【摘要】 目的 观察白芷香豆素（CAD）的镇痛作用和身体依赖性。方法 采用热板法、扭体法观察CAD的镇痛作用；用小鼠跳跃反应实验、小鼠竖尾反应实验观察CAD的身体依赖性，并用耐受性实验考察其耐受性。结果 CAD 30、60、120 mg/kg对物理、化学等伤害性刺激的镇痛作用确切，作用维持时间长；小鼠跳跃反应实验表明，吗啡组小鼠出现明显的跳跃反应，而CAD组则无；小鼠竖尾反应实验表明CAD组小鼠未出现竖尾反应；耐受性实验表明连续应用CAD不易出现耐受性。结论 CAD具有明显的镇痛作用且对小鼠无身体依赖性作用。
【关键词】 白芷香豆素；镇痛；身体依赖性
白芷始载于《神农本草经》，性温、味辛，归胃、大肠、肺经，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效；用于治疗感冒头痛、眉棱骨痛、鼻渊、牙痛、疮疡肿痛等，特别是用于阳明经头痛，有明显的镇痛效应〔1，2〕。白芷的有效成分有白芷挥发油、白芷香豆素（CAD）等，有相关报道〔3〕白芷挥发油有明显的镇痛效应。关于CAD是否具有镇痛作用和身体依赖性，未见系统的文献报到。本文利用先进的现代工艺从白芷中提取香豆素，通过经典的疼痛动物模型观察CAD的镇痛作用，在此基础上采用小鼠跳跃反应试验和竖尾反应试验探讨CAD对小鼠是否有致身体依赖性作用，同时考察小鼠连续用药，是否易出现耐受性，为开发新的镇痛剂奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，合格证号：医动管字105107，长春高新医学动物实验研究中心提供。
1.1.2 药品 白芷香豆素（CAD） 由北华大学药学院药理教研室配制。实验用白芷购自吉林市江城大药房，经鉴定为伞形科植物杭白芷的干燥根。将白芷粉碎成粗粉，浸泡65%乙醇，按文献方法提取〔4〕。盐酸吗啡注射液，沈阳第一制药厂，批号：051108；盐酸钠络酮，益桥（湖南）制药有限公司 批号：20060203；冰醋酸，沈阳市东兴试剂厂，批号：20060525。
1.1.3 仪器 小鼠热板仪，成都泰盟生物技术有限公司；电热恒温水浴锅HH·S 1Ni，北京长安科学仪器厂生产；微量移液器，法国Glison公司生产。
1.2 方法
1.2.1 小鼠热板法〔5〕 实验开始前，将热板仪温度调为55℃±0.5℃，记录小鼠足底接触热板至出现舔后足的时间（s），即热板反应潜伏期作为痛阈指标，室温20℃±1℃，取雌性小鼠，预筛选基础痛阈值在（5～30 s）之间的小鼠50只，随机分为5组，分别为阴性对照组（生理盐水0.1 ml/kg）、吗啡对照组（吗啡10 mg/kg）、CAD低剂量组（30 mg/kg）、中剂量组（60 mg/kg）、高剂量组（120 mg/kg），各组均腹腔注射给药，分别测定给药后30、60、90、120、180、240 min小鼠痛阈值，60 s为截止时间，如超过60 s，则按60 s计。
1.2.2 小鼠扭体法〔5〕 小鼠50只，雌雄各半，禁食（不禁水）12 h，随机分为5组，分组方法同上述。吗啡组腹腔注射吗啡0.5 h，其余各组腹腔注射CAD（剂量同前）2 h后，再给每只小鼠腹腔注射0.6%冰醋酸溶液0.2 ml致使小鼠产生扭体反应，观察注射冰醋酸溶液后小鼠扭体反应潜伏期（min）及15 min内小鼠扭体反应的次数。
1.2.3 CAD对小鼠跳跃反应的影响〔6～9〕 昆明种小鼠30只，雄性，体重18～22 g，随机分3组，阴性对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/10 g；吗啡组腹腔注射吗啡，起始剂量为2.5 mg/kg，此后每日按5、10、20、30、40、50 mg/kg剂量递增，吗啡总量为157.5 mg/kg；CAD组腹腔注射 CAD，起始剂量为0.025 ml/10 g，每日1次，每次剂量分别递增1倍，给药总量为945 mg/kg，于第7日给药后2 h，每只鼠腹腔注射纳洛酮20 mg/kg，立即观察10 min内小鼠出现跳跃反应次数。
1.2.4 小鼠竖尾反应实验〔7～9〕 昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为2组，吗啡组腹腔注射吗啡，起始剂量为5 mg/kg，此后每日按10、20、30、40、50、60、70 mg/kg剂量递增，吗啡总量为285 mg/kg；CAD组腹腔注射CAD，起始剂量为0.05 ml/10 g，每日1次，每次剂量分别递增1倍，给药总量为945 mg/kg，观察小鼠在给药2 h内活动情况及有无S形竖尾反应。
