关于玉丹荣心颗粒对小鼠免疫功能的影响

【摘要】 ：目的 探讨玉丹荣心颗粒对小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能的调节作用。方法 将小鼠随机分为正常组、Cy(环磷酰胺)模型组、玉丹荣心丸组、玉丹荣心颗粒组，分别观察玉丹荣心颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能、2，4-二硝基氯苯(DNCB)所致迟发性超敏反应、鸡红细胞(CRBC)致敏小鼠溶血素抗体生成的影响。结果 玉丹荣心颗粒与Cy模型组相比，巨噬细胞吞噬能力提高(P&<0.01)，DNCB所致迟发性超敏反应增强(P&<0.01)，血清溶血素抗体水平增加(P&<0.01)。结论 玉丹荣心颗粒可在一定程度上增强Cy所致免疫功能低下小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能。

【关键词】 玉丹荣心颗粒　免疫功能　小鼠

　　Abstract：Objective To investigate the influence of Yudan Rongxin Keli on immunoregulation in mice. Methods The mice were randomly pided into the normal group， cyclophosphamide (Cy) model group， Yudan Rongxin Pill group and Yudan Rongxin Keli group. The effects of Yudan Rongxin Keli on the phagocytosis of macrophage in mouse abdomen， delayed-type hypersensitivity (DTH) induced by dinitrochlorobenzene (NDCB)， and generation of hemolysin antibody induced by chicken red blood cell (CRBC) were observed respectively. Result Compare with the Cy model group， the phagocytosis of macrophage in Yudan Rongxin Keli group was promoted (P&<0.01)， DTH induced by DNCB was enhanced (P&<0.01) and the level of hemolysin antibody was increased (P&<0.01). Conclusion Yudan Rongxn Keli has the promotive effect on nonspecific and specific immunity in mice with hypoimmunity induced by Cy.

　　Key words：Yudan Rongxin Keli；immune function；mice

　 玉丹荣心颗粒是上海玉丹药业有限公司生产的中药制剂，是玉丹荣心丸的改良剂型。为了探讨玉丹荣心颗粒对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响，笔者于2006年5－8月进行了此实验研究，现报道如下。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　 120只８周龄Balb/c健康雄性小鼠，体重18～22 g，中国医学科学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK-2005-0013，层流架内饲养。

　　1.2 药物

　 玉丹荣心颗粒，上海玉丹药业有限公司生产，批号20060303。玉丹荣心丸，上海玉丹药业有限公司生产，批号20060303。

　　1.3 试剂
　　
　　环磷酰胺(Cy)，规格200 mg/支，山西普德药业有限公司生产，批号2006.1.2；肝素钠1 250万U/支，天津生物化学制药厂生产，批号20060309；甲醇，分析纯，北京化工厂生产，批号2002.12；丙酮，分析纯，北京化工厂生产；生理盐水，北京双鹤药业有限公司生产；姬姆萨染液，粉针，美国Sigma公司生产，自己配制；鸡红细胞(CRBC)悬液，鸡血取自北京华都肉鸡场，按文献[1]方法配制；补体(豚鼠血清)冻干，0.3 g/支，购于北京药品生物制品检定所，批号20060408；2，4-二硝基氯苯(DNCB)， Aldrich Chemical Co. Ltd。

　　1.4 仪器

　 Olympus显微镜；离心机；Tcl-16 g台式高速离心机；分光光度计LG721，山东高密电子仪器厂；离心机IEC Centra CL2；37 ℃恒温箱NAPCO 5410；天平(1/10万)Sartorius；打孔器，KW-trio 97AO。

　　2 方法与结果

　　2.1 分组与给药

　　　实验设正常组、Cy模型组、玉丹荣心丸组、玉丹荣心颗粒组，按小鼠体重随机分组，每组10只。正常组和Cy模型组每日经口灌胃蒸馏水0.5 mL/次，玉丹荣心丸组和玉丹荣心颗粒组经口灌胃玉丹荣心颗粒20 mg/(g·d)，相当于临床用量20倍。各组每日给药2次，连续14 d，10 d起除正常组外，其它各组均皮下注射Cy 40 mg/(kg·d)[1]，每日1次，共3 d。

　　2.2 统计学方法

　　　采用SPSS11.0统计软件包。计量资料以—x±s表示，组间比较采用方差分析，以P&<0.05为有显著性差异。

　　2.3 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

　　各组经口灌胃给药后第14天，腹腔注射5% CRBC悬液0.4 mL/只。8 h后将小鼠颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，腹部消毒，剪开皮肤，0.9%氯化钠溶液2.5 mL反复冲洗腹腔。然后将腹腔内液体全部吸出，放入离心管中，1 000 r/min离心5 min。离心后留少许细胞悬液混匀，滴到载玻片上，3 min后将多余液体冲掉，以丙酮-甲醇液(1∶1)固定5 min，用姬姆萨染液染色3 min，晾干后油镜观察。每片计数200个巨噬细胞，按下式计算巨噬细胞吞噬率与吞噬指数[2]。结果见表1。表1 玉丹荣心颗粒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(略)注：与Cy组比较，**P&<0.01(下同)
　　
　　吞噬率(%)＝吞噬CRBC的巨噬细胞数/200个巨噬细胞×100%
　　
　　吞噬指数＝被吞噬的CRBC总数/200个巨噬细胞

