关于穿山龙治疗急性痛风性关节炎的效果

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　　　　　　作者：吕婧 苗志敏 阎胜利 李长贵 王颜刚

【摘要】 目的 研究穿山龙对由尿酸钠晶体所致急性痛风性关节炎的治疗作用。方法 56只大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱组和穿山龙A组（15 g·kg-1·d-1）、B组（12 g·kg-1·d-1）、C组（6 g·kg-1·d-1）及D组（3 g ·kg-1·d-1）。将50 g/L的尿酸钠溶液50 μL注入大鼠右侧踝关节腔，建立急性痛风性关节炎模型。观察造模后2、4、6、8、10、24、48和72 h右踝关节同一部位的周径、肿胀及活动情况。造模后72 h后取血，观察血浆白细胞计数，检测血清白细胞介素1β的含量。结果 造模后各组大鼠关节均肿胀，其中以模型组最为明显。各药物治疗组各时间点关节肿胀程度较模型组均有不同程度的下降，穿山龙各剂量组下降幅度由低剂量向高剂量依次增加，其中穿山龙A、B组关节肿胀程度与模型组及秋水仙碱组比较，差异有显著性（F=4.359～37.568，q=7.84～28.57，P&<0.05）。与模型组相比，穿山龙各剂量组白细胞计数和白细胞介素1β的含量均有不同程度的下降（F=4.041、4.656，q=8.27～32.79，P&<0.05）。结论 中、高剂量穿山龙对急性痛风性关节炎有一定的治疗作用，其疗效具有一定的剂量依赖性。
【关键词】 穿山龙；关节炎，痛风性；治疗结果
［ABSTRACT］ Objective To assess the therapeutic effect of Dioscorea nipponica Makino (DNM) on rats with acute gouty arthritis (AGA) caused by uric acid crystals. Methods Fiftysix rats were randomly pided into seven groups as control group， model group， colchicine group， DNMA (15 g·kg-1·d-1)， B (12 g·kg-1·d-1)， C (6 g·kg-1·d-1) and D (3 g·kg-1·d-1) groups. An AGA model was constructed by injecting with 50 μL (50 g/L) sodium urate solution into a right ankle joint cavity. The circumference， swelling and movement of the right ankles were observed at 2 h， 4 h， 6 h， 8 h， 10 h， 24 h， 48 h and 72 h after the completion of the model. Blood samples were taken at 72 h for WBC and serum interleukin1 β detection. Results The joints of experimental rats were swelling， the most were seen in the model group. The swelling of ankles in various treatment groups at various time points alleviated in some extent， the improvement of swelling was along with the increase of the dosages of DNM， in which， the differences of swelling between DNMA， DNMB and model as well as colchicine groups were significant (F=4.359-37.568，q=7.84-28.57，P&<0.05). Compared with the AGA model group， WBC and interleukin1 β in DNM groups were lower in some extent (F=4.041，4.656;q=8.27-32.79;P&<0.05). Conclusion The medium and highdose DNM can effectively control acute gouty arthritis and its effect is dose dependent.
　　［KEY WORDS］ Dioscorea nipponica; Arthritis， gouty; Treatment outcome
