甲肝麻疹水痘联合疫苗对老年小鼠体液免疫功能的影响

　　　　　　 作者：李英华 关锋 代玉银 赵红光 王琦 林承赫

【摘要】 目的 研究甲肝麻疹水痘联合疫苗对老年小鼠体液免疫功能的影响。方法 将甲肝麻疹水痘联合疫苗、甲肝疫苗、麻疹疫苗、水痘疫苗分别注射老年小鼠，观察抗体的阳转率及在不同时间内抗体的消长情况。结果 阳转实验显示，联合疫苗与单价疫苗具有同样良好的免疫原性。抗体检测结果中，联合疫苗产生的甲肝抗体、麻疹抗体与单价疫苗相比，具有显著性差异(P<0.05);水痘抗体与单价疫苗相比，没有显著差异，但抗体产生的时间早于单价疫苗。补体总活性结果中，联合疫苗与单价疫苗相比，具有显著性差异(P<0.05)。结论 甲肝麻疹水痘联合疫苗中的三种病毒对抗体产生具有正协同作用，联合疫苗对增强老年小鼠体液免疫功能的作用强于单价疫苗。

【关键词】 甲肝麻疹水痘联合疫苗;老年小鼠;体液免疫功能

预防甲肝、麻疹、水痘3种传染性疾病的最好办法就是接种疫苗，目前接种的疫苗都是单价疫苗，国内有甲肝麻疹联合疫苗、麻疹水痘联合疫苗的报道〔1，2〕，但国内外尚无甲肝麻疹水痘联合疫苗的相关报道。本研究将甲肝麻疹水痘联合疫苗注射小鼠，通过检测抗体的滴度，观察抗体的消长，计算阳转率和血清补体的总活性，研究该疫苗对老年小鼠体液免疫功能的影响，评价老年小鼠体液免疫应答的水平〔3，4〕。

　　1 材料与方法

　　1.1 实验疫苗：甲肝麻疹水痘联合疫苗、甲肝减毒活疫苗、 麻疹减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗由长春生物制品研究所提供，4℃冰箱保存。

　　1.2 实验动物 体重25～30 g、10月龄健康无特殊病原体(SPF级)BALB/c纯系小鼠，分笼饲养，每笼10只，自然照明，饮用自来水，普通颗粒型饲料喂养，温度22℃～25℃，长春生物制品所动物中心提供。

　　1.3 实验试剂 甲肝抗体检测试剂盒购自唐山怡安生物工程公司;麻疹抗体检测试剂盒、水痘抗体检测试剂盒购自深圳赛尔生物技术公司;绵羊红细胞(SRBC)由长春生物制品研究所提供。

　　1.4 实验方法 随机分5个实验组：甲肝麻疹水痘联合疫苗组、甲肝减毒活疫苗组、麻疹减毒活疫苗组、水痘减毒活疫苗组、阴性对照组。每组60只老年小鼠，每只小鼠腹腔注射相应的疫苗0.5 ml，空白对照组注射生理盐水0.5 ml。从第2周起，每周采血1次，检测相应的抗体水平。用竞争法检测血清中甲肝抗体滴度，酶标法检测血清中麻疹、水痘抗体滴度。通过半数溶血值(CH50)的测定，计算血清补体的总活性。

　　1.5 统计学处理 应用SPSS10.0软件包进行统计分析，数据以x±s表示。组间数据比较用t检验。

　　2 结 果

　　2.1 抗体阳转实验结果 接种不同疫苗后2～5 w内抗体阳转率见表1。可见，联合疫苗与单价疫苗相比，具有同样良好的免疫原性。

　　2.2 抗体水平检测

　　2.2.1 甲肝抗体检测结果 联合疫苗中甲肝抗体产生的时间比单价甲肝疫苗早，抗体滴度与单价甲肝抗体相比差异显著(P<0.05)，说明联合疫苗中的麻疹、水痘病毒对甲肝病毒刺激机体产生甲肝抗体具有正协同作用。见表2。

　　2.2.2 麻疹抗体检测结果 联合疫苗中的麻疹抗体滴度与单价麻疹疫苗产生的抗体相比差异显著(P<0.05)，说明联合疫苗中的甲肝、水痘病毒对麻疹病毒刺激机体产生麻疹抗体具有促进作用，即具有正协同作用。见表3。

