【摘要】 目的 观察蠲痛饮对子宫内膜异位症(EMS)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响，并探讨其治疗EMS的作用机理。方法 采用自体子宫内膜移植法建立EMS大鼠模型，将60只大鼠随机分为蠲痛饮高、中、低剂量组及丹那唑组、模型组、空白组6组，药物组分别给予蠲痛饮高、中、低剂量(4.29、1.43、0.48 g/100 g)和丹那唑(2.15 mg/100 g)灌胃，模型组及空白组按照1 mL/(100 g?d)给予生理盐水灌胃，观察药物对EMS大鼠血清VEGF的影响。结果 丹那唑组和不同剂量蠲痛饮对大鼠异位组织体积大小的影响，与模型组比较差异有统计学意义(P&<0.05)。蠲痛饮高、中剂量降低EMS大鼠血清VEGF的水平，与模型组比较差异有统计学意义(P&<0.05)。结论 蠲痛饮可通过降低EMS大鼠血清VEGF水平，抑制异位组织的血管生成而抑制异位子宫内膜的发展，从而达到治疗EMS的目的。
【关键词】 子宫内膜异位症;蠲痛饮;血管内皮生长因子;大鼠
Abstract：Objective To research the effect of the influence of Juantongyin (JTY) on VEGF of endometriotic rats. Methods To observe the effect of high-dose， middle-dose， low-dose JTY and danazol on serum VEGF of endometriotic rats through setting up endometriosis model with rat self-endometria transplantation. Sixty rats were pided into 6 groups randomly：JTY high-dose group (4.29 g/100 g)， middle-dose group (1.43 g/100 g)， low-dose group (0.48 g/100 g)， and danazol group (2.15 mg/100 g)， model group and control group [1 mL/100 (g?d) of saline]. Result There was a marked persity among model group and other groups (P&<0.05) of the ectopic tissue volume. There was a marked persity among high， middle-dose group and model group of serum VEGF levels of endometriotic rats. Conclusion JTY can inhibit the growth of endometrial transplants through reducing VEGF serum level of endometriotic rats.
Key words：endometriosis;Juantongyin;vascular endothelial growth factor;rat
子宫内膜异位症(endometriosis，EMS)是生育期妇女常见的疾病，本病患者80%有痛经、50%合并不孕[1]，严重影响患者的生活质量。近年研究表明，血管生成是EMS发生、发展的重要环节[2]。本研究通过观察蠲痛饮对EMS大鼠血管内皮生长因子(VEGF)的影响，探讨蠲痛饮对其治疗作用的机制。
1 材料与方法
1.1 主要试剂与仪器
人VEGF ELISA试剂盒，购自美国UNIONHONEST公司，批号QRCT-302221EIATL。郑州博赛公司Biocell2010酶标仪，上海新波生物技术有限公司;Egate2310全自动微孔洗涤机，广州市丰华生物工程有限公司;Dem3型洗板机。
1.2 药物
蠲痛饮主要由鸡血藤、丹参、当归、川芎、赤芍、补骨脂、白术、土茯苓、泽兰、血竭、田七、炙甘草组成，购于广西中医学院附属瑞康医院，按原方药物比例水煎浓缩，配制成含原药材1.33 g/mL混悬液，放于4 ℃冰箱保存，剂量按动物与人
