关于左旋精氨酸对犬急性心肌缺血血小板膜蛋白GMP140 的作用

代写论文网： 　　　　 作者：张华　陈丽娜　张力　贾国良


【关键词】 心肌缺血
　　关键词:心肌缺血;血小板膜蛋白;一氧化氮;左旋精氨酸
　　摘 要:目的 在犬急性心肌缺血模型上观察血浆GMP140 水平及血流动力学变化，探讨左旋精氨酸对其影响. 方法 24只犬随机等分为3组:生理盐水组（A组），灌注左旋精氨酸组（B组）和灌注NO合成酶阻断剂L-MNNA组（C组）.分别于狭窄前和狭窄后5，15，30，60和120min检测远端冠状动脉压（DCP）、冠脉每分血流量（CBF）、血浆NO2- 和血小板α颗粒膜蛋白GMP140 . 结果 B组DCP较A组下降，CBF显著增加（P&<0.01），GMP140 明显低于A组（P&<0.01），NO2- 明显高于A组（P&<0.01）;C组较A组DCP升高，CBF下降（P&<0.05），GMP140 高于A组（P&<0.05），血浆NO2- 与A组无明显差异（P&>0.05）. 结论 左旋精氨酸增加冠脉血流，降低血浆GMP140 ;抑制NO合成酶，防止血小板集聚，改善微循环，可以是其保护缺血心肌的机制.
　　
　　Keywords:ischemic myocardium;GMP140 ;L-Arginie;nitric oxide
　　
　　Abstract:AIM The dog model under severe ischemic my-ocardium was established for investigating L-Arginie’s influ-ence on GMP140 levels and its mechanism.METHODS Dogs　were randomly pided into three groups.A:Perfusing0.9%NaCl group.B:Perfusing L-Arg group.C:Perfusing NO synthase blocking L-MNNA group.DCP，CBF，NO　2- and GMP　140 in plasma were measured before stenosis and after stenosis insertion.RESULTS DCP declined and CBF in-creased（P&<0.01）in group B.GMP　140 was much lower and NO2- higher in group B than in group A（P&<0.01）.NO2- and GMP　140 have remarkable difference between group C and group A.CONCLUSION L-Arginie can decrease the pro-duction of GMP　140 to protect ischemic myocardium.It may be its mechanism that L-arg facilitates NO synthesis and pre-vents platelet activation.
　　
　　0 引言
　　
　　一氧化氮（NO）对冠脉血管张力、血流量的调节属生理性调节因素之一［1］ ，但NO对冠脉狭窄时血小板的影响报道较少.本实验建立了犬急性严重缺血心肌模型，检测其血浆GMP140 水平，并应用NO合成的特异性底物左旋精氨酸及其特异性阻断剂L-MN-NA对其进行灌注，以探讨左旋精氨酸/NO途径对急性严重缺血心肌的保护机制.
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 杂种犬24只由第四军医大学动物实验中心提供，雌雄不拘，体质量15～25kg.左旋精氨酸（L-arginie）由江苏张家巷东沙试剂厂提供.L-MN-NA（NO合成酶阻断剂）购自美国Sigma公司.血浆GMP140 测定药盒由苏州医学院血栓与止血研究室提供.NO2- 标准液由上海生化研究所提供.实验主要仪器:八导生理记录仪由日本光电制造（RM-6000型）.电磁流量计由日本光电制造（MFV-2100型）.-免疫计数仪由芬兰LKB制造（SL-1272型）.荧光分光光度计由日本日立制造（RF-5000型）.
　　1.2 方法
　　
　　1.2.1 动物模型制备 30g L-1 戊巴比妥钠（30mg kg-1 ，iv）麻醉犬后，气管插管，行正压人工呼吸.暴露心脏，缝制“心包摇蓝”.在冠脉左前降支（LAD）第一分支下方处分离冠脉约2cm，安放电磁流量计探头测冠脉血流量（CBF），探头后方置入一自制动脉微米缩窄器造成冠脉重度狭窄［使CBF减少（70±1）%，远端小动脉压（DCP）下降至（5.4±0.1）kPa］，将右股静脉导管及冠脉狭窄远端压力导管连接八导生理记录仪.分别于冠脉狭窄前和狭窄后5，15，30，60和120min记录CBF和DCP变化，并收集血样.
　　1.2.2 动物分组 犬随机分3组，每组8只.A组:缺血心肌组，狭窄即刻冠脉内灌注等量生理盐水（0.2mL min-1 ）;B组:左旋精氨酸组，狭窄即刻冠脉内灌注左旋精氨酸（1g L-1 ，1mL min-1 ）;C组:L-MN-NA组，狭窄即刻冠脉内灌注L-MNNA（10g L-1 ，10mL min-1 ）.用多导生理记录仪记录CBF和DCP.应用亚硝酸根荧光光度测定法测定NO2- （NO代谢产物）含量.采用双抗夹心法和固相免疫放射实验测定GMP140 （μg L-1 ），具体操作严格按药盒说明进行.
