作者：郭郡浩 张群燕 赵智明 董晓蕾 张永文 蔡辉
【摘要】 目的检测压力负荷增加大鼠血浆内皮素(ET)和降钙素基因相关肽(CGRP)的浓度，进一步揭示压力负荷增加致左室肥厚(LVH)的发病机制及卡托普利逆转左室重构的可能机制。方法采用腹主动脉狭窄法致压力负荷增加大鼠LVH模型，观察左室质量指数，采用放射免疫分析法检测血浆ET和CGRP的浓度。结果①左室质量指数模型组低于假手术组(P<0.05)，卡托普利组与模型组比较有明显下降。②血浆ET的浓度模型组高于假手术组(P<0.01)，卡托普利组与模型组比较有明显下降(P<0.01)。③CGRP血浆降钙素基因相关肽浓度模型组低于假手术组(P<0.01)，卡托普利组与模型组比较有上升。④ET/CGRP比值假手术组明显小于1，模型组接近1，卡托普利组与假手术组接近，亦<1。结论血浆ET、CGRP的浓度比例失衡参与了压力负荷增加致LVH的发生，二者在高血压及LVH的发生、发展中具有不可忽视的作用，卡托普利可通过调节这一失衡而逆转左室重构。
【关键词】 左室肥厚;压力负荷;内皮素;降钙素基因相关肽;卡托普利
左室肥厚(LVH)是心脏压力负荷增加导致的严重并发症之一，也是发生心血管事件的独立危险因素〔1，2〕，其发生机制比较复杂。已经证实，循环与组织局部的某些神经内分泌因素参与了LVH的形成过程。内皮素(ET)是迄今最强大的血管收缩因子，也是LVH的重要发病因子之一〔3〕。降钙素基因相关肽(CGRP)广泛分布于心血管系统，是目前已知体内最强的舒血管活性多肽之一〔4〕。本研究主要通过观察压力负荷增加大鼠血浆ET和CGRP水平的改变，探索压力负荷增加致LVH的发病机制并进一步揭示卡托普利逆转LVH的可能机制。
1材料与方法
1.1材料清洁级雄性SD大鼠36只，体重180~200 g，由本院比较医学科提供，合格证号为0008389。血浆ET放免试剂盒、血浆CGRP放免试剂盒均由解放军总医院科技开发中心放免所提供。卡托普利，12.5 mg/片，由中美上海施贵宝制药有限公司生产，批号9912031J。
1.2造模方法及分组处理将大鼠随机分为3组：假手术组、模型组和卡托普利组。模型组12只，参考Doering等的方法〔5〕，造模4 w后，双蒸水灌胃1.5 ml/100 g体重，1次/d，连续4 w。假手术组12只，手术时只分离腹主动脉，不用银夹缩窄，余操作与模型组相同，手术4 w后，双蒸水灌胃1.5 ml/100 g体重，1次/d，连续4 w。卡托普利组12只，同模型组造模，造模4 w后，卡托普利灌胃100 mg/kg(相当于成人80~160倍)，1次/d，双蒸水稀释，连续4 w。
1.3左室重量指数(LVMI)测定迅速取出心脏，沿房室交界处去除左右心房及大血管，去除右心室游离壁，将左心室加室间隔用JA1003型电子天平(上海精科天平厂生产)准确称重，作为左室重量(LVM)，并按照公式〔LVM(mg)/体重(g)〕计算LVMI(‰)作为左室肥厚的指标。
1.4血浆ET、CGRP放免测定处死前腹主动脉取血2 ml，注入含10% EDTA·Na2 30 μl和抑肽酶40 μl的试管中，混匀，4℃ 3 000 r/min离心10 min，分离血浆。-70℃存放。测定前冷水中复融，再次4℃ 3 000 r/min离心5 min，取上清采用非平衡法测定。将聚苯乙烯试管编号，经过加液程序后，4℃ 3 500 r/min离心25 min，吸弃上清液，采用GC-911γ放射免疫计数仪(中国科学技术大学科技实业总公司)测定放射性。
1.5统计学分析用SPSS 11.5统计软件进行统计处理，定量资料以x±s表示。组间比较采用单因素方差分析，比较采用LSD法。
2结果
2.1一般情况共有8只死亡，死后均尸体解剖。假手术组1只因肠梗阻死于术后第4天;模型组中有3只死于术后2天之内，经证实3只均系死于急性心功能衰竭。卡托普利组因急性心衰死亡1只、慢性心衰死亡3只。
2.2左室重量指数(LVMI)模型组LVMI(‰)为(2.98±0.36)，明显高于假手术组(2.11±0.14)(P<0.01)，卡托普利组LVMI(‰)为(2.32±0.35)，明显低于模型组(2.98±0.36)(P<0.01)。
2.3血浆ET的改变见表1。模型组血浆ET水平较假手术组有显著升高(P<0.01);经100 mg/kg灌胃4 w后卡托普利组血浆ET水平与模型组比较有明显下降(P<0.01)。表1各组血浆ET、CGRP水平的改变
2.4血浆CGRP的改变见表1。模型组血浆CGRP水平较假手术组有显著升高(P<0.01);经100 mg/kg灌胃4 w的卡托普利组血浆CGRP水平与模型组比较有上升(P<0.05)。
2.5血浆ET与CGRP的比值模型组ET/CGRP比值明显<1，模型组接近1，经100 mg/kg灌胃4 w后卡托普利组血浆ET/CGRP比值与假手术组接近明显<1。
3讨论
