【摘要】 ：目的 建立颈宁胶囊中葛根素的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，甲醇-0.2%磷酸水溶液(20∶80)为流动相，检测波长为250 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃。结果 葛根素溶液浓度范围在6.268～125.360 μg/mL时与峰面积之间呈良好线性关系(r＝0.999 8)，平均回收率为101.42%，RSD＝1.22%(n＝9)。结论 该法具有良好的准确性、精密性，方法简便，结果可靠，可用于颈宁胶囊的质量控制。
【关键词】 颈宁胶囊 高效液相色谱法 葛根素
Abstract：Objective To establish a method for determination of puerarin content in Jingning capsule. Methods The column was Kromasil (250 mm×4. 6 mm， 5 μm). The mobile phase consisted of methanol- 0.2% water H3PO4 (20/80)， with flow rate of 1 mL/min and the UV detective wavelength set at 250 nm. Results Puerarin showed a good linear at the range of 6.268～125.360 μg/mL (r＝0.999 8). The average recovery was 101.42%， with RSD of 1.22%. Conclusion This method is accurate， simple， repeatable and suitable for the determination of puerarin content in Jingning capsule.
Key words：Jingning capsule；HPLC；puerarin
颈宁胶囊由葛根、黄芪、党参、白芍、生地黄等18味中药材经提取等工艺制成，具有活血通络、散风止痛的功能，用于治疗风湿瘀阻所致的颈椎病，症见头晕、颈项僵硬、肩背酸痛、手臂麻木。葛根为方中主药之一，其主要活性成分为葛根素。为了有效控制该药的质量，根据本方特点，采用高效液相色谱法，测定颈宁胶囊中葛根素的含量。该法操作简单，重现性好。
1 仪器与试药
Waters 515高效液相色谱仪；电子天平(Mettler Toledo AG285)；KQ-500E型医用超声清洗器(昆山超声仪器有限公司)。葛根素对照品(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号110752-200209)；颈宁胶囊(自制，中试批号为031103、031105、031107)。
甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂)；其余所用试剂均为分析纯，均购自上海化学试剂有限公司；水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(20∶80)；流速1.0 mL/min；检测波长250 nm；柱温30 ℃；理论板数以葛根素峰计算不低于2 000。
2.2 溶液的制备
精密称取经105 ℃干燥4 h后的葛根素对照品15.67 mg ，置50 mL量瓶中，加甲醇使溶解后定容，即得对照品贮备液(313.4 μg/mL)。
取装量差异项下本品内容物，研细，于80 ℃恒温干燥30 min，放冷后取约0.4 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，密塞，超声处理(功率160 W，频率50 kHz)30 min，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过后得供试品溶液。
按处方比例配成缺葛根的颈宁胶囊，然后按供试品溶液的制备方法制备阴性对照液，按上述色谱条件测定。结果阴性对照液未出现葛根素峰，表明颈宁胶囊中其它成分对葛根中的葛根素测定无干扰，见图1。
2.3 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液0.5、1、2、4、8、10 mL置25 mL量瓶中，加甲醇定容后摇匀，得对照品溶液。分别吸取10 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。以葛根素峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y＝42 338.010 1X－34 586.500 89(r＝0.999 8)。结果表明，葛根素在6.268～125.360 μg/mL范围内线性关系良好。
2.4 精密度试验
精密吸取同一对照品溶液，各10 μL，连续进样6次，记录葛根素峰面积，结果RSD＝0.58%，表明仪器精密度良好。
2.5 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μL，每隔2 h进样1次，比较10 h内葛根素的峰面积变化情况，结果RSD＝1.0%(n＝6)，表明样品溶液在10 h内基本稳定。
2.6 重复性试验
取同一批号颈宁胶囊，按“2.2”项下方法制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，精密吸取10 μL，测定葛根素的含量，结果葛根素平均含量为6.92 mg/g，RSD＝0.85%，表明本法重复性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取葛根素对照品31.81 mg，用甲醇溶解并定容于25 mL量瓶中作为对照品溶液(C＝1.272 4 mg/mL)。另取同一批号颈宁胶囊内容物9份(各约0.2 g)，研细，精密称取，置50 mL量瓶中，分别精密加入上述葛根素对照品溶液0.8、1.0、1.2 mL，并加甲醇定容。分别精密吸取上述供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，计算加样回收率，结果见表1，总体回收率为101.42%， RSD＝1.22%。表1 加样回收率试验结果(略)
2.8 样品中葛根素的含量测定
取颈宁胶囊3批样品(批号031103、031105、031107)，按上述色谱条件及供试品溶液制备的方法进行含量测定，3批样品平行测定3次，结果见表2。表2 颈宁胶囊中葛根素的含量测定(略)
3 讨论
试验最初选用2005年版《中华人民共和国药典》(一部)色谱条件，结果峰形不理想。由于葛根素含有酚羟基，具有一定酸性，易电离，加入酸后，峰形对称，分离度好。以
参考文献
[1-2]方法对流动相中体系比例进行调整，由甲醇-水-磷酸(25∶75∶0.2)调至甲醇-0.2%的磷酸水溶液(24∶76)，结果表明，以甲醇- 0.2%的磷酸水溶液(20∶80)为流动相分离效果较好。我们进行了超声提取15、30、45、60 min的比较，结果表明，超声处理30 min，样品中葛根素基本提取完全。
【参考文献
】
[1] 宿 结，杨晓云，吴爱英.HPLC法测定天乐胶囊中的葛根素含量[J].中国临床药学杂志，2003，12(2)：94.
[2] 林少华，赫玉芳，南敏伦，等.高效液相色谱法测定降脂减肥颗粒中葛根素的含量[J].时珍国医国药，2006，17(2)：205.