　　随着生活水平的提高，痛风的患病率不断增加。急性痛风性关节炎是痛风最常见的表现形式[1]。目前，治疗急性痛风发作的药物主要有非甾体消炎药（NSAID）、秋水仙碱、糖皮质激素等，但其药物不良反应多。中药治疗急性痛风性关节炎日益引起关注。本文建立大鼠急性痛风性关节炎模型，应用穿山龙进行治疗，观察其疗效。现将结果报告如下。
　　1　　 材料与方法
　　1.1　　 实验材料
　　1.1.1　　 实验动物　　 健康雄性Wistar大鼠56只，10周龄，体质量（200±20）g，由青岛市实验动物和动物实验中心提供，实验前适应性喂养1周，饮食、饮水、活动正常，无不良反应即开始实验。整个实验过程中大鼠均自由摄食和饮水。
　　1.1.2　　 主要试剂　　 穿山龙中药饮片（毫州市凯利中药饮片有限公司生产），尿酸(Alfa Aesat)，秋水仙碱片（西双版纳版纳药业有限责任公司生产），吐温80（Sigma 分装，C283），大鼠白细胞介素1β（IL1β）酶联免疫吸附反应检测试剂盒（R&&D 分装）。
　　1.2　　 实验方法　　
　　1.2.1　　 药物准备　　 ①穿山龙：取穿山龙中药饮片300 g，水煎煮3次，过滤，合并滤液，文火蒸发水分，浓缩为100 mL，消毒后封瓶，4 ℃冰箱保存备用，实验时再加水稀释至所需浓度。②秋水仙碱乳悬液：取秋水仙碱片，研钵研细，电子天平称质量，用8 g/L 羧甲基纤维素钠（CMCNa）配成终浓度为80 mg/L的乳悬液。③ 尿酸钠晶体制备：在无菌条件下将1 mol/L的NaOH 6 mL和1 g尿酸钠加194 mL的高压后蒸馏水并煮沸，使尿酸钠完全溶解，搅拌，自然降温，滴入1 mol/L的HCl至pH值7.0，4 ℃冰箱保存24 h。弃上清，生理盐水洗涤沉淀3次，滤纸将沉淀物水分吸干后，置于70 ℃干燥箱烘2 h，将粉末研细，用孔径250 μm的金属筛过筛，装瓶备用。④尿酸钠溶液的制备：实验前将尿酸钠结晶置于180 ℃烤箱烘烤2 h，用体积分数0.95乙醇洗涤离心（4 250 r/min，15 min）3次，室温自然干燥，取500 mg尿酸钠结晶加9 mL生理盐水、1 mL吐温80加热搅拌，配制成50 g/L尿酸钠溶液10 mL。
　　1.2.2　　 实验分组及给药方法　　 将56只大鼠随机分为对照组、模型组、秋水仙碱组和穿山龙A组（15 g·kg-1·d-1）、B组（12 g·kg-1·d-1）、C组（6 g·kg-1·d-1）及D组（3 g·kg-1·d-1）。每组8只。穿山龙各剂量组于造模前2 d开始灌胃，每天1次，连续灌胃5 d。秋水仙碱组造模后开始给药，连续灌胃3 d。对照组和模型组造模后灌胃给等量的蒸馏水，连续3 d。
　　1.2.3　　 大鼠急性痛风性关节炎模型的建立　　 以碘附消毒大鼠右侧踝关节后，用6号注射针从背侧以45 ℃方向插入胫骨肌腱内侧，将50 μL的50 g/L尿酸钠溶液注入踝关节腔，伸曲、旋转运动5 min。对照组大鼠关节腔注入50 μL灭菌生理盐水。
　　1.2.4　　 观察指标及评价方法　　 观察指标包括大鼠精神状况，右踝关节同一部位的周径、肿胀情况、颜色、皮温及活动情况，并计算关节肿胀度。关节肿胀度计算：用3 mm宽纸条和游标卡尺测量实验前和造模后2、4、6、8、10、24、48和72 h右踝关节同一部位的周径，计算造模后与造模前右踝关节周径差值。
　　1.2.5　　 白细胞计数和血清IL1β的检测　　 大鼠造模后72 h，用30 g/L戊巴比妥钠0.3 mL麻醉后心脏取血，1 mL入EDTA抗凝管，其余注入普通管。抗凝血用CELLDYN1700细胞计数仪2 h内进行白细胞计数。非抗凝血37 ℃温育30 min，5 000 r/mim离心15 min，取上清置于-70 ℃冰箱冻存以备进行IL1β检测。IL1β检测采用ELISA法，严格按照试剂说明书进行操作。
　　1.3　　 统计学分析
　　采用SPSS 11.5统计软件进行数据处理，计量资料以±s表示。各组均数间比较采用oneway ANOVA分析，组间两两比较采用SNK检验。等级资料先转化为秩，再进行分析。
　　2　　 结 果
　　2.1　　 一般情况
　　入组大鼠56只，均进入结果分析，无脱失数值。造模后大鼠明显烦躁不安，右踝关节有明显的红、肿、热，且伴有功能障碍，活动受限。对照组无明显烦躁表现，关节与造模前相比略有增粗，无明显红、热及功能障碍的表现。
　　2.2　　 各组大鼠关节肿胀程度的比较
　　造模后各组大鼠关节均出现肿胀，且8～12 h达到高峰，其中以模型组最为明显。造模后2～72 h秋水仙碱组和穿山龙各剂量组大鼠关节肿胀程度与模型组相比，均有不同程度的下降，且穿山龙各剂量组下降幅度由低剂量向高剂量依次增加，穿山龙A组和B组关节肿胀程度明显低于模型组及秋水仙碱组，差异有显著性（F=4.359～37.568，q=7.84～32.34，P&<0.05）。见表1。表1 各组大鼠造模后关节肿胀程度比较
　　2.3　　 各组大鼠白细胞计数及IL1β比较
　　造模后72 h模型组、秋水仙碱组、穿山龙各剂量组大鼠白细胞计数及IL1β均高于对照组，以模 型组最高，差异有显著意义（F=4.041、4.656，q=5.13～36.34，P&<0.05）；穿山龙A组、B组和秋水仙碱组大鼠白细胞计数及IL1β均低于模型组，差异有显著性（q=8.27～32.79，P&<0.05）。见表2。表2　　 造模后72 h各组大鼠血浆白细胞计数与血清IL1β的比较

