摘要 :目的 比较猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）和断奶仔猪多系统萎缩综合征（PMWS）的病理学变化。 方法 用PRRSV ATCC VR-2332株和猪圆环病毒2型（PCV2）联合感染了2头3周龄仔猪，同时设立了3头健康对照猪。在攻毒前后分别于耳缘静脉采血，用HerdChek IDEXX Kit测其血清抗体。PRRSV和PCV2联合感染猪分别在感染后1周、3周剖杀，PRRSV单独感染猪和健康对照猪分别在感染后1周、2周和3周剖杀。剖杀后采集肺、脾、扁桃体和腹股沟淋巴结，用甲醛溶液固定，组织石蜡切片以观察显微病理变化。 结果 剖检结果和石蜡切片结果均显示了试验猪在攻毒后发生程度不一的间质性肺炎及相应的显微病变。 结论 PRRSV和PCV2联合感染引起的病变比PRRSV单独感染要严重。
关键词 :猪繁殖与呼吸综合征病毒;猪圆环病毒;病理变化
Abstract:Objective To compare the pathology of PRRSV infection with that of co-infection of PRRSV and PCV2.Methods Three3-week-old pigs were experimentally infected with PRRSV ATCC VR-2332strain，and two pigs with both PRRSV ATCC VR-2332and PCV2.Three age-matched pigs were kept as uninoculated controls.Serumwas collected before and after inoculation to detect the PRRSV antibody.Two infected pigs and one control pigwere killed and necropsied each time，one，two and three weeks after infection.Lung，tonsil，spleen and inguinal lymph node were collected for histopathology.Results Interstitial pneumonia of different degrees was niticed in all inoculated pigs.Conclusion Coinfection with PCV2would in-crease the severity of PRRSV-induced pneumonia.
Key words:porcine reproductive and respiratory syndrome virus（PRRSV）;porcine circovirus（PCV）;pathology
猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是猪的重要传染病，于1987年首次在美国发现，随后迅速蔓延至全球各养猪业发达国家。1991年由荷兰学者分离到该病的病原，并命名为Lelystad病毒（PRRSV欧洲型代表株）［1-2］ ，1992年美国研究人员也分离到PRRSV（美洲型代表株VR-2332）。1992年国际兽疫局（OIE）将PRRS列为B类传染病。亚洲国家也广泛存在着美洲型PRRSV的流行，我国1996年首次报道有PRRS的发生，并证明是美洲型PRRSV感染所致［3］ 。该病以妊娠母猪繁殖障碍、仔猪及育肥猪呼吸困难，哺乳仔猪发病率和死亡率高为特征，给养猪业造成了严重的经济损失。
近年来，病原体的混合感染成为猪病的主要流行形式，其中PRRSV和PCV2的二重感染在众多二重感染中占半数以上，由此造成的经济损失不可估量。为了研究PRRS的病理学变化并将之与PCV2联合感染的病理学变化作比较，我们人工复制了PRRS及其与PCV2联合感染的病例并进行了病理学方面的研究，以探讨PCV2在与PRRSV混合感染中的影响。
1 材料和方法
1.1 病毒 PRRSV ATCC VR-2332株和PCV2分离株由扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室保存。
1.2 细胞及实验动物 Marc-145细胞和Dulac细胞，由扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室保存。于37℃6%CO 2 培养，生长液为含有10%FCS的DMEM（DMEM13.7g，NaHCO 3 3.6g，FCS100ml，青霉素100U.ml，链霉素100mg.L，定容至1000ml，pH7.2），维持液为含1%FCS的DMEM。实验用猪为仪征地方品种猪。
1.3 攻毒前病毒TCID 50 的测定及病毒的处理 将培养的PRRSV冻融3次（-20℃至37℃）后接种Marc-145细胞，按Reed-Muench法计算其TCID 50 ，结果为10 -4.9 TCID 50 .ml。将测定过TCID 50 的PRRSV细胞培养物经1000r.min离心10min后，去除细胞碎片，再用0.45μm滤膜进行过滤［4-5］ ，-20℃冻存备用。
