关于胃癌组织 Survivin和VEGFC的表达及意义

　　　　　　 作者：赵光兵 宋修岐 孙少杰

【摘要】 目的 研究Survivin及血管内皮生长因子C(VEGFC)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学方法检测62例胃癌及20例正常胃黏膜组织中Survivin及VEGFC的表达，并分析其与肿瘤组织学类型、临床分期、浸润深度和淋巴结转移的关系。结果 Survivin和VEGFC在胃癌组织中阳性表达率分别为69.4%(43/62)和75.8%(47/62)，在正常胃黏膜组织中表达的阳性率为10.0%(2/20)和20.0%(4/20)，两组比较差异有显著性(χ2=21.50、20.02，P&<0.05)。胃癌组织中Survivin及VEGFC的表达与肿瘤临床分期、浸润深度、细胞分化和有无淋巴结转移密切相关(χ2=4.30～11.13，P&<0.05)。结论 Survivin与VEGFC共同参与了胃癌的发生、发展过程，检测其表达可作为判断胃癌预后的客观指标。
【关键词】 胃肿瘤;基因，Survivin;血管内皮生长因子C;免疫组织化学
[ABSTRACT] Objective To investigate the expression of Survivin and vascular endothelial growth factorC (VEGFC) in gastric carcinoma and its clinical significance. Methods Immunohistochemical technique was used to determine the expression of Survivin and VEGFC protein in 62 patients with gastric carcinoma and 20 specimens of normal gastric tissue. The relationship between the gene expression and histology type， TNM stage， depth of infiltration， and lymph node metastasis was analyzed. Results The positive expression of Survivin and VEGFC in gastric carcinoma was 69.4% (43/62) and 75.8% (47/62)， respectively. In normal gastric tissue， the expression of Survivin and VEGFC was 10.0% (2/20) and 20.0% (4/20). The difference between the two groups was significant (χ2=21.50， 20.02;P&<0.05). In the cancer tissue， the expression of Survivin and VEGFC was closely related to TNM stage， depth of invasion， cell differentiation and lymph node metastasis (χ2=4.30-11.13，P&<0.05).Conclusion Both survivin and VEGFC involve in occurrence and development of gastric carcinoma， a detection of the expression may be used as an objective index for predicting the prognosis of this disease.
　　[KEY WORDS] Stomach neoplasms; Gene， survivin; Vascular endothelial growth factor C; Immunohistochemistry
　　Survivin基因是近年新发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员，能抑制细胞凋亡、促进细胞增殖，与肿瘤的发生、发展密切相关[1]。血管内皮生长因子C(VEGFC)属血管内皮生长因子家族成员，是胚胎组织和成熟个体淋巴管生成的惟一调节因子，介导淋巴管生成，与肿瘤转移有密切关系[2]。本文采用SABC免疫组织化学方法检测原发性胃癌组织中Survivin和VEGFC蛋白的表达，探讨这两种蛋白表达与原发性胃癌临床病理特征的关系。
　　1 材料和方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 标本及其来源 胃癌组织标本62例，取自我院2008年1～10月行胃癌根治术病人，男39例，女23例，年龄23～80岁，平均(61.02±13.06)岁。其中未分化癌和低分化癌32例，中分化和高分化癌30例;依据1997年IUCC分期标准进行TNM分期，Ⅰ期8例，Ⅱ期19例，Ⅲ期24 例，Ⅳ期11例;有淋巴结转移39例，无淋巴结转移23例;未侵及浆膜者29例，侵及浆膜者33例。取同期的正常胃黏膜组织胃镜标本20例作为对照。组织标本均经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。
