关于上皮性卵巢癌患者外周血Th1/Th2细胞因子表达水平的变化

论文代写网： 　　　　　　　　 作者：袁少洋 王爱丽 庞启贞 林英姿 王历 卢伟英 袁素

【摘要】 目的： 探讨上皮性卵巢癌患者外周血Th1/Th3细胞因子表达水平. 方法： 用刺激物刺激细胞，增加细胞内细胞因子的表达，再加入荧光标记的特异性抗细胞因子单克隆抗体，流式细胞仪检测特异性细胞因子表达水平. 结果： 上皮性卵巢癌患者Thl型细胞因子IL2，IFNγ表达水平依次为(9.47±3.56) ng/L，(10.12±2.51) ng/L，而正常对照组依次为(12.20±2.48) ng/L，(13.38±2.89) ng/L，差异均有统计学意义（P&<0.05）；而Th3型细胞因子IL4， IL10表达水平依次为(4.56±0.78)ng/L，(5.26±2.27)ng/L，而正常对照组依次为(1.24±0.39)ng/L，(1.46±0.52) ng/L，两组差异有统计学意义（P&<0.05）. 结论： 卵巢癌患者Thl/Th3失调，Th1型反应弱，Th3型反应优，可使肿瘤细胞发生免疫逃逸.
【关键词】 卵巢肿瘤；Th1/Th3 型细胞因子；基因表达
　　0引言
　　辅助性T细胞(T helper，Th)亚群Thl/Th3的变化在恶性肿瘤免疫逃逸中起着重要的作用，Th3类细胞因子高表达而Thl类因子低表达是引起恶性肿瘤免疫逃逸的原因之一. 在正常生理情况下Thl，Th3两类细胞处于相互抑制，相互转化的平衡状态，一旦平衡被打破，机体会处于Thl优势或Th3优势的漂移状态，从而出现各种病理反应，甚至发生肿瘤. 大量研究表明，恶性肿瘤患者体内细胞因子的表达以Th3型细胞因子占优势. 卵巢恶性肿瘤患者是否存在类似现象，国内鲜见报道. 我们采用流式细胞仪通过Cytodetect试剂盒检测上皮性卵巢癌患者外周血Thl/Th3细胞分泌细胞因子的表达水平，观察Thl/Th3表达状况及与肿瘤发生、发展和预后的关系，为卵巢恶性肿瘤的免疫治疗提供实验依据.
　　1对象和方法
　　1.1对象海南省人民医院、海口市人民医院、海南医学院附属医院妇产科200606/200706 收治上皮性卵巢癌患者62例，年龄(42.5±5.3)岁；诊断标准以手术分期及术后病理为依据. 组织学分型：浆液性腺癌41例，黏液性腺癌21例. 高分化37例，中分化19例，低分化6例. 临床分期：Ⅰ期25例，Ⅱ期18例，Ⅲ期11例，Ⅳ期8例；其中26例有淋巴结转移. 所有病例均无急慢性疾病史及自身免疫疾病史，同时排除妊娠、严重感染，抽血前未接受任何治疗. 对照组20例健康妇女来自妇科门诊常规体检的健康女性，年龄(43.7±4.6)岁，妇检正常，无疾病史. 人Thl/Th3细胞因子流式检测试剂盒，购于美国BD公司. 主要组分：人Th 1/Th3细胞因子原液；分析稀释液；被覆抗人Thl/Th3细胞因子抗体的微球液(Beads)；PE试剂. FACSCalibur 型流式细胞仪购自美国BD公司，Thl型细胞因子主要检测IFNY和IL2，Th3型细胞因子主要检测IL4和IL10.
　　1.2方法术前3~6 d抽患者外周静脉血2 mL，取新鲜血清备用. 按试剂盒操作流程说明进行. 主要步骤：配制混合Beads液；加样、反应，每只试管均加入Beads液、PE试剂、待测血清各50 μL，充分混匀，室温闭光3 h；加1 mL洗液至每管，2000 r/min离心5 min，弃上清液，加200 μL洗液混匀后立即上机检测；使用相应数据处理软件，根据由标准品制作的曲线得出受检样品浓度.
　　统计学处理：计量数据采用x±s表示，应用SPSS13.0统计软件进行t检验，P&<0.05为差异有统计学意义.
　　2结果
　　2.1上皮性卵巢癌患者Th1/Th3细胞因子表达上皮性卵巢癌患者Th3型细胞因子IL4，IL10细胞百分比较正常对照组升高，差异有统计学意义(P&<0.01). Thl型细胞因子IL2，IFNγ较正常组降低(P&<0.01)，差异有统计学意义（表1）. 表1上皮性卵巢癌患者Th1/Th3细胞因子表达(
