系统性红斑狼疮患者血中sCD30L的变化及其临床意义

【摘要】 目的: 通过检测系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中可溶性CD30配体（sCD30L）的表达水平， 探讨其水平变化及在疾病发病中的作用。方法: 选取符合1982年美国风湿病学会制定的SLE诊断标准的45例SLE患者， 另选20例健康人作对照， 采取双抗体夹心ELISA方法检测SLE组及对照组血清中的sCD30L的水平， 同时检测临床相关指标， 分析sCD30L在各组患者血中的变化及其与临床各指标的相关性。结果: SLE 血清sCD30L水平为（21.20±10.90）μg/L， 显著高于正常对照组水平; （6.45±1.17）μg/L， P&<0.01］。SLE血清sCD30L水平与dsDNA， 尿α1， SLEDAI评分呈正相关（r=0.324， P&<0.05; r=0.658， P&<0.05; r=0.486， P&<0.05）， 特别是在SLEDAI评分大于10分和早期狼疮性肾炎的患者中相关性更强(r=0.508， P&<0.01; r=0.715， P&<0.01)。SLE患者血清sCD30L水平明显升高， 其升高水平与dsDNA， 尿α1， SLEDAI评分呈正相关。结论: sCD30L的表达异常可能是SLE 发病的重要环节， 在一定程度上反映疾病活动， 特别在早期狼疮性肾炎的发病及诊断中起重要作用。

【关键词】 sCD30L 系统性红斑狼疮 狼疮性肾炎

　　系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus， SLE) 是一种具有显著免疫功能异常的自身免疫性疾病， 以多种病理性自身免疫性抗体的产生、 免疫复合物的聚集以及B淋巴细胞的激活和T淋巴细胞调节异常为特征， 其异常自身免疫性抗体的产生与B细胞活化功能增强有关， 可溶性炎性介质和细胞因子在这个系统性疾病的病理过程中起着关键作用。CD30L是肿瘤坏死因子家族中的一员， 与其受体结合， 可产生多种生物学功能， 包括促进细胞的增生、 分化、 细胞因子分泌、 影响细胞生长、 诱导细胞凋亡等。本实验对SLE患者血清中可溶性CD30L的存在及水平进行研究， 探讨其在SLE发病中的作用。

　　1 对象和方法

　　1.1 研究对象 2007-03/2007-10在中国医科大学第一临床学院住院治疗的45例SLE患者， 诊断均符合美国风湿病学会1982年的分类诊断标准， 其中男2例， 女43例， 平均年龄37±12（17～70）岁， 平均病程2.60年（0.5月～20年）。按诊治情况分初治组和复治组， 分别为35例， 10例; 按症状有无分症状阳性组和症状阴性组， 症状包括口腔溃疡， 颜面皮疹， 脱发， 关节痛; 按SLEDAI评分分为病情相对稳定组和病情活动组， 分别为20例， 25例; 按尿蛋白有无分早期狼疮性肾炎组和显著狼疮性肾炎组， 分别为21例， 24例。另选20例来自健康体检中心的健康体检者做对照组， 其中男2例， 女18例， 平均年龄42±15（20～70）岁。各组在年龄、 性别构成上均无统计学意义。

　　1.2 方法 采清晨空腹静脉血3 mL， 离心后取上清， 置PC管中-20℃保存， 同批检测。血清sCD30L水平测定采用双抗体夹心ELISA法， 试剂盒由美国RapidBio Lab提供， 严格按照试剂盒说明书的程序进行操作。酶标仪（帝肯公司Rainbow型， 瑞士）450 nm处测A值， 绘制标准曲线， 计算sCD30L浓度值。同时测量dsDNA， SLEDAI评分， 24 h尿蛋白定量， 尿蛋白， 肌酐， 尿素氮， 尿α1， 尿β2等指标， 并以SLEDAI评分&>10作为评价病情活动的标准， 以肌酐， 尿素氮正常， 尿蛋白阴性作为早期肾病的判定标准。以上均由我院风湿免疫实验室， 肾病实验室及检验科协助完成， 异常判定均参考同期该项检查的正常值。同时收集整理患者其他临床资料。
　　
　　统计学分析: 试验数据采用SPSS13.0统计软件进行分析， 所有数据均采用 x±s表示， 在比较不同组间的血清sCD30L水平时采用t检验， sCD30L水平与实验室指标之间关系分析采用直线相关分析并计算Pearson相关系数r， 以P&<0.05为具有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 SLE及健康对照组sCD30L的表达水平 SLE组血清sCD30L水平显著高于正常对照组水平（P&<0.01）， 但初治组与复治组无明显差异（P&>0.05）， 症状阳性组与症状阴性组无统计学意义（表1）。

　　表1 SLE及正常对照组血清sCD30L水平（略）

　　bP&<0.01 vs对照组.

