关于复聪香液对血管性痴呆模型大鼠海马神经元的影响

【关键词】 治疗应用
　　摘要：【目的】观察复聪香液对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元形态结构的影响。【方法】SD大鼠40只随机分为4组，分别为假手术组、模型组、脑复康对照组和复聪香液组，经反复脑缺血再灌流加降血压法造模后，分别给予生理盐水、复聪香液及脑复康溶液，连续15?d后脑部取材，苏木素伊红（HE）染色观察海马CA1区组织形态变化。【结果】与假手术组比较，模型组可见大量神经细胞损伤、变性，甚至坏死；而复聪香液及脑复康均能不同程度地减轻神经细胞损伤。【结论】复聪香液对血管性痴呆模型大鼠大脑海马CA1神经元损伤具有一定的保护作用。
　　关键词：复聪香液／治疗应用； 痴呆，血管性／中药疗法； 痴呆，血管性／病理学；疾病模型，动物； 大鼠
　　痴呆的发病机制涉及多个方面，其中最主要的是老年退行性变与血管性痴呆。血管性痴呆（vascular dementia，VD）是由于缺血性或出血性脑血管病以及全脑性缺血、低氧而引起的认知障碍，是以记忆减退、表情淡漠、呆滞，或人格改变为主要临床表现的一组神志异常综合征［１］。本实验观察了复聪香液对血管性痴呆模型大鼠海马CA1区神经元组织的影响，现报导如下。
　　1 材料与方法
　　11 材料
　　111 动物 成年雄性SD大鼠40只，清洁级，体质量180～220?g，由第一军医大学动物实验中心提供（合格证号：2002A041号）。动物分组情况：按照水迷宫训练成绩随机分为4组：
　　（1）假手术组；（2）模型组；（3）脑复康阳性对照组；（4）复聪香液组。
　　112 药品与试剂 复聪香液，由银杏叶、石菖蒲、麝香、冰片等加工制成，广东江门市五邑中医院制剂室提供，批号020919，分为A液及B液（B液为原方水提浓缩液，A液则为原方挥发油部分的提取液）；脑复康由广东华南制药厂生产，批号为020803，临用时蒸馏水溶解；硝普钠由北京双鹤药业股份有限公司加工生产，批号为0206211。
　　12 方法
　　121 模型制备
　　参照王蕊［2］等造模方法，将大鼠麻醉后，分离暴露双侧颈总动脉；硝普钠按25?mg/kg腹腔注射后即刻用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉10?min，然后复通10?min，再次夹闭10?min，再通后缝合。实验过程中使大鼠肛温保持在（375±03）℃，以防止低温对脑缺血损伤的保护作用，术后保温饲养。
　　122 给药方法
　　待动物造模清醒后即开始给药。复聪香液组按425?μL・kg－１・d－１随氧吸入A液1?h，495?g・kg－１・d－１剂量灌胃B液；阳性对照组给予脑复康，按4?g・kg－１・d－１灌胃，模型组和假手术组给予等容量的生理盐水灌胃，连续灌胃15?d后，进行行为学测试，然后取脑组织。
　　123 病理学检查
　　大鼠断头处死后，迅速取大脑，用体积分数为10%的市售福尔马林固定，在前囟后17?mm处切取脑组织，石蜡切片，苏木素伊红（HE）染色，光镜下观察海马CA1区的病理变化。
　　2 结果
　　假手术组可见海马CA1区锥体细胞排列整齐、密集，形态正常，结构完整，无变性，胶质细胞无增生；模型组见锥体细胞排列紊乱，胞体肿胀，胞膜溶解，有空泡产生，出现核固缩，核裂解，胶质细胞增生形成多处结节；复聪香液组和脑复康组仅见少数细胞变性坏死，锥体细胞排列较模型组整齐，正常细胞数目增多。结果见图1。
　　假手术组（pseudooperation group，10×10）
　　
　　假手术组（pseudooperation group，10×40）
　　模型组（model group，10×10）
　　模型组（model group，10×40）
　　脑复康组（Naofukang group，10×10）
　　脑复康组（Naofukang group，10×40）
　　复聪香液组（FL group，10×10）
　　复聪香液组（FL group，10×40）
　　图1 各组海马CA１区神经元形态学比较（略）
　　Figure 1 Histological features of hippocampal CA1 neurons in different groups 　3 讨论