3　　 讨 论
　　急性痛风性关节炎是以关节及其周围组织的尿酸钠结晶沉积为特征。关节腔内尿酸钠结晶诱发急性炎症反应，引起中性粒细胞浸润、活化及一系列炎症因子的产生，从而导致组织破坏[2]。尿酸钠晶体被单核细胞吞噬后激活NALP3 炎性复合体(包括NALP3、ASC、Caspase1)，Caspase1可将无活性的白细胞介素1（IL1）转化有活性的IL1β[3]。IL1β是前炎症网络中的一级细胞因子，呈双峰状态[4]，作为炎症趋化因子和激活因子在痛风性关节炎的发生、发展过程中发挥关键作用[5，6]。关节腔内注入尿酸钠晶体制备急性痛风性关节炎病变模型，其病理表现与临床极为相似，为急性痛风性关节炎的经典造模方法，该法简单、造模迅速、成功率高。本文利用尿酸钠造模后大鼠关节出现红、肿、热和功能障碍等急性痛风性关节炎的表现，关节肿胀8～12 h达到高峰，该动物模型较充分地模拟了人类急性痛风性关节炎的发病过程[7，8]。本文结果显示，造模后各组血清IL1β含量明显高于对照组，提示由尿酸钠晶体成功诱导急性痛风性关节炎模型[9，10]。
　　目前，治疗急性痛风发作的药物主要有秋水仙碱、NSAID、糖皮质激素等，秋水仙碱治疗痛风主要与其抑制中性粒细胞的迁移、抑制单核细胞吞噬尿酸盐结晶及吞噬后的炎症因子的分泌作用有关。但因其安全范围低，起效剂量与引发胃肠道不良反应剂量非常接近，不良反应报道极多。NSAID类药物治疗痛风时其抗炎作用主要是通过对COX2的抑制，而绝大多数副作用尤其是胃肠道毒性多数病人不能耐受。应用糖皮质激素系统的初始化治疗急性痛风可引起关节炎红肿反弹。上述种种副作用使它们临床应用受到一定限制。
　　中药对痛风的治疗作用，目前引起人们的关注。本实验所用的穿山龙又称穿地龙、穿龙薯蕷，属薯蕷科，多年生缠绕藤本，味苦，性平，归肝肺经。功效祛风除湿，活血通络，止咳平喘。主要用于风寒湿痹、肌肤麻木、筋骨疼痛、关节屈伸不利，以及跌打损伤、瘀滞作痛、冠心病、痰多咳喘等症，单用煎服或浸酒服。临床用于治疗急性痛风性关节炎屡获疗效。
　　本实验设对照组、模型组、秋水仙碱组和不同剂量穿山龙药物干预组，检测急性痛风性关节炎造模关节的肿胀程度、血浆白细胞计数及血清IL1β的含量。因穿山龙为中药制剂，起效较慢，故在造模前2 d提前给药，以便在炎症高峰时与秋水仙碱疗效进行比较。结果显示，穿山龙抑制尿酸钠晶体引发的关节肿胀程度呈剂量依赖性，中、高剂量组优于秋水仙碱组，血浆中白细胞数量均有不同程度的下降，血清中IL1β的含量也有不同程度的下降，穿山龙各剂量组下降幅度由低剂量向高剂量依次增加，且高剂量组下降程度高于秋水仙碱组。
　　综上所述，中、高剂量穿山龙对急性痛风性关节炎有一定的治疗作用，其作用可能是通过抑制白细胞的生成和痛风性关节炎病理过程中重要的炎症递质IL1β的分泌实现的。本实验为痛风性关节炎的治疗提供了新的思路。

