关于大鼠多焦点视网膜电图的记录方法

　　　　　　作者：张作明，顾永昊，李莉，龙潭

【关键词】 眼电生理，，，
　　关键词: 多焦视网膜电图;大鼠;眼电生理　　
　　
　　Abstract:The multi-focal electroretinography（mERG）is a new technique to evaluate objectively the visual function and characterized by observing the function change in focal retina quantitatively.The recording condition is very rigorous and the relative position between the eye and stimuli field must be kept to obtain accurate results.In experiments，the albino Sprague-Dawley rats were kept on a special platform，which can be moved in three dimensions，and the distance between the tested eye and CRT were controlled by a self made appa-ratus.A silver chloride loop electrode was contacted with corneal limbus as recording electrode.The waveforms of dark-adapted mERG in albino rats were stable，clear and re-peatable in focal retina.The amplitudes of a and b waves in upper field were greater than those in lower field while the la-tencies were shorter.There was no large-amplitude area just like the human macular.This procedure paves the way for e-valuating objectively functional change in focal retina in labo-ratory animals.　　
　　
　　0 引言
　　mERG能够在同一记录时间内将后极部视网膜各局部区域的信号分别提取出来，能够发现视网膜局部病变和早期病变［1］ .但记录条件要求苛刻，需要被检者的良好配合，才能够记录到稳定的波形.动物mERG记录比较困难，文献报道较少［2-4］ ，因此我们探索了大鼠mERG的记录方法.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 动物 雄性成年SD大鼠10只（第四军医大学实验动物中心提供），外眼和检眼镜检查屈光间质清晰，眼底无改变.予以12h明-暗交替光照，不限食水，室温18℃～23℃条件下饲养.
　　
　　1.2 记录参数 采用RETIscan系统（Roland Consult，德国），ELSA彩色显示器（Sony），刺激图形为103个6边形白色闪光阵列，变形指数1.0，刺激时亮度为120cd・m-2 ，刷新频率为60Hz，波形时间为167ms.放大器放大范围±100μV，通频带为5～300Hz.分12个循环记录mERG一级反应，每个循环记录时间为47s.

　　1.3 记录方法 取暗适应12h以上的大鼠，先用5g・L-1 托品酰胺散瞳，再用速眠新注射液（解放军农牧大学兽医研究所制）按0.8mL・kg-1 剂量麻醉，当瞳孔散大约7mm时，将大鼠固定于一个可以三维移动的动物实验台上（自制）.采用10g・L-1 的卡因进行角膜表面麻醉，滴加10g・L-1 甲基纤维素后安放电极（自制），其中记录电极为环形氯化银电极，固定于左眼角膜缘处，不锈钢针制作的参考电极和地极，分别置于尾部皮下和被检眼同侧口腔颊部.采用自行设计的定位装置使动物的角膜缘与荧光屏平行，角膜顶点与刺激野中心距离为20cm，然后记录.
　　
　　统计学处理:应用RETIport软件分析mERG波形幅值、潜伏期的测量和象限野分析.使用SPSS10.0统计软件进行数据统计，实验结果以x ±s表示.
　　2 结果
　　正常大鼠明适应mERG能够记录出来，但是其波幅值相对较低，更容易受到实验因素的影响.暗适应mERG波幅较高，波形容易辨认和判断（图1）.从原始波形图中可以看出，大鼠后极部暗适应mERG波幅值与刺激部位有一定的关系，下半野波幅值较上半野高，峰时值较短（P&<0.01，表1）.大鼠多焦视网膜电图波形及立体地形图见图1.
　　图1 大鼠103点白光刺激波形（左）及立体地形图（右）略
　　表1 正常大鼠多焦视网膜电图各波的正常值（略）
　　
　　3 讨论
　　大鼠昼伏夜出，其视网膜上感光器以视杆细胞为主，视锥细胞所占比例很少，约为1%［5］ ，因此其明适应ERG较低，而暗适应ERG波幅值较高.反映在mERG上，大鼠暗适应mERG则波幅值较高，各局部区域的波形清晰，容易辨认，可能包含有视杆细胞和视锥细胞的综合生物电反应.正常大鼠mERG下半野的波幅值较上半野稍高，峰潜时短，其原因尚不清楚.目前我们正在采用所建立的方法，对遗传性视网膜病变大鼠进行观察.
　　
　　mERG波形的可重复性和波形分布特点与被测眼的固视密切相关，因此记录动物mERG的最大难点在于能否控制好动物的固视问题.动物越小，难度越大.Seeliger等［6］ 采用激光扫描检眼镜的单色激光作为刺激光源，用RETIport系统记录，红外光监测视网膜上的刺激部位，取得了较好的结果.但是RETIport系统造价昂贵，其他mERG记录系统尚不能采用该方法记录.在文献［2，3］的基础上，我们探讨了采用常规的mERG记录技术记录动物mERG的可行性:采用自制的可三维移动的动物实验台，特殊的定位装置和环形角膜电极，较好地解决了固视问题，能够在各种实验条件下稳定地记录到mERG波形，使实验结果的可靠性和可重复性有了保证.除动物固视因素外，记录电极质量、动物及其麻醉情况、各种实验参数的设置等均可能影响实验结果，相关的研究工作正在进行中.
　　

参考文献

　　
　　［1］Wu S，Sutter EE.A topographic study of oscillatory potentials in man ［J］.Vis Neurosci，1995;12（6）:1013-1025.
　　［2］Nusinowitz S，Ridder WH3rd，Heckenlively JR.Rod multifocal electroretinograms in mice ［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，1999;40（12）:2848-2858.
　　［3］Ball SL，Petry HM.Noninvasive assessment of retinal function in rats using multifical electroretinography ［J］.Invest Ophthol Vis Sci，2000;41（2）:610-617.
　　［4］Seeliger MW，Narfstrom K.Functional assessment of the re-gional distribution of disease in a cat model of hereditary retinal degeneration ［J］.Invest Ophthalmol Vis Sci，2000;41（7）:1998-2005.
　　［5］Jacobs GH，Fenwick JA，Williams GA.Cone-based vision of rats for ultraviolet and visible lights ［J］.J Exp Biol，2001;204（Pt14）:2439-2446.