1.4 攻毒试验 试验用猪均为相同来源的3周龄仔猪，攻毒前测定其血清中PRRSV抗体均为阴性。PRRSV单独感染3头猪，按每头猪4ml（4×10 -4.9 TCID 50 ）的量进行鼻内接种［6-7］ ，每鼻孔2ml;PRRSV和PCV2联合感染2头猪，每头猪每一病毒各4ml，鼻内接种;3头对照猪也以同样方法接种4ml未感染病毒的Marc-145细胞裂解上清（裂解过程与病毒感染细胞相同）。
1.5 间接ELISA检测血清抗体 用HerdChek IDEXX Kit（美国富道公司产品）测定试验猪血清中PRRSV抗体，按试剂盒说明书方法进行。
1.6 石蜡切片的制作 攻毒猪和健康对照猪剖杀后，分别采集肺、脾、扁桃体和腹股沟淋巴结，取材后用甲醛中性缓冲液固定24h以上，依次进行脱水、透明、浸蜡、包埋和切片，用苏木精-伊红进行染色，置普通光学显微镜下观察。
2 结果
2.1 人工感染猪的临诊表现 从攻毒前后猪的体温变化可以看出，有1头PRRSV+PCV2联合感染猪在攻毒后第4天开始发热（&>40℃）并持续到剖杀;2头PRRSV单独感染猪仅在攻毒后第5天出现发热现象;2头联合感染猪在攻毒后第5天出现眼睑水肿，其中1头持续到剖杀（攻毒后1周），另1头持续到攻毒后第9天;所有的试验猪在攻毒前后饮食欲基本正常。
2.2 血清抗体检测结果 所有含PRRSV样品攻毒 猪（剖杀者除外）攻毒后第2周血清中PRRSV抗体均转为阳性;而健康对照猪未测出上述抗体。结果如表1所示。
表1 间接ELISA测血清抗体试验结果（略）
2.3 人工感染猪的大体病变和显微病变 剖检结果显示，攻毒后发生程度不一的间质性肺炎，肺小叶间隔增宽，肺充血并有气肿;脾脏、腹股沟淋巴结肿大（见图1～3）。肺、脾、腹股沟淋巴结的石蜡切片进行苏木精-伊红染色，置显微镜下观察，可见肺间质增宽，出现大量炎性细胞浸润，一些肺泡被破坏，另一些肺泡代偿性扩张;脾脏皮质区淋巴细胞减少，淋巴小结增生，生发中心淋巴细胞肥大;腹股沟淋巴结的淋巴细胞数量减少，部分淋巴细胞发生核浓缩、碎裂、崩解。见图4～12。
图1 攻毒后3周肺的大体病变 （略）
图2 攻毒后3周脾的大体病变 （略）
图3 攻毒后3周腹股沟淋巴结的大体病变（略）
图4 PRRSV+PCV2联合感染猪攻毒后3周肺的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略）
图5 PRRSV单独感染猪攻毒后3周肺的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略）
图6 健康对照猪的肺组织切片（苏木精-伊红染色×200）（略）
图7 PRRSV+PCV2联合感染猪攻毒后3周脾脏的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略）
图8 PRRSV单独感染猪攻毒后3周脾脏的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略）
图9 健康对照猪的脾组织切片（苏木精-伊红染色×200）（略）
图10 PRRSV+PCV2联合感染猪攻毒后3周腹股沟淋巴结的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略）
图11 PRRSV单独感染猪攻毒后3周腹股沟淋巴结的显微病变（苏木精-伊红染色×200） （略） 图12 健康对照猪的腹股沟淋巴结组织切片（苏木精-伊红染色×200）（略）
3 讨论
由于近年来多病因混合感染越来越普遍，而PRRSV和PCV2的二重感染在众多二重感染中占半数以上并造成相当大的经济损失。因此，对PRRSV和PCV2的联合感染有必要做一些研究。PRRS缺乏特征性的临床症状和病理变化，猪感染后临床表现及病变也不一致，有些甚至无临床症状。但Harms等（2001）已经证实，PRRSV和PCV2的二重感染比PRRSV单一感染导致的肺炎变得更严重。
本实验以PRRSV ATCC VR-2332株单独感染及PRRSV ATCC VR-2332株和PCV2联合感染3周龄仔猪，攻毒前后采血检测其PRRSV抗体，结果表明攻毒前猪血清中PRRSV抗体阴性，而攻毒后2周起PRRSV抗体转变为阳性。结果确定实验用猪为PRRSV抗体阴性猪，排除了母源抗体对人工感染病毒的干扰作用，确保人工感染实验能够顺利进行。从攻毒前后猪的体温变化可以看出，PRRSV与PCV2联合感染猪的症状，比PRRSV单独感染猪要严重。
在感染后1周、2周、3周分别剖杀攻毒猪和对照猪，从剖杀结果看，攻毒猪均有不同程度的病理变化且在感染后第2周即检测到PRRSV抗体，证明攻毒猪确实已感染了PRRSV。
试验结果表明，PRRSV单独感染及其与PCV2联合感染均呈现了PRRS的特有病理学变化，而且从石蜡切片可以看出，PRRSV与PCV2的联合感染，无论是肺、扁桃体，还是脾脏、腹股沟淋巴结，在病变的严重程度上都比PRRSV单独感染要严重的多，尤其是肺炎变化更加明显。这说明PCV2在PRRSV的致病程度上起着不可或缺的作用。
参考文献
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