作者：郭云 吕云利 李柱一 陆薇
【关键词】 脑出血
关键词: 脑出血，急性;白介素6;大鼠;血浆;脑组织
摘 要:目的 探讨白介素6（IL-6）在实验性大鼠脑出血急性期脑组织和血浆中的含量变化，阐明其在脑出血过程中的作用. 方法 SD大鼠80只，体质量250～300g，随机分为4组:对照组、小量出血组、中量出血组、大量出血组.每组又分成5个小组，每小组4只.采用Nath法建立脑出血模型.用放射免疫法测定血浆及脑组织中IL-6的含量. 结果 脑出血后，脑组织及血浆中IL-6水平明显升高（P&<0.05），有随脑出血量增加而增加的趋势，出血后不同时间IL-6的水平有显著差别（P&<0.05），以48h最高（P&<0.01）. 结论 IL-6升高是脑出血损伤后白细胞及中枢神经系统受损的免疫应答改变，监测IL-6的变化对了解脑出血后的神经变化和判别预后有积极意义.
Keywords:cerebral hemorrhage，acute;IL-6;rat;plasma;perihemotoma
Abstract:AIM To investigate IL-6concentration change in brain tissue and plasma after acute cerebral hemorrhage in rats and reveal the action of the IL-6during the brain bleed┐ing.METHODS Eighty SD rats weighting250～300g were pided into four groups.Each group was further pided into five subgroups.The model of acute cerebral hemorrhage was established by Nath method.The concentrations of IL-6in plasma and brain tissues were measured with radioimmu-noassay.RESULTS The levels of LI-6in plasma and brain tissue in experimental groups remarkably increased（P&<0.05），tending to increase with the amount of the bleed-ing.The levels of IL-6differed at different time points after acute cerebral hemorrhage（P&<0.05），the48h being the highest（P&<0.01）.CONCLUSION Increasing the levels of IL-6in plasma and cerebral tissues results in the response of immune system and central nervous system（CNS）;measur-ing the levels of IL-6is significant for understanding the change of the CNS after cerebral hemorrhage and for judg-ment of prognosis.
0 引言
细胞因子与激素类物质一样，是机体内许多病理生理反应的重要介质，参与机体免疫反应，应激反应和炎症的调节.近年来临床和实验研究发现IL-6在脑缺血和脑创伤后明显增加［1，2］ ，但关于IL-6与脑出血关系的研究国内外报道很少.我们研究了实验性大鼠脑出血后IL-6在不同出血量及不同时间点血浆及脑组织内分泌水平的变化.
1 材料和方法
1.1 材料 健康雄性SD大鼠80只（本校实验动物中心提供），体质量250～300g.将大鼠随机分为大、中、小量脑出血组.对照组，每组20只;每组又分成1，8，24，48和72h5个小组.采用Nath法［3］ 将大鼠用10g・L-1 戊巴比妥钠30mg・kg-1 ip麻醉.俯卧固定于立体定位仪上，在颅骨前囟后0.2mm中线右侧旁3mm处钻一直径为1.5mm圆孔，深达硬脑膜.用微量注射器沿孔进针约6mm，将未肝素化的大鼠自体动脉血（尾动脉）以20μL・min
-1 的速度推注入脑，缓慢出针.小量出血组注射血量为25μL，中量组为50μL、大量组为100μL，对照组操作同上，但不注射.术后观察神经症状，根据Bederson的评定方法［4］ ，出血组大鼠均出现不同程度的阳性体征，评分为3.5～8.8，对照组无体征.
1.2 方法 ①血浆IL-6水平测定:各组大鼠分别在术后一定时间深度麻醉后，开胸心房穿刺每只大鼠取血4mL，分别置于含100g・L-1 EDTA30μL，抑肽酶10μL的试管混均，4℃3000r・min-1 离心10min，取上清液置于-20℃保存待测.②脑组织IL-6水平测定:各组大鼠到预定时间后，活杀取脑，生理盐水冲洗，入100℃生理盐水中煮5min，分离称取血肿及周边脑组织约0.2g，置匀浆器匀浆（0.1mol・L-1 HCl2mL）3000r・min-1 离心10min后，取上清液置于-20℃保存待测.IL-6药盒由解放军总医院科技开发中心放免研究所提供，测定过程按说明书进行.
统计学处理:所有实验数据用SPSS软件进行方差齐性检验.
2 结果
2.1 脑组织内IL┐6含量改变 对照组IL-6含量较低，脑出血后1h有明显增加，48h达高峰，72h有下降的趋势.各实验组与对照组比较差异非常显著（P&<0.01），各组间比较大量组与中、小量组差异显著（P&<0.05），中量与小量组间仅在48h和72h差异显著（P&<0.05，Tab1）.
表1 IL-6在脑出血后不同时间脑组织内含量 略
2.2 血浆IL┐6含量改变 血浆中IL-6在脑出血后1h开始升高，48h达高峰，72h开始下降，各实验组与对照组比较差异非常显著（P&<0.01），各实验组之间有显著差异（P&<0.05），且随脑组织内IL-6含量变化而变化的趋向（Tab2）.
