作用。分析本组资料发现ReA患者与对照组相比，NK细胞数量明显降低，提示ReA患者的先天性免疫存在异常，而NK细胞对T、B细胞有协调作用，同时NK细胞还能抑制B细胞的活化，调节抗体的产生，NK细胞的活性降低可导致B细胞过度增殖，因此NK细胞也参与了ReA的发病过程。

　　综上所述，ReA患者体内CD4+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值明显增高，B细胞及血清免疫球蛋白的水平升高，NK细胞数量明显降低。这些免疫指标显示ReA患者体内细胞免疫紊乱，体液免疫增强，天然免疫功能低下。故监测ReA患者外周血淋巴亚群和免疫球蛋白有助于了解机体的免疫状态，对于我们寻找有效方法重建免疫平衡，调节患者体内免疫失衡状态，治疗反应性关节炎，具有一定的临床价值。

参考文献

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　　[8] AzuzLieberman N， Markel G， Mizrahi S， et al. The involvement of NK cells in ankylosing spondylitis[J]. Int Immunol，2005， 17(7): 837-845.