　　2.2.3 水痘抗体检测结果 联合疫苗中水痘抗体的出现早于单价水痘疫苗，但联合疫苗和单价水痘疫苗产生的水痘抗体的滴度差异不明显(P>0.05)。见表4。表1 各组抗体阳转实验结果表2 甲肝抗体滴度检测结果表3 麻疹抗体滴度检测结果表4 水痘抗体检测结果

　　2.3 补体总活性检测结果 补体总活性(U/ml )分别为，甲肝麻疹水痘联合疫苗(80±4.42)、甲肝减毒活疫苗(66.6±3.47)、麻疹减毒活疫苗(57±1.58)、水痘减毒活疫苗(44.4±3.36)、阴性对照(20±1.12)，可见联合疫苗组刺激机体产生的补体总活性与单价疫苗组相比具有显著性差异(均P<0.05)，说明联合疫苗刺激老年小鼠产生的体液免疫应答强于单价疫苗。

　　3 讨 论

　　在衰老个体中，免疫器官出现萎缩，淋巴细胞总数下降，各亚群的功能也降低，淋巴细胞分泌抗体和细胞因子的能力也随之下降。研究安全、有效的联合疫苗是WHO在疫苗研究和开发方面的重要内容，也是疫苗发展的趋势。联合疫苗经一次注射即可有效地预防两种或多种疾病，扩大防病范围，提高接种效率，降低生产成本、减少接种次数〔5〕。本实验将甲肝麻疹水痘联合疫苗注射老年小鼠，进行一系列的体液免疫试验，研究其对机体体液免疫功能的影响，为进一步探讨联合疫苗的免疫机制奠定基础。

　　联合疫苗能刺激老年小鼠产生较强的免疫应答，尤其是体液免疫应答〔6〕。联合疫苗中所含的甲肝病毒、麻疹病毒、水痘病毒在小鼠体内产生的抗体，与相应单价疫苗产生的抗体，具有同样良好的抗体阳转率;联合疫苗中的甲肝、麻疹病毒抗体滴度高于相应的单价疫苗，补体总活性与单价疫苗相比也具有显著性差异，说明联合疫苗中的3种病毒不相互拮抗，相反具有相互促进的作用〔7〕。其机制可能是混合抗原在局部诱导和加强了单核/巨噬细胞、树突细胞等抗原提呈细胞的聚集和吞噬，促进了抗原的加工、处理、提呈的过程，刺激细胞因子分泌，从而共同作用，激活抗原特异性T淋巴细胞，诱导Th细胞的增殖和分化，辅助B淋巴细胞增殖，加快特异性抗体的分泌〔8〕。

参考文献

　1 张世勇，高秋菊，刘立新，等.甲肝减毒活疫苗与麻疹减毒活疫苗联合免疫的实验研究〔J〕.实用预防医学，2007;14(6)：17445.

　　2 李 薇，李 娟，王树巧，等.麻疹腮腺炎风疹三联减毒活疫苗的安全性和免疫原性的研究〔J〕.微生物学免疫学进展， 2008;36(2)：14.

　　3 忻亚娟，庄昉成，姜立民.冻干甲型肝炎减毒活疫苗诱导的人体特异性免疫应答〔J〕.中国生物制品学杂志，2009;22(2) ：1802.

　　4 Mao JS，Chai SA.Further evaluation of the safety and protective efficacy of live attenuated hepatitis A vaccine (h3strain) in humans〔J〕. Vaccine，2007，15(9)：9447.

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　　6 Robert M，Gregory A，Poland B.The association of class I HLA aleles and antibody levels after a single dose of measles vaccine〔J〕.Human Immun，2008;64(6)：1039.

　　7 Ann M，Arvin B.Humoral and cellular immunity to varicellazoster virus：an overview〔J〕. J Infect Dis，2008;197(Suppl 2)：55860.

　　8 Mike M，Fabienne B，Bouche F.Experimental vaccines against measles in a world of changing epidemiology〔J〕.Intern J Parasitol，2007;33(6)：52545.