　　2.2Th1/Th3细胞因子表达与上皮性卵巢癌临床病理的关系IL2，IFNγ，IL4，IL10的表达水平在浆液性和黏液性组织学分型中无统计学差异（P&>0.05）；但是与上皮性卵巢癌的分化程度相关，低分化性癌组织中IL2，IFNγ的表达下降；IL4，IL10的表达升高（P&<0.05）；而且，Th1/Th3细胞因子表达表达与上皮性卵巢癌的临床分期相关，IL2，IFNγ的表达在临床ⅢⅣ期低于ⅠⅡ期（P&<0.05）；IL4，IL10的表达高于ⅠⅡ期（P&<0.05）；有淋巴结转移者中IL2，IFNγ的表达下降；IL4，IL10的表达升高，与无淋巴结转移相比，差异有统计学意义（P&<0.05，表1）. 　　3讨论
　　卵巢癌是妇女常见的三大恶性肿瘤之一，死亡率高居妇科恶性肿瘤之首［1］，故研究卵巢癌的恶性生物学行为的早期诊断指标，探讨阻断肿瘤浸润和转移的新方法，已成为卵巢癌研究的新热点.
　　Thl，Th3细胞为Th细胞的两个功能性亚群，通常将细胞因子IL2， IFNγ代表Thl亚群，细胞因子IL4，IL10代表Th3亚群. Thl分泌的细胞因子IL2， IFNγ在机体的抗肿瘤免疫中发挥重要作用，Thl型细胞占优势时，机体处于良好的抗肿瘤状态. 一旦Th3类细胞因子占优势，即造成免疫抑制状态，机体的抗肿瘤免疫将受到影响. 国内外均有基础及临床研究报道，肿瘤细胞内及肿瘤细胞培养液中Thl，Th3型细胞因子阳性表达率及表达产物数量存在差异，许多肿瘤包括非小细胞肺癌、直肠癌、卵巢癌、肝癌、恶性黑色素瘤等患者体内Th3型细胞因子占优势，并与预后等临床病理因素相关［2-3］，提示肿瘤细胞呈现Th3型细胞因子的优势表达，认为Th3型细胞因子占优势时，可能影响机体细胞免疫状态，有利于肿瘤细胞的逃逸，与肿瘤发生、发展有关.
　　本组中上皮性卵巢癌患者Th3型细胞因子IL4，IL10较正常对照者升高，Thl型细胞因子IL2，IFNγ降低. 提示卵巢癌患者与正常对照组的Th1优势状态相比，Th1/Th3平衡失调，Thl/Th3平衡向Th3方向漂移［4］，卵巢癌患者由于Thl细胞的抑制，细胞免疫功能不能有效地激活，机体免疫功能处于抑制状态，从而有利于肿瘤的发生及发展. 而且，这种细胞漂移与上皮性卵巢癌组织的分化程度、临床分期以及有无淋巴结转移有关，因而，卵巢癌患者血清Thl/Th3细胞因子检测，可作为卵巢癌诊断的辅助工具、检测肿瘤恶性程度，判断肿瘤转移、预测患者预后的重要工具之一. 本结果可能为临床上恶性肿瘤的诊断和治疗提供新的思路.

【参考文献】
［1］ 李留霞，张建好，乔玉环，等. 卵巢上皮性肿瘤患者血浆溶血磷脂酸水平测定［J］. 郑州大学学报：医学版，2007，42(2):226.

［2］ Ito N， Suzuki Y， raniguchi Y， et al. Prognostic significance of T helper 1 and 2 and T cytotoxic 1 and 2 cells in patients with nonsmall cell lung cancer ［J］. Anticancer Res， 2005， 25(3B):2027-2031.

［3］ BotellaEstrada R， Escudero M， OConnor JE， et al. Cytokine production by peripheral lymphocytes in melanoma ［J］. Eur Cytokine Netw， 2005， 16(1):47-55.

［4］ Yoshimura T， Matsushima K， Oppenheim JJ， et al. Neutrophil chemotactic factor produced by lipolysaccharide(LPS) stimulated human blood mononuclear leukocytes: partial Characterization and separation form interleukin1(ILl) ［J］.J Immunol，1987，139(3):779-788.