3 讨论
脑出血后除血肿直接压迫损伤外，继发性脑缺血、水肿及血管通透性增加是加重脑细胞损伤的重要因素，在继发性脑损伤中发挥神经毒性和神经保护双重作用.IL-6在脑内主要由神经胶质细胞分泌［5］ ，脑出血后IL-6表达增加表明其参与脑出血损伤或修复过程.
我们研究结果表明，脑出血后1h IL-6在脑组织及血浆中开始升高，在48h达高峰，72h有下降，其升高的程度与脑出血量大小呈正相关，且在脑组织内含量远远高于血浆的水平，而对照组相应部位脑组织及血浆中IL-6维持在一个较低的水平.与脑缺血损害改变相似，提示脑出血可诱导IL-6在脑内合成［6］ .因此，作者认为脑出血后IL-6水平的增高，主要体现在脑组织内，这可能是导致脑出血后局部脑组织继发炎性反应及神经损害的重要原因［7］ .因为IL-6的双重作用.我们研究发现大量出血组较中、小量出血组IL-6的显著增高及神经状症状体征的明显改变，提示大量脑出血时脑组织水肿及炎症较中、小量组明显.IL-6表达的显著增高可能与其介导的神经毒性有关.而在中、小量出血组IL-6的升高幅度较大量组明显降低，提示可能脑出血引起的脑水肿及炎症反应较轻，其水平的增高是否更多的与其神经保护作用有关尚待进一步研究.Beamer等［8］ 报道急性缺血性卒中时IL-6增高与梗塞灶的容积显著相关，梗塞超过3cm者最高.与本研究结果基本一致.IL-6早期的增高可能与中性粒细胞和巨噬细胞浸润有关，IL-6持续升高可能与星形胶质细胞大量分泌IL-6有关.关于IL-6介导脑缺血损伤的途径，可能有以下几点［9］ :①诱导血管内皮细胞粘附分子表达，促进IL-2，IL-8等细胞因子的合成，引起血管炎性反应;②促进自由基释放，引起神经元死亡［10］ ;③增强兴奋性氨基酸的作用;④诱发发热;⑤降低脑血流.IL-6在体外可影响神经元的存活率［11］ .
总之，脑出血后IL-6在脑组织及血浆中水平升高是白细胞及神经组织受损的免疫应答改变.IL-6是人血浆中能测出的少数细胞因子之一［12］ ，我们研究发现其血浆含量的改变与脑组织含量的改变，有良好的相关性，与出血量大小呈相关.因此，监测IL-6在脑出血后血浆中的变化对了解脑继发性损伤及判别预后有积极的意义.
参考文献:
［1］Nath FP，Jenking A，Mendelow D.Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage ［J］.Neurosurgery，1986;63:697-703.
［2］Traupin V，Toulmond S，Serrano A.Increase in IL-6，IL-1and TNF levels in rat brain following traumatic lesion:Influence of pre-and post-traumatic treatment with R054864，a peripheral-type（p site）benzodizepine ligand ［J］.Neuroimmunology，1993;42:177-185.
［3］Loddick SA，Turnbull AV，Roth-Well NJ.Cerebral interlukin-6is neuroprotective during permanent focal cerebral ischemia in the rat ［J］.Cereb Blood Flow Metab，1998;18:176.
［4］Rosenberg GB.Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rat ［J］.Stroke，1990;21:801.
［5］Woodroof MN.Cytokine production in the central nervous sys-tem ［J］.Neurology，1995;45（Suppl6）:6-10.
［6］Martin-Ancel A，Garcia-Alix A，Pascual-Salcado D，Cabanas F，Valcarce N，Quero J.Interlukin-6in the cerebrospinal fluid after perinatal asphyxia is related to early and late neurological manifestations ［J］.Pediatrics，1997;100:789.
［7］Zhu T，Yao Z，Yuan HN.Changes of IL-1βTNFαand IL-6in brain and plasma following brain trauma in rats ［J］.Chin Trau-matol，1998;144（6）:367-368.
［8］Beamer NB，Coull BM，Clark WM，Hazel JS，Silberger JR.In-terleukin-6and interleukin-1receptor antagonist in acute stroke ［J］.Ann Neural，1995;37（6）:800:805.
［9］Yang Y.Interleukin and cerebral ischemia ［J］.Chin Neurol，2000;13（3）:189-190.
［10］Stella N，Estelles A，Siciliano J，Tence M，Desagher S，Pi-omelli D，Glowinski J，Premont J.Interlukin-1enhance the ATP-evoked release of arachidonic acid from mouse astrocytes ［J］.Neuroscience，1997;17:2939.
［11］Huang C.The effect of cytokine in demetia etiology ［J］.Shang-hai Immunol，1996;16（2）:126.
［12］Kim JS，Yoon SS，Kim YH，Ryu JS.Serial measurement of in-terlukin-6，transforming growth factor-beta and S-100protein in patients with acute stroke ［J］.Stroke，1996;27（9）:1553-1557.