大量动物实验与临床研究证实，LVH的发生常伴有血管平滑肌细胞的增殖和内皮的损伤〔6〕。ET是目前已知最强烈持久的血管收缩因子，可使所有的动、静脉强烈的收缩，同时可通过激活肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统引起心肌细胞肥大和促进心肌间质胶原增殖〔7〕。CGRP是目前已知体内最强的内源性舒血管活性多肽之一，广泛分布于心血管系统，具有强大的血管扩张，抑制血管平滑肌细胞增殖，促进内皮生长和修复，拮抗ET生物效应等作用〔8〕。正常生理状态下，ET和CGRP浓度保持相对平衡，是维持血管舒缩正常的重要因素之一。主动脉狭窄致LVH动物模型是基础医学及临床心血管研究较常用的实验方法。本实验室通过多年的临床及实验探索，采用腹主动脉缩窄制作动物模型的技术成熟，重复性好，存活率高，拟似性强，所致症状与临床左、右心力衰竭症状相似。结果说明压力负荷增加后，血浆ET与CGRP水平比例失衡参与了LVH的发生，二者在高血压及LVH的发生、发展中具有不可忽视的作用，这一结果与Gangula及Li等〔9，10〕研究结果完全一致。大规模临床试验证实，血管紧张素转换抑制剂(ACEI)——卡托普利是治疗和预防心室重构的基石和首选药物，它除能改善心衰病人的症状和血流动力学，提高生活质量、延长生存、降低死亡率〔11〕外，本研究证实，它还可通过调节循环ET与CGRP水平失衡而逆转左室重构。
参考文献
1Gardin JM，Lauer MS. Left ventricular hypertrophy:the next treatable，silent killer〔J〕? JAMA，2004;292(19):1396-8.
2Devereux RB，Wachtell K，Gerdts E，et al. Prognostic significance of left ventricular mass change during treatment of hypertension〔J〕. JAMA，2004;292 (19):1350-6.
3Shah R. Endothelins in health and disease〔J〕. Eur J Inter Med，2007;18(4):272-82.
4De Hoon JN，Pickkers P，Smits P，et al.Calcitonin gene-related peptide：exploring its vasodilating mechanism of action in humans〔J〕.Clin Pharmacol Ther，2003;73(4):312-21.
5Doering CW，Jalil JE，Janicki JS，et al.Collagen network remodeling and diastolic stiffness of the rat left ventricle with pressure overload hypertrophy〔J〕. Cardiovasc Res，1998;22(5):686-95.
6Subbotin VM. Analysis of arterial intimal hyperplasia：review and hypothesis〔J〕. Theor Biol Med Model，2007;4(1):41-61.
7De-Smet HR，Menadue MF，Oliver JR，et al.Endothelin ETA receptor antagonismdoes not attenuate angiotensin Ⅱ-induced cardiac hypertrophy in vivo in rats〔J〕. Clin Exp Pharmacol Physiol，2003;30(4):278-83.
8Wang Y，Wang DH. Prevention of endothelin-1-induced increases in blood pressure：role of endogenous CGRP〔J〕. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2004;287(4)：H1868-74.
9Gangula PR，Zhao H，Supowit SC，et al.Increased blood pressure in alpha-calitonin gene-related peptide/calcitonin gene knockout mice〔J〕. Hypertension，2000;35(1 Pt 2):470-5.
10Li J，Wang DH. Development of angiotensin Ⅱ-induced hypertension：role of CGRP and its receptor〔J〕. J Hypertens，2005;23(1):113-8.
11Bahk TJ，Daniels MD，Leon JS，et al. Comparison of angiotensin converting enzyme inhibition and angiotensin Ⅱ receptor blockade for the prevention of experimental autoimmune myocarditis〔J〕. Int J Cardiol，2008;125(1)：85-93.