临床用药剂量换算公式算出。丹那唑胶囊，200 mg/粒，上海华联制药有限公司生产，批号020301。
1.3 动物
清洁级雌性成熟未交配过的Wistar大鼠60只，体重150～180 g，广西医科大学实验动物中心提供。合格证号：SCXK桂2003-0003。常规饲养。
1.4 造模、分组及给药
雌性Wistar大鼠60只，随机抽取10只作为空白组，其余50只随机分为蠲痛饮高、中、低剂量组及丹那唑组、模型组5组，进行子宫内膜异位症造模。造模大鼠适应性饲养1周后，连续5 d行阴道脱落细胞学检查，择动情期行造模术，采用大鼠自体内膜子宫内膜异位症造模方法[3]。造膜4周末，空白组及造模大鼠各随机取6只做相关检测(以移植物有血管形成、积液高度&>2 mm、送检证实内膜成活作为模型成功的标准)证实EMS形成。造模成功后开始给药，剂量按动物与人临床用药剂量换算公式算出，其中蠲痛饮高、中、低剂量组分别给予4.29、1.43、0.48 g/100 g蠲痛饮灌胃(相当于成人临床用药量等效量的4、2、1倍)[4]，丹那唑组以2.15 mg/100 g(相当于成人临床用药量等效量的2倍)丹那唑混悬液灌胃，模型组及空白组按照1 mL/(100 g?d)给予生理盐水，1次/d，连续灌胃4周。
1.5 指标检测
末次给药后，禁食不禁水12 h，5%水合氯醛(0.07 mL/kg)腹腔注射麻醉大鼠。打开腹腔，暴露异位组织，游标卡尺测量组织体积大小;股静脉采血，酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测血清VEGF含量。由专人严格遵照试剂盒说明书进行操作，每份标本测2孔，取其平均值，根据标准曲线求出VEGF水平。
1.6 统计学方法
所有数据以—x±s表示，采用SPSS13.0软件进行统计分析， 计量资料采用方差分析。
2 结果
(见表1、表2)表1 蠲痛饮对EMS大鼠异位组织体积的影响表2 蠲痛饮对EMS大鼠血清VEGF含量的影响
3 讨论
目前，EMS的病因中“经血逆流学说”被广泛接受。近来研究表明，内膜要成功地异位种植，“粘附、侵袭和血管新生”是三个必不可少的环节，血管生成是子宫内膜异位种植存活和EMS发生的基本条件[5]，通过抑制异位内膜血管生成治疗EMS已经成为此领域的研究热点。VEGF作为关键的血管形成刺激因子，在血管发生和形成过程中起着中枢性的调控作用，它是一种特异地作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子，与内皮细胞上的KDR和Flt-1受体高亲和力结合后可作为内皮细胞特异性有丝分裂原[6]，诱导内皮细胞增生、毛细血管袢形成;同时还可增加微血管通透性[7]，通过诱导间质产生促进体内新血管的生成，其他多肽因子有可能最终都是通过它而发挥血管形成的调节作用。
EMS属中医“癥瘕”范畴。全国名老中医班秀文教授根据本病所导致的痛经、不孕等主症，以及现代医学对局部病灶病理变化(增生、浸润、复发、结节)的认识，以“湿、瘀”立论，提出“湿与瘀相互搏结，阻滞胞宫胞脉”的病机特征，而湿瘀的形成又与肝、脾、肾功能失调有密切关系。根据病因病机的认识，采用蠲痛饮治疗本病。方中以《金匮要略》当归芍药散为基础方加减而成。当归芍药散是治疗“妇人腹中诸疼痛”的著名方剂，现代药理学研究表明其有镇痛、抗炎、缓解平滑肌痉挛、降低血粘度、改善微循环及促排卵、促黄体功能作用[8]。方中鸡血藤、丹参、当归、川芎、赤芍补血行血，补而不滞，补中有行，恰合女子血常不足、易虚易瘀特征，以扶正驱邪;补骨脂、白术、土茯苓温肾健脾利湿，合泽兰既能化瘀，又能利湿，使湿祛瘀化，且药物甘淡平和，利湿而不伤阴;血竭、田七化瘀散结止痛;炙甘草合芍药即为《伤寒论》芍药甘草汤，经临床及实验研究证实为缓急止痛要药[9]。以上诸药组成蠲痛饮，不仅承袭了经方当归芍药散调和肝脾、化瘀利湿的功用，且强化了温肾化瘀助孕、行气止痛散结的功效。
实验结果表明，模型组种植异位内膜组织后血清VEGF的水平明显高于正常对照组，提示VEGF在异位子宫内膜的生长、发育中起重要作用。蠲痛饮可通过降低EMS大鼠血清VEGF水平，抑制异位组织的血管生成而达到抑制异位子宫内膜的发展，这可能是蠲痛饮临床有效治疗子宫内膜异位症的途径之一。
参考文献
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