　　1.1.2 试剂 兔抗人Survivin多克隆抗体购自福州迈新生物技术公司，兔抗人VEGFC多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
　　1.2 Survivin和VEGFC蛋白表达检测
　　采用SABC法免疫组化染色技术，严格按照试剂盒说明书进行操作，以PBS代替一抗作为阴性对照，以已知的胃癌阳性切片作为阳性对照。
　　1.3 免疫组化染色结果判定
　　Survivin、VEGFC阳性染色位于细胞浆内，呈棕黄色颗粒状。参照文献[3]的方法，先按染色强度计分：0分为无色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为棕褐色(染色强度需与背景着色相对比);再按阳性细胞所占的百分比计分：0分为阴性，1分为阳性细胞≤10%，2分为阳性细胞11%～50%，3分为阳性细胞51%～75%，4分为阳性细胞&>75%。以染色强度与阳性细胞百分比计分的乘积≥2分作为免疫反应阳性(+)。
　　1.4 统计学处理
　　数据间比较采用四格表χ2检验。
　　2 结 果
　　2.1 Survivin和VEGFC蛋白在胃癌组织和正常胃黏膜组织中的表达比较
　　胃癌组织和正常胃黏膜组织中均可见Survivin和VEGFC蛋白染色阳性细胞。胃癌组织中Survivin阳性表达率为69.4%(43/62)，正常胃黏膜组织中Survivin阳性表达率为10.0%(2/20)，两者比较差异有显著性(χ2=21.50，P&<0.05)。胃癌组织中VEGFC阳性表达率为75.8%(47/62)，正常胃黏膜组织中VEGFC阳性表达率为20.0%(4/20)，两者相比较差异有显著性(χ2=20.02，P&<0.05)。
　　2.2 Survivin和VEGFC蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系
　　Survivin和VEGFC蛋白的表达与胃癌病人的年龄、性别无关，与组织学类型、临床分期、浸润深度和有无淋巴结转移相关(χ2=4.29～11.13，P&<0.05)。见表1。
　　2.3 胃癌组织中Survivin与VEGFC蛋白表达的关系
　　在胃癌Survivin阳性表达的43例中，VEGFC阳性表达37例(86.0%);在Survivin阴性表达的19例中，VEGFC阳性表达10例(52.6%)，两者比较差异有显著性(χ2=8.02，P&<0.05)。
　　3 讨 论
　　Survivin是IAP家族的一个新成员[4]，是迄今发现的最强的凋亡抑制因子。它不但通过直接或间接抑制凋亡效应蛋白酶Caspase3、Caspase7活化来阻断由凋亡基因和化疗药物等引起的细胞凋亡过程[5]，而且还能激活CDK2cyclinE复合物，使Rb磷酸化，促进细胞增殖。因此，Survivin具有调控细表1 Survivin和VEGFC蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系[例(χ%)]临床病理特征nSurvivin阳性表达χ2PVEGFC
　　胞分裂和抑制凋亡双重功能，能通过多种机制参与肿瘤的发生、发展过程。Survivin基因在正常组织中不表达或低表达，而在几乎所有被研究的肿瘤组织中呈高表达，这一特点使其可能成为判断肿瘤病人预后及辅助肿瘤诊断的一项重要指标，也为肿瘤的诊断和治疗提供了新的靶点[6]。STAUBER等[7]研究显示，Survivin基因表达强度与胃癌临床分期、分化程度及淋巴结转移相关，病人临床分期愈晚，组织分级恶性程度越高，其Survivin基因表达的阳性率愈高。而MIYACHI 等[8]研究结果显示，Survivin mRNA表达与胃癌组织学分型及浸润深度无关，但与淋巴结转移密切相关，认为Survivin mRNA表达的增强出现在胃癌发生的早期，且其表达水平的高低可作为判断胃癌病人淋巴结转移潜能高低的指标。SARELA等[9]研究144例结肠癌病人表明，Survivin表达阳性病人术后5年生存率显著低于表达阴性病人，并且其术后复发率及复发后病死率均显著高于后者。本研究结果显示，在胃癌组织中Survivin阳性表达率为69.4%，而正常胃黏膜组织中Survivin 阳性表达率为10.0%，二者间差异有显著性，提示Survivin表达阳性是胃癌发生过程中的重要分子事件。本研究分析Survivin表达水平与与胃癌临床病理参数的关系显示，Survivin表达水平除与胃癌临床分期、分化程度及淋巴结转移相关外，还与胃癌浸润深度相关，由于这4项均为与病人预后相关的因素，故推测Survivin高表达是胃癌预后不良的标志之一。检测胃癌组织中Survivin表达，不仅对判断肿瘤的发生、临床进展、恶性程度和预测病人预后是一种重要的分子生物学参考指标，而且可能成为肿瘤基因诊断性标志物和肿瘤治疗的新靶点

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　　有关胃癌中Survivin与VEGFC蛋白表达的相关性研究文献尚少见报道。本研究结果显示，在Survivin阳性和阴性的胃癌组织中，VEGFC阳性表达率分别为86.0%和52.6%，两者差异有显著性。提示两者表达上调可能在胃癌发生发展过程中具有协同作用，也说明胃癌的形成和转移是由多种基因或多种因子共同作用的结果。这为进一步研究肿瘤的分子机制以及进一步探索肿瘤治疗方案提供了有价值的线索。
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