作者：郭峰，屈秋民，韩建峰，乔晋，杨华，武成斌
【关键词】 ，阿尔茨海默病
【Abstract】 AIM: To explore the changes of serum interleukin1β(IL1β) and interleukin6 (IL6) in patients with Alzheimer’s disease (AD) and their relationship with the degree of AD. METHODS: Following 1∶1 matched pairing principle， 28 AD patients and 28 normal controls were enrolled in the study. The serum IL1β and IL6 levels were determined by enzymelinked immunosorbent assay (ELISA). RESULTS: The content of serum IL1β in the cases of AD （24±13 ng/L） was higher than that in the normal controls (NC) （7±5 ng/L） and there was significant difference between the two groups（P&<0.01）but there was no significant difference in the content of IL6 between the two groups（P&>0.05）. There was no significant difference in serum contents of IL1β， IL6 between patients with different degree of AD（P&>0.05）. CONCLUSION: The content of serum IL1β in AD cases is higher than that in NC， which may correlate with the inflammation in brains of AD cases. The relationship between peripheral IL6 level and the inflammatory process in brains of AD cases needs further study.
【Keywords】 Alzheimers disease; inflammation; interleukin1β; interleukin6
【摘要】 目的： 探讨阿尔茨海默病（AD）患者血清IL1β， IL6水平的变化，及其与AD严重程度的关系. 方法: 严格按照1∶1配对的原则选择AD患者、健康老人各28例，采用ELISA法测定血清IL1β， IL6含量. 结果： 血清IL1β含量AD组（24±13 ng/L）明显高于正常对照（NC）组（7±5 ng/L），差异有显著性（P&<0.01），而血清IL6 含量AD 组（49±23 ng/L）虽高于NC组（44±23 ng/L）但两组间差异无显著性（P&>0.05）. 不同严重程度AD组之间血清IL1β， IL6含量差异无显著性（P&>0.05）. 结论: AD患者血清IL1β水平高于正常对照，可能与AD脑内炎症反应有关. 而外周IL6水平与AD脑组织炎症反应的关系还有待于进一步探讨.
【关键词】 阿尔茨海默病；炎症；白细胞介素1β；白细胞介素6
0引言
阿尔茨海默病（Alzheimers disease， AD）的病因和发病机制至今不明. 近年研究表明，免疫和炎症反应是AD发病机制中的一个关键环节［1］. 细胞因子尤其是白细胞介素作为重要的免疫活性物质，在AD的炎症反应中起着重要的调节作用. 为了探讨AD血清IL1β， IL6水平的变化，及其与AD严重程度的关系，我们采用ELISA法对AD及正常对照血清IL1β， IL6含量进行了测定.
1对象和方法
1.1对象所有研究对象均来源于西安交通大学第一医院神经内科“九五”科技攻关课题《社区主要老年疾病综合防治研究老年性痴呆和震颤麻痹流行病学调查》中诊断的很可能AD患者和健康老年人［2］. ① AD组： 从100名流行病学调查中诊断的很可能AD中选择28（男8，女20）例，平均年龄72.4±10.5岁，近期（2 wk）无炎症性疾病，未使用皮质类固醇激素及非甾体类抗炎药物，体温正常. 所有AD患者的诊断按照NINCDSADRDA很可能AD的标准，结合临床症状、简易智能量表（MMSE）、日常生活量表（ADL）、PFEFFER功能活动量表（POD）、物体记忆试验（FOM）、快速词汇测验（RVR）、积木试验（WISC）、数字广度测验（WAIS）、Hamilton抑郁量表（HRSD）、Hachinski缺血指数等神经心理学测查及头颅CT做出诊断. 所有病例的诊断均由两名神经内科教授独立做出，并随访2a以上，依据临床痴呆评定量表（Clinic dementia rating scale， CDR）将AD分为轻度14例、中度6例和重度8例；② 对照组： 严格按照1∶1配对的原则，选择与AD患者同性别，年龄相差小于3岁，同等文化程度、同居住地、没有认知损害和精神症状，而且近期无炎性疾病及应用抗炎药物的健康老人作为对照.