参考文献

[1]PASCUAL E， PEDRAZ T. Gout [J]. Curr Opi Rheumato， 2004，16(3):282286.

[2]MATSUKAWA A， YOSHIMURA T， MAEDA T， et al.Analysis of the cytokine network among tumor necrosis factor alpha， interleukin1 beta， interleukin8， and interleukin1 receptor antagonist in monosodium urate crycstalinduced rabbit arthritis[J]. Lab Invest， 1998，78(5):559569.

[3]FBBIO M， VIRGINIE P， ANNICK M， et al. Goutassociated uric acid crystals activate the NALP3 inflammasome[J]. Nature， 2006，440(9):237241.

[4]FUJIWARA K， OHKAWARA S， TAKAYI K， et al. Involvement of CXC chemokine growthrelated oncogenealpha in monosodium urate crycstalinduced arthritis in rabbits[J]. Lab Invest， 2002，82(10):12971304.

[5]CHAPMAN P T， YARWOOD H， HARRISON A A， et al. Endothelial activation in monosodium urare. Monohvrdrate crystalinduced inflammation: in vitro and in vivo studies on the roles of tumor necrosis factor alpha and interleukin1 [J]. Arthritis Rhem， 1997，4D(5):955965.

[6]王秋琴. 痛风证治探讨[J]. 中国中医骨伤科杂志， 1999，7(4):52.

[7]HUANG H C， SUN Y F， HU M， et al. Characteristics of monosodium urate monohydiate crystalinduced acute arthritis in rats that minicked human gouty arthritis[J]. Bull AcndMil Med Sci， 2005，29(G):538542.

[8]王静，苗志敏，李长贵. 高尿酸血症大鼠肾小管上皮细胞OAT3表达的变化[J]. 青岛大学医学院学报， 2008，44(4):298300.

[9]AKAHOSHI I T， NAMAI R， MURAKAMI Y， et al. Rapid induction of peroxisome proliferatoractivated receptor gamma expression in human monocyctes by monosodium urate monohydrate cyrcstals[J]. Arthritis Rhem， 2003，48(1):231239.

[10]LANDIS R C， YAGNIK D R， FLOREC O， et al. Safe disposal of inflammatory monosodium urate monohcdrate crystals by differentiated macrophages[J]. Arthritis Rheum， 2002，46(11):30263033.