　　2.4 对2，4-二硝基氯苯所致小鼠迟发性超敏反应的影响

　　　各组小鼠首次给药后第4天，用大宝化妆品有限公司生产的腋毛脱毛剂在小鼠颈部皮肤上涂抹，5.0% DNCB丙酮溶液20 μL/只致敏。给药第10天起除正常组外，其它各组均皮下注射Cy 40 mg/(kg·d)，共3次。各组灌胃给药后第14天，在小鼠右耳两侧均匀涂抹2.5% DNCB丙酮溶液20 μL/只进行攻击。24 h后，颈部脱位处死各组小鼠，用打孔器(直径7 mm)在左右相同部位打下耳片，1/10万天平称重，以左右耳片重量差(肿胀度)表示迟发型过敏反应的强度[2]。结果见表2。表2 玉丹荣心颗粒对DNCB所致小鼠迟发性超敏反应的影响(略)

　　2.5 对鸡红细胞致敏小鼠溶血素抗体生成的影响
　　
　　首次灌胃第4天，各组小鼠腹腔注射5% CRBC悬液0.4 mL/只进行免疫。各组灌胃给药后第14 d，摘眼球取血于离心管中，室温下放置1 h后，2 000 r/min离心(离心机IEC Centra CL2)，10 min后取血清。用生理盐水稀释100倍，取小鼠血清20 μL加生理盐水1 980 μL配成2 mL，取稀释血清1 mL，与5% CRBC悬液0.5 mL、10%补体(豚鼠血清)0.5 mL混合，在37 ℃恒温箱中保温30 min后，0 ℃冰箱30 min中止反应。离心，取上清液于分光光度计540 nm处比色，另用生理盐水代替血清做空白对照，取其上清液作为比色时调零的基准。以光密度值作为血清溶血素的指标[2]。结果见表3。表3 玉丹荣心颗粒对CRBC致敏小鼠血清溶血素抗体生成的影响(略)

　　3 讨论
　　
　　机体的免疫由特异性免疫和非特异性免疫所组成。非特异性免疫是特异性免疫的基础，特异性免疫所产生的免疫物质又能增强非特异性免疫的作用，因此，增强机体的非特异性免疫对提高机体的整个免疫功能意义重大。巨噬细胞是一类重要的免疫调节细胞，不仅能吞噬病原和异物，参与非特异性免疫反应，而且能分泌补体、酶和干扰素等近百种生物活性物质，对 NK细胞、B细胞进行双向调节，激发T、B淋巴细胞产生免疫应答，参与特异性免疫反应。鸡红细胞对鼠类是一种较强的抗原性异物，当其被注入小鼠腹腔后，可引起腹腔巨噬细胞聚集并吞噬，这是一项机体非特异性免疫功能的主要指标，因此可用以检测药物对机体防御能力的影响。血清溶血素测定是了解受试药物对动物特异性免疫功能影响的实验，溶血素水平反映了体液免疫能力，溶血素的含量与机体体液免疫能力呈正相关。DNCB诱导的小鼠迟发型超敏反应是由特异性致敏效应T细胞介导的细胞免疫反应，其中的T细胞在排斥移植物抗宿主病、自身免疫和肿瘤免疫等方面起着关键作用，是检测细胞免疫功能的常用方法之一[2]。

　 本实验结果表明，Cy组小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬率及吞噬指数、迟发性超敏反应强度、血清溶血素水平均低于正常对照组，说明免疫抑制模型小鼠造模成功。玉丹荣心颗粒组和荣心丸组，腹腔巨噬细胞的吞噬率及吞噬指数均高于Cy模型组小鼠(P&<0.01)，血清溶血素也较Cy模型组小鼠增加(P&<0.01)，说明玉丹荣心颗粒和玉丹荣心丸能明显提高Cy所致免疫功能低下模型小鼠的非特异性免疫功能，还可促进小鼠特异性体液免疫。Cy模型组小鼠迟发型超敏反应明显减弱，而玉丹荣心颗粒和荣心丸组的耳肿胀程度超过正常水平(P&<0.01)，提示玉丹荣心颗粒能拮抗Cy降低的DTH，显著恢复免疫功能低下小鼠的迟发型超敏反应。因此认为，玉丹荣心颗粒可在一定程度上增强Cy所致免疫功能低下小鼠非特异性免疫和特异性免疫功能。

　 本实验表明，玉丹荣心颗粒和玉丹荣心丸均可以提高机体的免疫功能，两者之间比较没有显著差异(P&>0.1)。玉丹荣心颗粒是玉丹荣心丸的改良剂型，口感好，便于服用。

参考文献