HPLC法测定辽宁地区苦碟子中腺苷的含量

　　　　　　 作者：王凤秋，刘志梅，张建军，胡德奇

【摘要】 目的：建立高效液相色谱法测定苦碟子中腺苷含量的方法。方法：色谱柱为C18(250　mm×4.6　mm，5　μm)，流动相为乙腈-水(9∶91)，检测波长260　nm，流速为1.0　ml/min。结果：腺苷进样量在0.070～0.70　μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r2=0.9998);平均回收率为97.6%，RSD=0.72%(n=5)。结论：本方法简便、准确、重现性好，可用于苦碟子的质量控制。

【关键词】 苦碟子;腺苷;样品含量测定;HPLC

　　AbstractObjective：To　establish　a　method　for　quantitative　determination　of　adenosine　in　Ixeris　by　HPLC.Method：HPLC　was　performed　on　a　column　of　Phenomenex　Gemini　C18　(250　mm　×4.6　mm，5　μm)，and　Acetonitrilewater　(9∶91)　as　a　mobilephase　was　used，detection　wavelength　at　260　nm　and　flow　rate　was　1.0　ml/min.Results：The　method　had　good　linear　relationship　with　integral　value　and　the　peak　area　in　the　rage　of　0.070～0.70　μg，the　correlation　coefficient　(r2)　was　0.9998.　The　average　recovery　rate　was　97.6%，RSD　was　0.72%　(n=5).Conclusion：The　method　is　simple，accurate　and　reappearance.　It　can　be　used　for　quality　control　of　Ixeris.

　　Key wordsIxeris;adenosine;determination　of the　content of sample;HPLC

　　苦碟子为菊科植物抱茎苦荬菜[Ixeris　sonchifolia(Bge.)Hance]　的当年生干燥全草，分布我国的东北、内蒙古等地，具有清热解毒、排脓痛之功效，临床用于治疗冠心病、脑梗塞等疾病，疗效显著。腺苷为苦碟子的主要有效成分，能抑制血小板聚集，明显增加纤维蛋白酶活性，对冠心病、实验性心肌梗死有明显的治疗作用[1]。本文建立了HPLC方法测定苦碟子药材中腺苷含量，方法准确、可靠，可用于苦碟子的质量控制[2]。

　　1 仪器与试药

　　高效液相色谱仪：日本岛津LC6A;紫外检测器：日本岛津SPD6AV;色谱柱：DIKMA　C18，N2000色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司);超声波发生器：上海精密科学仪器有限公司;电子分析天平：上海精密科学仪器有限公司FA2004B，日本岛津AEL40SM。腺苷对照品：中国药品制品检定所(批号：110879200202);乙腈为色谱纯(山东禹王，批号：080211)。苦碟子药材均由辽宁中医药大学职业技术学院栽培教研室张建军老师采摘自辽宁地区，并经本院胡德奇副教授鉴定。

　　2 方法与结果

　　2.1 溶液制备

　　2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取腺苷对照品10.94　mg，置于25　ml量瓶中，用纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀(0.4376　mg/ml);再精密吸取2　ml，置于25　ml量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀，即得(35.0　μg/ml　)。

　　2.1.2 供试品溶液的制备 取干燥本品全草，粉碎，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水50　ml，密塞，超声40min，过滤，浓缩，用水定容至10　ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45　μm)滤过，取续滤液即得。

　　2.2 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：C18柱(250　mm×4.6　mm，5　μm，迪马公司);流动相：乙腈-水(9∶91);检测波长：260　nm;流速：1.0　ml/min;柱温：室温;理论塔板数按腺苷峰计算不低于3　000。在上述色谱条件下，对照品和样品的色谱图见图1。

　2.3 线性关系的考察 精密吸取对照品溶液(35　μg/ml)2，4，6，8，10，12　μl分别进样，以峰面积对进样量线性回归，回归方程为：Y=92246X　+101279，r2=0.9998。结果表明腺苷进样量在0.070～0.70　μg　范围内与峰面积呈良好的线性关系。

　　2.4 供试品溶液精密度实验 按供试品溶液制备方法操作，制备样品。精密吸取溶液10　μl，重复进样6次，记录色谱图，结果峰面积RSD=0.59%，表明色谱系统精密度良好。

　　2.5 样品稳定性实验 精密吸取苦碟子药材的供试品溶液，分别在0，2，4，6，8，10，12　h进样，记录色谱图，结果峰面积的RSD为0.91%，实验表明供试品制备后，溶液在12h内色谱峰无明显变化，样品稳定性良好。

　　2.6 方法重复性试验 精密称取苦碟子药材粉末5份，照“2.1.2”项下方法操作，测得腺苷平均含量为0.275　mg/g，RSD=0.55%。

　　2.7 方法回收率试验 精密称取已知腺苷含量(0.275　mg/g)药材5份，每份1.0　g，分别精密加入对照品溶液(0.4376　mg/ml)0.5　ml，制备成供试品溶液，进行测定，计算回收率。结果见表1。表1 苦碟子方法回收率试验样品重

　　2.8 样品含量测定 分别取辽宁地区不同地点的苦碟子药材，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10　μl注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行分析测定，用外标法计算各样品中腺苷含量。结果表明，苦碟子药材产地不同其腺苷含量有一定差异。样品测定结果见表2。表2 不同产地苦碟子药材中腺苷含量ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦ产地海城下林海城东四牛庄桓仁锦州朝阳上河叶柏寿含量

　　3 讨论

　　样品提取条件考察时，曾比较用水煎煮、20%乙醇、甲醇溶液分别回流提取、超声提取，结果以超声提取方法简便，测得的含量较高，故选择用超声提取样品。流动相的选择：综合考虑文献报道的条件，采取了甲醇-水(9∶91)、乙腈-水(6∶91)、乙腈-水(9∶91)，结果以乙腈-水(9∶91)分离时间和效果最好，故选择此流动相。通过精密度、稳定性、回收率等相关实验，证明所建立的方法可行，可用于苦碟子药材中腺苷的含量测定。

　　本实验的药材为原产地药材，采摘于五月末，用全草。不同部位的腺苷含量的差异应继续研究，以便在投药生产中有的放矢，提高药品的疗效。

参考文献