1.2.5 耐受性实验〔3〕 昆明种小鼠30只，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为3组，分别为对照组腹腔注射生理盐水0.1 ml/10 g、CAD组腹腔注射 CAD 60 mg/kg及吗啡组腹腔注射吗啡10 mg/kg，每天1次，给药后2 h用热板法测定痛阈值，连续7 d，观察药物的耐受性。
1.3 统计学分析 实验数据均以x±s表示，两组间差异比较采用t检验，多组间差异比较采用方差分析。
2 结果
2.1 CAD对小鼠热板致痛反应的影响 与基础痛阈和对照组比较，小鼠一次性腹腔注射CAD 30、60、120 mg/kg均明显延长热板致痛反应潜伏期，给药后30 min开始显效，90、120、180 min时最为明显，具有显著的镇痛作用，并有剂量依赖性。与吗啡组比较作用起效慢但维持时间长，均可持续到240 min以上。见表1。
2.2 CAD对醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用 腹腔注射冰醋酸可诱发小鼠扭体反应，与对照组比较，小鼠一次性腹腔注射CAD 30、60、120 mg/kg均能明显延长小鼠扭体反应潜伏期，减少扭体反应次数，具有显著的镇痛作用，并有剂量依赖性。见表2。
表1 CAD对小鼠热板致痛反应的影响（略）
与对照组比较：1）P＜0.05，2）P＜0.01，3）P＜0.001；与基础痛阈比较：4）P＜0.05，5）P＜0.01；下表同
表2 CAD对醋酸致小鼠扭体反应的抑制作用（略）
2.3 CAD对小鼠跳跃反应的影响 与对照组相比，腹腔注射钠洛酮后，吗啡依赖模型小鼠除出现明显烦躁不安、腹泻等症状外，还出现显著的跳跃反应，而CAD组小鼠比较安静，未出现以上症状。见表3。
2.4 小鼠竖尾反应实验 结果表明，吗啡组小鼠在给药2 h内活动明显增多，兴奋跳动，嘶咬，尾部抬高，呈弯钩形或S形，而CAD组小鼠均无竖尾反应，外观安静少动，无兴奋嘶咬现象。
2.5 CAD对小鼠耐受性的影响 与对照组相比，吗啡镇痛作用仅持续3 d，此后即产生耐受性，第4天以后镇痛作用明显降低，而CAD（60 mg/kg）的镇痛作用可持续超过7 d。见表4。
表3 CAD对小鼠跳跃反应的影响（略）
表4 CAD对小鼠耐受性的影响（略）
3 讨论
有文献报道白芷挥发油具有一定的镇痛作用〔3〕，但挥发油成分在白芷中的含量甚微，且白芷经硫熏后其挥发油成分的含量大大下降〔10〕。香豆素类成分在白芷中含量远较挥发油高，可达1%左右。
经典的热板法和扭体法实验结果证明，CAD低、中、高3个剂量对物理和化学伤害性刺激的镇痛作用确切，具有良好的量效关系，镇痛作用维持时间长，可持续到240 min以上，以90～120 min镇痛作用最强，而阳性对照药吗啡组镇痛作用起效较快，30～60 min药效可达到最强，但作用仅持续120 min。与吗啡组相比，CAD的镇痛作用起效慢但作用维持时间长，高剂量组（120 mg/kg）的镇痛强度与吗啡相当。
本研究采用较为常用的验证药物有无身体依赖性的两种小鼠动物模型小鼠跳跃反应实验和小鼠竖尾试验，证实了CAD对小鼠无致身体依赖性作用，并同时观察到连续大剂量应用CAD后，小鼠外观安静少动，表现出明显的中枢镇静作用。通过小鼠耐受性实验证实，CAD中剂量（60 mg/kg）连续给药7 d，仍然具有明显的镇痛作用，不易产生耐受性，而阳性对照药吗啡（10 mg/kg）连续应用，作用仅持续3 d，第4天镇痛作用基本消失，容易产生耐受性。
疼痛是临床常见的自觉症状之一，目前，临床上应用的麻醉性镇痛药易于成瘾，解热镇痛药镇痛作用不完全，不良反应多且仅用于轻中度疼痛的治疗。白芷是一种临床常用的解表药，在治疗各种类型的疼痛症状中出现的频率相当高，尤其在治疗头面部疼痛方面，疗效非常显著，本实验结果显示白芷的主要成分香豆素是其发挥镇痛作用的有效成分，具有确切的镇痛作用和明显的中枢镇静作用，且不易产生耐受性和成瘾性，因此，极具研究开发的价值。 有关CAD的具体镇痛作用机制，还需作更进一步的深入研究。
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