　　中医认为血管性痴呆病位在脑，涉及肝肾心脾诸脏，尤与肾中精气的盛衰密切相关；多因年高正损、情志内伤等因素引起脏腑阴阳气血失调，以致痰瘀浊毒阻络窒窍，造成脑络闭塞、神机失用而发病；本病病性为本虚标实，其本为精气亏虚，其标为痰瘀浊毒内阻。故治疗上应采用化浊豁痰开窍，益气祛瘀醒神之法。复聪香液是经过长期的临床实践针对本病的病因病机所拟的标本兼顾之剂。方中运用石菖蒲、麝香、冰片、薄荷脑等芳香化浊，祛痰开窍；川芎、郁金、丹参、银杏叶等活血化瘀；黄芪、淫羊藿等益气补阳，标本兼治，虚实兼顾，使得实邪得以祛，正气得以复。从现代药理学角度来看，近年来中医药治疗本病研究的重点在于改善神经递质传导，改善自由基代谢，改善微循环，抗细胞凋亡等，而本方中运用的药物如丹参、川芎、银杏叶、石菖蒲、冰片等，均有报道显示其所含的成分具有以上作用。
　　石菖蒲挥发油不仅能降低凋亡细胞的积分光密度，也能降低凋亡细胞数，对脑神经细胞具有保护作用［3］；川芎嗪能在某种程度消除超氧阴离子，阻止自由基反应造成的脂质过氧化，从而减轻缺氧缺血后再灌注损伤，达到治疗目的［4］；银杏叶提取物可以明显改善反复脑缺血再灌注小鼠的学习和记忆功能，同时可不同程度地抑制脑组织中异常升高的丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）和前列腺E２（PGE２）的含量，明显增强脑组织中降低的超氧化物歧化酶（SOD）［5］活性；黄芪、丹参、川芎等可明显改善脑缺血再灌注动物的脑组织血氧代谢，增加脑组织血液容量［6］；冰片能促进某些药物透过血脑屏障，促进其他药物透皮吸收，提高其他药物的血药浓度和生物利用度［7］。
　　病理学检查是评价脑缺血损伤和治疗效果的一个比较客观的指标。海马是脑组织中对缺血、缺氧最敏感的区域之一，而其中的CA1区又是海马中最易受损的部位。从本实验结果可以看出，假手术组大鼠海马CA1区结构完整，锥体细胞排列整齐，而模型组结构不完整，锥体细胞排列紊乱，细胞脱失严重，证实了缺血对海马的损伤。复聪香液组海马CA1区的细胞脱失明显少于模型组，表明本方对血管性痴呆模型大鼠海马CA1区神经元的缺血性损伤具有保护作用。复聪香液对血管性痴呆模型行为学的研究表明，与对照组比较，模型组大鼠游完全程时间延长，错误次数增多，学习记忆能力下降，复聪香液能使上述情况改善，统计学分析差异有显著性［8］。
　　本方的制作工艺及临床用药方法有独到之处。在制作上，是将处方中诸药煎煮后，收集药物的挥发油部分加工制成A液，并将剩余药液去除杂质后浓缩加工成B液。在临床用药上，口服B液的同时，还将A液混合于低流量氧气中，使药液的挥发油部分随氧气吸入，透过鼻粘膜下丰富的血管吸收入血液，促使脑细胞功能更快地恢复。经鼻腔给药是近年来一种较新颖的给药途径，而中药药氧吸入法治疗血管性痴呆目前也较为少见。国内外的一些研究显示，鼻腔给药疗效优于口服给药，而与静脉给药近似［9］。但本研究中复聪香液的给药途径疗效是否确实比其他途径要好，有待进一步证实。
　　参考文献：
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　　［2］王蕊，杨秦飞，唐一鹏，等．大鼠拟血管性痴呆模型的改进［Ｊ］．中国病理生理杂志，2000，16（10）：914．
　　［3］匡忠生，谢宇晖．石菖蒲提取液对脑缺血―再灌注诱导的神经细胞凋亡的保护作用［Ｊ］．广东医学杂志，2002，4（23）：459．
　　［4］肖静．川芎嗪药理研究的新进展［Ｊ］．华西药学杂志，1993（3）：170．
　　［5］周兰兰，明亮，江勤，等．银杏叶提取物对反复脑缺血再灌注损伤的保护作用［Ｊ］．中国西医结合">中西医结合杂志，2000，20（5）：356．
　　［6］郭改会，李宁章，洒谷篝，等．通络熄风注射液对脑缺血再灌注大鼠脑血氧代谢及血压的影响［Ｊ］．中国实验方剂学杂志，1998，4（1）：21．
　　［7］万晓霞．冰片药理学研究进展［Ｊ］．广东医学院学报，1997，13（2）：115．
　　［8］杜鹃，余尚贞，赵长鹰，等．复聪香液对血管性痴呆模型行为学的影响［Ｊ］．四川中医，2004，5(22)：22．
　　［9］Hussian A，Hirai S，Bawarshi R．Nasal absorption of propranolol from different dosage forms by rats and dogs［Ｊ］．J Pharm Sci，1980，69（12）:1411