1.2方法
1.2.1标本准备在8:00-9:00 am之间对AD患者及对照空腹采集静脉血. 血液静置20 min后，使用离心机以3000 r/min离心15 min，分离血清并置于低温冰箱（-70℃）内待批量检测.
1.2.2IL1β， IL6检测采用双抗体夹心ELISA法，使用美国Enzyme公司原装，晶美生物工程有限公司分装IL1β， IL6试剂盒，板内、板间变异系数&<0.105. 主要仪器有美国Biotec EL312e型酶标仪、自动洗板机，加样器，震荡器等.
统计学处理：采用SPSS10.0进行分析，AD与对照IL1β， IL6均数比较应用1∶1配对t检验，不同严重程度IL1β， IL6组间、组内比较应用方差分析，相关检验采用Pearson相关分析，均以P&<0.05作为显著性指标.
2结果
2.1AD组与NC组血清IL1β， IL6含量比较血清IL1β含量AD 组（24±13 ng/L）明显高于NC组（7±5 ng/L），其差异有显著性（P&<0.01）；而血清IL6含量AD 组（49±23 ng/L）虽高于NC组（44±23 ng/L），但差异无显著性（P&>0.05）.
2.2不同程度AD间血清IL1β， IL6含量比较结果显示：不同严重程度AD组间IL1β， IL6含量差异均无显著性（P&>0.05），但IL6含量随痴呆的加重有增高的趋势（Tab 1）.表1不同程度AD血清IL1β， IL6含量比较（略）
2.3AD患者血清 IL1β， IL6含量与MMSE分值间的关系在AD组，随着血清IL1β， IL6含量的升高，MMSE分值并无下降趋势（r=-0.013， P=0.948）、 (r=-0.146， P=0.476).
3讨论
1994年Mc Geer和Rogers首先提出AD的神经慢性退行性变可能是脑内免疫和炎症反应不适当激活的结果，超强的免疫反应可方向错误地攻击神经组织而造成细胞损伤和死亡［3］. 近年来越来越多的证据表明，炎症机制在AD发病中起着至关重要的作用［4］： ① AD脑中的许多炎症机制被发现在外周有明显的细胞毒性，而脑组织对于炎症更敏感，所以炎症肯定能造成脑的损害. ② 高水平的炎症反应与AD脑严重病理损害的部位（如额叶新皮质、边缘皮质等）是重合的，但是炎症反应不存在或很少存在于病理敏感性低的脑区（如小脑）. ③ 免疫细胞化学研究发现炎症介质包括补体、急性反应蛋白、IL1α， IL1β， IL6， TNFα， TGFβ和脂调素等在Aβ沉积与神经元缠结区高表达. ④ 炎症毒性的直接证据，如补体结合、固定、溶解轴突已在AD脑中发现. ⑤ 头部创伤、感染等炎症状态是AD潜在的危险因素；⑥ 皮质类固醇激素及非甾体抗炎药可以延缓AD的发生和发展，可以改善患者的认知功能. Aβ则被认为是AD脑内产生炎症反应的触发剂，它能激活胶质细胞、活化补体、促进细胞膜攻击复合物（MAC）、氧自由基及过量的谷氨酸盐等神经毒性产物的释放，而细胞因子在其中起着重要的介导作用，它可以增加APP的生成、促进Aβ聚集、激活补体、生成NO及自由基而损伤神经细胞. Aβ与细胞因子间的相互作用还可以形成恶性循环，最终导致AD脑神经元的死亡.
在众多的细胞因子中，白细胞介素尤其IL1β， IL6研究最多. 在脑内IL1β， IL6主要由小胶质细胞和星形胶质细胞产生，在一定条件下神经元、血管内皮细胞也可合成和分泌. 脑内增高的IL1β， IL6可以诱导星形胶质细胞APP的表达，促进Aβ的产生. IL1β增加APP的合成进程可能进一步增加Aβ在斑块中的生成和沉积［5］. IL1β使初级人星形细胞中APP增加6倍，使人星形细胞瘤APP增加15倍，且APPmRNA水平处于稳定状态； IL1对APPmRNA的翻译的调控是通过 5′端非翻译区［5′UTR］序列实现的；IL1β可以诱导活化的星形胶质细胞过度表达S100β［6］，它是AD中轴突斑块形成的驱动因子，使营养不良的轴突过度生长，最终形成神经炎性斑块；IL1β诱导AchE mRNA和蛋白的表达，并增强AchE的活力，加剧AD脑内胆碱能系统功能障碍；IL6可调节APP的合成［7］，转录和由IL6/sIL6R复合体产生的表达. IL6可以诱导急性期反应蛋白如α2MAC的表达；IL6转基因小鼠的隔－海马胆碱能通路的功能受到了严重损害，可能影响学习记忆功能. IL1β， IL6的基因多态性也与AD有关［8］.
