作者：刘振华，李炳奇，刘红，袁军，魏磊
【摘要】 目的 寻找在超声条件下从促生长散中提取水溶性成分的优化条件并进行含量测定。方法 在单因素实验的基础上采取正交设计法，以超声时间、提取温度、固液比及提取次数为因素，每个因素3个水平，选择L9(34)正交表，用酸碱滴定法测定有机酸含量作为综合评价指标。结果 该提取实验影响因素:为提取次数&>提取时间&>提取温度&>固液比。结论 最佳提取条件为：超声时间20 min，超声温度45 ℃，固液比1∶10，提取次数3次。
【关键词】 促生长散；超声提取；正交实验；含量测定；有机酸
Abstract：Objective To optimize the extracting condition of water-soluble component from herbal medicine of promoted growth and determine the content of organic acid. Methods With the content of organic acid as the index， ultrasonic time， extracting temperature， ratio of solid and liquid and extracting times were screened by L9 (34) orthogonal test on the basis of single factor test. Results The effect factors of the extracting condition were as follows：extracting times&>extracting time&>extracting temperature&>ratio of solid and liquid. Conclusion The best extracting condition was that ultrasonic time of 20 min， temperature of 45 ℃， ratio of solid and liquid of 1∶10， and extracting 3 times.
Key words：ultrasonic extraction；orthogonal experiment；content determition；organic acid
促生长散是一种纯中药制剂，由山楂、甘草、地榆等中药材组成，含有较多的水溶性成分，主要成分为有机酸[1-2]，多年来应用效果良好。但尚存在很多不足：口感差、药效发挥时间慢、有效成分利用率低、产品易发霉变质、不易贮存、质量可控性差等。为了提高促生长散产品的科技含量，实现产品 稳定、高效、可控的质量要求，本研究拟采用超声辅助技术对促生长散中的水溶性成分进行提取，为有效成分的高效利用奠定基础。
1 实验材料
1.1 主要仪器
LD隆达HF-2.5B超声循环提取机(北京弘祥降生物技术开发有限公司)，碱式滴定管(50 mL)，TDL-5台式离心机(上海安亭仪器厂)，电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)，DL-360A超声仪(上海之信仪器有限公司)，RE52-05旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)，SHZ-CB型循环水式多用真空泵(河南巩义市英峪宁华仪器厂)，ZK-82A型电热真空干燥箱(上海实验仪器厂有限公司)。
1.2 药物和试剂
促生长散(石河子大学化学化工学院提供)，NaOH(A.R)、邻苯二甲酸氢钾(A.R)、蒸馏水、酚酞指示剂，石河子医药公司提供。
2 实验方法
2.1 含量测定
促生长散中含有较多的水溶性成分，主要来源于山楂、甘草、地榆等，均含有有机酸，参照《中华人民共和国药典》(一部)山楂项下的含量测定方法，用氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)滴定，即得，每1 mL氢氧化钠滴定液(0.1 mol/L)相当于6.4O4 mg的枸橼酸计算有机酸含量。
2.2 单因素试验
2.2.1 超声时间
取促生长散10.00 g，溶剂100 mL，在25 ℃下进行超声提取，每5 min取样1次，测定滴定的NaOH的体积，并算出有机酸的含量。
2.2.2 超声温度
取促生长散10.00 g，溶剂100 mL，在30 min提取1次的条件下，分别在25、35、45、55、65 ℃的条件下提取并测定滴定用的NaOH体积，算出有机酸的含量。
2.2.3 超声次数
超声次数不同提取效果不同。试验发现超声次数太多，浪费溶剂，提高成本，而且给后处理带来困难；超声次数太少，不能充分提取出有效成分。在对大量文献资料综合分析的基础上，结合试验具体情况，选定超声次数为1、2、3次进行正交实验。
2.2.4 固液比
固液比不同提取效果不同。试验发现固液比太大，影响超声提取器的循环和搅拌；固液比太小浪费溶剂，提高成本，而且给后处理带来困难。在对大量文献资料综合分析的基础上，结合试验具体情况，选定固液比为1∶8、1∶10和1∶12进行正交实验。
2.3 正交试验
在对以上单因素分析和试验的基础上，对影响有机酸提取效果的几个因素，着重考察超声时间(A)、超声温度(B)、固液比(C)、提取次数(D)4个因素，每个因素3个水平(具体试验因素及水平见表1)，用L9(34)进行正交实验设计，选择最佳的提取条件。表1 因素水平表（略）
3 结果
3.1 单因素实验
3.1.1 超声时间对提取效果的影响
根据超声单因素试验，平行测定3次的条件下研究出提取时间对有机酸含量的影响。随着提取时间的增加，有机酸的含量也在增加，25 min后增长趋缓，因此选择20 min左右进行正交实验。
3.1.2 超声温度对提取效果的影响
根据超声单因素试验，平行测定3次的条件下研究出提取温度对有机酸含量的影响。随着提取温度的升高，有机酸的含量也在增加，45 ℃后增长趋缓，因此选择35 ℃左右进行正交实验。
3.2 正交实验设计
在单因素影响的基础上，为探讨各条件参数的相互影响，试验中设计了四因素三水平正交试验，确定应用L9(34)进行正交实验设计。结果见表1、表2。表2 L9(34)正交设计及结果（略）
表中因素A(时间)它的3个水平所对应的提取百分含量以第2水平的数值为最大，所以取它的第2水平最好；因素B(温度)以第3水平的数值为最大；因素C(固液比)以第2水平的数值为最大；因素D(提取次数)以第3水平的数值为最大。
实验结果表明，有机酸的最佳提取条件是A2B3C2D3，即超声时间20 min，超声温度45 ℃，固液比1∶10，提取次数3次。根据极差分析影响有机酸的提取因素大小为：次数&>时间&>温度&>固液比。该提取工艺影响因素最大的是提取次数，影响因素最小的是固液比。
3.3 验证实验
取促生长散10.00 g，溶剂100 mL。根据筛选得到的最佳提取条件A2B1C2D3平行提取3次，分别测定有机酸的含量。结果见表3。表3 验证实验结果（略）
经验证实验，根据最佳的提取条件所测得的有机酸的含量均大于正交设计中的含量。
4 结论
促生长散中水溶性成分的最佳提取条件为：超声时间20 min，超声温度45 ℃，固液比1∶10，提取次数3次。促生长散中水溶性成分主要来源于组方中的山楂、甘草、地榆等，所以本实验采用有机酸为评价指标，方法简便，合理可行。
参考文献
[1] 张秀杰，潘明宽.地榆中游离及水解的没食子酸含量测定[J].山东医药工业，2002，21(5)：15－16.
[2] 张峻松，贾春晓，张文叶，等.山楂中有机酸的定量分析研究[J].中州大学学报，2003，20(3)：119－120