　　2.2 SLE组sCD30L水平与相关实验室指标的相关性分析 SLE组血sCD30L水平与dsDNA， 尿α1， SLEDAI评分呈正相关（r=0.324， P&<0.05; r=0.658， P&<0.05; r=0.486， P&<0.05）， 特别是在SLEDAI评分大于10分和早期狼疮肾病的患者中相关性更强（r=0.508， P&<0.01， r=0.715， P&<0.01）， 与24 h尿蛋白定量， 尿蛋白无明显相关。

　　3 讨论
　　
　　人CD30L 基因位于9q33， 由118 kb mRNA编码， 1993 年CD30L的cDNA被克隆并明确它属于TNF超家族。CD30L为Ⅱ型膜糖蛋白， Mr为4 000， 其蛋白有一个胞外区， 构成C端172个氨基酸， 胞质区为N 端有40个氨基酸残基。象其他TNF 家族蛋白一样， CD30L以三聚体形式存在［1］。CD30L的生物学作用正在探讨中。在以往的研究中， 主要通过免疫组化， CD30抗体， CD30L转染细胞及sCD30L融合蛋白等方式研究其作用， 并用流式细胞术等来测定CD30L。本实验用ELISA法检测到SLE及健康人血清中的sCD30L， 证实了其可溶性形式的存在。CD30L相关研究主要集中于淋巴瘤， 肿瘤等疾病中， 在风湿性疾病中的研究较少， 特别sCD30L在风湿病中的作用尚在探讨中。本实验通过检测人血清中的sCD30L水平， 发现sCD30L在健康人中仅低水平表达， 而在SLE组表达显著增加， 提示sCD30L对于维持正常的免疫功能有一定作用， 在存在明显免疫异常的疾病中表达明显增加， 说明其参与了疾病的发生发展过程。本实验结果显示SLE患者血清sCD30L水平水平的增高与dsDNA， 及SLEDAI评分呈正相关， 特别是在SLEDAI评分&>10的病例中， 相关性更强， 这表明sCD30L与SLE活动密切相关。而SLE是一种显著体液免疫异常的疾病， 推测sCD30L在SLE患者体内是促进B细胞增殖的， 并在调节体液免疫方面起重要作用［2］。特别是活动期， 外周血中的sCD30L及sCD30均明显增多［3］， sCD30作用于静止的CD30L+ B细胞， 通过"反信号"使其活化［4］， 大量的sCD30L进一步释放入血。 sCD30L与CD30+B细胞均明显增多， 相互作用增强， 产生多种自身抗体， 与DNA结合形成免疫复合物， 沉积于肾脏等器官， 导致广泛的组织病理损伤。同时， SLE患者存在T细胞功能异常， 活化的T细胞， 特别是CD4+ T细胞表达CD30L， 部分以可溶性形式释放入血， sCD30L可能通过与CD30+ T细胞上的CD30结合， 进一步激活外周CD4+ T细胞及促进sCD30L， Il6， Il8， Il4， Il5 ， TNFα等细胞因子释放［2］， 这些细胞因子进一步激活T、 B淋巴细胞， 导致大量自身免疫性抗体的产生， 促进了疾病的发展。另有研究表明， CD30L能诱导细胞凋亡［5］。SLE作为一种凋亡过度的疾病， 以CD4+ T细胞凋亡为主［6］， 推测sCD30L可能通过与SLE患者体内CD4+ T细胞上的受体结合， 诱导CD4+ T细胞凋亡， 导致CD4/CD8失调， 免疫功能紊乱， 促进自身免疫性疾病的发生发展。本研究显示sCD30L与尿α1呈正相关， 特别在尿蛋白阴性组中， 相关性更强， 而尿中α1微球蛋白水平的检测， 常可在尿常规检测到尿蛋白前， 早期就发现肾脏的病理改变及广泛的血管损伤［7］， 说明其在早期便参与狼疮性肾炎（LN）的发生。因此， sCD30L可以作为一种间接反应早期肾脏损伤的一个检测指标， 并有利于早期诊断。
　　
　　综上， sCD30L在SLE的发病及病情进展中均发挥重要作用。由于其作用涉及T， B淋巴细胞及细胞因子等多方面， 提示可能在其他自身免疫系统疾病中亦有重要意义， 有待进一步研究。

参考文献

　　［1］ 皮光环. CD30/CD30L的功能研究进展［J］. 国外医学·免疫学分册， 2001， 24(2): 83-86.

　　［2］ Gattei V， Degan M， Gloghini A， et al. CD30l is frequently expressed in human hematopoietic malignancies of myeloid and lymphoid origin［J］. Blood， 1997， 89（6）: 2048-2059.

　　［3］ 卢志明， 宋晓斐， 邵 松， 等. 系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞FcγRⅡb和血清sCD30水平变化与Th1/Th3细胞漂移关系的研究［J］. 检验医学， 2006， 21（6）: 606-609.

　　［4］ Kennedy M， Willis C， Armitage RJ. Deciphering CD30 ligand and its role in human biologyoral immunity［J］. Immunology， 2006， 118(2): 143-152.

　　［5］ Mori M， Manuelli C， Pimpinelli N， et al. CD30CD30 ligand interaction in primary cutaneous CD30+ Tcell lymphomas［J］.Blood， 1999， 94（9）: 3077-3083.

　　［6］ 周小华， 徐 娟， 张明顺， 等. 系统性红斑狼疮与细胞凋亡关系的研究［J］. 医学综述， 2004， 10（7）: 401-403.

　　［7］ 王晓非， 蒋 力， 刘海娜， 等. 早期狼疮肾炎患者血中sCD40L水平的变化及其意义［J］. 细胞与分子免疫学杂志， 2004， 20（4）: 469- 472.