本研究血清IL6 AD组虽然高于NC组，但两组间差异无显著性（P&>0.05）. 目前认为IL6 可由许多淋巴细胞和非淋巴细胞产生［12］. 关于血清IL6水平的研究存在较大争议［11］ ，可能是因为： ① 虽然以往的研究AD患者中女性多于男性，但是男女相差不大. 而本研究中AD女性20例远高于男性8例，性别可能造成了与其他结果的差异. ② 循环系统中的细胞因子的半衰期很短，在释放的位置有较高的浓度，在血中可很快稀释，不易被免疫学方法检测到. ③ 所有这些研究样本数量较少，不一定能反应IL6的真实水平.
AD患者血清IL1β水平高于正常对照，可能与AD脑内炎症反应有关，所以检测外周血IL1β水平可能作为诊断AD的免疫指标，而外周IL6水平与AD脑组织炎症反应的关系还有待于进一步探讨.
参考文献
［1］ McGeer EG， McGeer PL. The importance of inflammatory mechanisms in Alzheimer’s disease ［J］. Exp Gerontol， 1998;33: 371-378.
［2］ 屈秋民，乔晋，杨剑波，等. 西安地区中老年痴呆患病率研究［J］. 中华老年医学杂志2001;20:283-286.
Qu QM， Qiao J， Yang JB， et al. Study of the prevalence of senile dementia among elderly people in Xi’an， China ［J］. Chin J Geriatr， 2001; 20: 283-286.
［3］ McGeer PL， Rogers J， McGeer EG. Neuroimmune mechanisms in Alzheimer’s disease pathogenesis ［J］. Alzheimer Dis Assoc Disord， 1994;8: 149-158.
［4］ Neuroinflammation Working Group. Inflammation and Alzheimer’s disease ［J］. Neurobiol Aging， 2000;21: 383-421.
［5］ Nancy JR， Giamal NL. Interleukin 1 in the brain: biology， pathology and therapeutic target ［J］. Trends Neurosci， 2000;23: 618-625.
［6］ Mrak RE， Griffin WS. The role of activated astrocytes and of the neurotrophic cytokine S100B in the pathogenesis of Alzheimer’s disease ［J］. Neurobiol Aging， 2001；22: 915-922.
［7］ Zhihua Qiu， Donna LG. Interleukin6， βamyloid peptide and NMDA interactions in rat cortical neurons ［J］. J Neuroimmunol， 2003；139: 51-57.
［8］ Faltraco F， Burger K， Zill P. Interleukin6174 G/C promoter gene polymorphism C allele reduces Alzheimers disease risk ［J］. J Am Geriatr Soc， 2003；51: 578-579.
［9］ Licastro F， Steve P， Ludovica C， et al. Increased plasma levels of interleukin1， interleukin6 and a1antichymotrypsin in patients with Alzheimers disease: Peripheral inflammation or signals from the brain? ［J］. J Neuroimmunol， 2000；103: 97-102.
［10］ Luigi AD， Claudia F， Ugo L， et al. Inflammatory markers in Alzheimers disease and multiinfarct dementia ［J］. Mech Ageing Dev， 2001; 122: 1985-1995.
［11］ Luigi AD， Pizzimenti S， Quadri P， et al. Peripheral inflammatory response in Alzheimers disease and multiinfarct dementia ［J］. Neurobiol Dis， 2002; 11: 308-314.
［12］ 曹姣妃，刘宁，梁德胜，等. 急性脑血管病患者血清hsCRP， TNFα和IL6的动态变化及临床意义 ［J］. 第四军医大学学报， 2004; 25(2) : 173-175.