　　
　　统计学处理:实验结果以x ±s表示，自身比较采用配对t检验，组间比较用团体t检验.
　　
　　2 结果
　　
　　2.1 各组间血流动力学变化 使LAD狭窄致CBF减少70%时开始灌注药物，灌流15min后，B组CBF显著增加（P&<0.01），DCP较A组下降（P&<0.05）;而C组局部血流量减少（P&<0.01），DCP增高（P&<0.05，Fig1，2）.
　　
　　图1 略
　　
　　2.2 血浆GMP140 水平 A组在LAD狭窄2h内，GMP140 释放持续高于狭窄前（P&<0.01，P&<0.05）;B组灌注左旋精氨15min后，GMP140 释放较A组明 显下降（P&<0.05）;C组GMP140 释放持续处于高水平（P&>0.05，Fig3）.
　　
　　图2 － 图3 略
　　
　　2.3 血浆NO2┐ 水平 A组LAD狭窄15min内NO2- 释放增加（P&<0.05）;B组NO2- 释放在2h内持续高于狭窄前（P&<0.01），且B组指标均显著高于A组（P&<0.01）;C组NO2- 释放持续处于低水平（P&>0.05，Fig4）.
　　
　　3 讨论
　　
　　冠脉闭塞后循环血液中血小板功能发生明显异常，利用药物可降低血小板聚集功能，改善心肌血供，提高患者存活率［2］ .血小板膜蛋白包括颗粒膜蛋白、糖蛋白及溶酶体膜蛋白.颗粒膜蛋白有三种:α颗粒膜蛋白、致密体膜蛋白及溶酶体膜蛋白，GMP140 属α颗粒膜蛋白之一种.当血小板活化时，血小板膜蛋白的结构和功能都将发生变化.GMP140 随α颗粒内容物的释放而与质膜融合，能持久存在于活化血小板质膜表面;同时，另一种可溶性GMP140 ，便释放入血浆中，故血浆中GMP140 浓度反映了血小板的活化程度，是血小板活化、聚集率升高的特异性标志 转贴于 　图4 略
　　
　　本实验中A组LAD狭窄CBF减少（70±1）%（相当于面积法冠脉狭窄90%以上）后，血浆GMP140 表达持续增高，说明急性冠脉狭窄可激活血小板;B组冠脉狭窄5min内，GMP140 表达有升高，随着左旋精氨酸的继续灌注，15min后血浆中GMP140 浓度已与狭窄前无明显差异，说明狭窄冠脉灌注左旋精氨酸可抑制GMP140 表达、减轻血小板聚集.
　　左旋精氨酸是NO合成的底物，增加其在血液中的浓度可促进NO的合成［5］ .以往研究表明，NO是强的血管扩张剂，其增加不仅引起冠脉运输血管扩张，且降低血管阻力，扩张毛细血管内皮，改善微循环［6，7］ .本实验在观察GMP140 变化的同时也测定了各组相应时间点上的NO，CBF和DCP变化.本实验显示，灌流左旋精氨酸可增加冠脉血流，降低冠脉远端血管阻力，从而改善了心肌血供.
　　Rovin等［8］ 证明，NO可直接作用于血小板，通过提高血小板内cGMP浓度来抑制血小板的聚集、粘附，从而发挥强大的抗血栓形成的生理作用.本实验结果显示，灌流左旋精氨酸使GMP140 表达受到抑制的同时，NO的合成增加;C组灌注NO合成酶阻断剂L-MNNA，阻断了NO的合成，GMP
140 表达则增高，不仅高于A组，更高B组，且电镜下有血小板聚积，心肌有灶性梗死，说明NO可抑制GMP140 表达. Edward等［9］ 为13名行PTCA术的患者中的6人进行GSNO（S-nitrosoglutathine，一种优先作用于血小板的NO供体）冠状动脉内灌注10min，发现血小板表面糖蛋白的表达较对照组显著降低，提示GSNO益于防止血管闭塞和再狭窄.我们的实验结果与其一致，说明提供NO合成的底物左旋精氨酸可提高血液中的NO浓度，不仅起到扩张冠脉，降低冠脉血管阻力，增加血流的作用，而且能抑制血小板GMP140 表达，为将左旋精氨酸应用于防止冠脉狭窄下的血栓形成，疏通微循环，保护心肌提供了实验依据.
　　参考文献:
　　
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