CD4+CD25+调节性T细胞在肺癌患者外周血的表达及临床意义

【摘要】 目的：探讨晚期肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的表达及其临床意义。方法：采用流式细胞仪检测30例肺癌患者化疗前、后外周血中Treg的水平，并与30例健康人(对照组)进行比较。结果：(1)肺癌患者外周血中Treg比例为(15.0±2.3)%明显高于对照组(7.1±2.0)%(P&<0.001);(2)化疗前肺癌患者外周血中Treg为(15.0±2.3)%明显高于化疗后的(6.8±1.8)%(P&<0.001);(3)Treg水平与病理类型无关(P&>0.05)，与临床分期有关(P&<0.01)。结论：晚期肺癌患者外周血中Treg升高，其水平变化可能可以作为评估肺癌患者疗效的指标。

【关键词】 肺肿瘤; CD4+CD25+调节性T细胞;流式细胞检测仪

　　 [ABSTRACT] Objective:To investigate the expression of CD4 + CD25+ regulatory T cells in peripheral blood of patients with lung cancer and its clinical significance.Methods: Treg levels of 30 lung cancer patients which were counted by flow cytometer before and after chemotherapy were compared with that of 30 healthy people. Results: (1) percentage of Treg in lunge cancer patients was (15.0±2.3)% and is higher than (7.1±2.0)% in health people with significant difference (P&<0.001) (2) Treg level in lung caner patients before chemotherapy was (15.0±2.3)% ， obvious higher than (6.8±1.8)% of that after chemotherapy(P&<0.001). (3) Treg level is not related to the pathologic type of lung cancer(P&>0.05) but is relative to its clinical stage(P&<0.01). Conclusion: Treg level in peripheral blood of patients with lung cancer is higher than that of healthy people and can be an indicator for curative effects evaluation of lung cancer.

　　[KEY WORDS] Lung cancer; CD4 + CD25 + regulatory T cells; Flow cytometer

　　众所周知，肿瘤的发生、发展，转移与患者机体的免疫功能状态相关，肺癌患者免疫功能低下，往往导致病情的进展和治疗的失败。目前临床研究表明，在多种恶性肿瘤患者中，CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)水平升高，可能与免疫抑制、肿瘤进展有关[1]。本研究采用流式细胞仪测定Treg在肺癌患者外周血的表达，探讨Treg值变化对评估晚期肺癌患者疗效的作用。

　　1 资料和方法

　　1.1 一般资料

　　收集海口市人民医院肿瘤科2008年1月～2009年5月就诊的晚期肺癌患者30例临床资料，其中男性28例，女性2例，年龄35～71岁，平均(56.5±7.3)岁。组织学类型及分级：鳞癌15例，腺癌3例，小细胞未分化癌12例，均经病理学或细胞学证实。根据1997年国际抗癌联盟标准进行临床分期：Ⅲ期14例，Ⅳ16例。所有患者均无相关免疫性疾病和其他肿瘤病史，且无使用激素类药物及免疫抑制剂史。对照组为肿瘤医院健康体检职工30例，其中男性25例，女性5例，年龄31～70岁，平均(55.0±5.4)岁。

　　1.2 方法

　　分别采集化疗前、后肺癌患者、健康献血者外周静脉血2 mL，肝素抗凝，取静脉全血100 uL，分别加入CD4PE标记和CD25FITC标记的单克隆抗体(mAb)20 uL，设相应的阴性同型对照，室温闭光反应30 min，然后加2 mL溶血剂，5 min后离去上清，再加0.5～1.0 mL的PBS液洗涤2次，流式细胞仪(BD公司，FACS Calibur)检测，Cellquest软件分析数据，记录阳性细胞百分率，减去非特异对照值，样品在6 h内检测完毕。

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS 11.5统计软件进行方差分析及两两比较，实验的数据以(±s)表示，组内前、后比较采用配对t检验，检验水准 a=0.05。

　　2 结果

　　2.1 化疗前肺癌患者与对照组外周血Treg比较

　　治疗前肺癌患者外周血中Treg比例为(15.0±2.3)%，明显高于对照组(7.1±2.0)%(P&<0.001)。

　　2.2 肺癌患者化疗前、后Treg比较

　　化疗前肺癌患者外周血中Treg为(15.0±2.3)%，明显高于化疗后(6.8±1.8)%(P&<0.001)。

　　2.3 肺癌患者外周血Treg数量与病理类型、临床分期的关系

　　肺癌患者外周血中Treg数量与患者的病理类型无关(P&>0.05)，但与临床分期有关(P&<0.01)(表1)。表1 Treg与临床生物学特征的关系(%，±s)注：△与Ⅳ期比较P&<0.01。

　　3 讨论

　　CD4+CD25+Treg是近年发现的一群新型免疫抑制性T细胞，以往研究发现Treg在多种肿瘤患者的外周血和肿瘤组织中均有增高[1，2]，提示肿瘤细胞可能通过某种机制诱导了Treg的增殖和分化，同时其水平的增加可以促进肿瘤的生长，抑制抗肿瘤免疫效应[3]，Treg可能是参与肿瘤微环境中抑制免疫应答的细胞之一。

　　本组资料通过对30例肺癌患者和30例健康人外周血Treg水平检测，同样发现肺癌患者Treg水平显著高于健康人，提示肿瘤细胞通过某种机制增加Treg表达，同时Treg通过某种机制来促进肿瘤的生长和抑制机体的免疫应答[4]。本组发现化疗后Treg比例下降，提示经化疗后患者体内的肿瘤细胞减少，对Treg诱导作用减弱，Treg水平下降。并发现Treg水平与病理类型无关，而与临床分期有关，提示晚期肺癌患者免疫功能受到抑制。通过研究，我们认为肺癌患者外周血中Treg水平升高，可能是晚期肺癌免疫功能抑制的原因之一，监测其水平变化可能可以作为评估肺癌患者疗效、预后的一项指标。

参考文献

1 Okita R， Saeki T， Takashima S， et al. CD4+CD25+ regulatory T cells in the peripheral blood of patients with breast cancer and nonsmall cell lung cancer[J]. Oncol Rep， 2005， 14(5):12691273.

　　2 Wolf AM， Wolf D， Steurer M， et al. Increase of regulatory T cells in the peripheral blood of cancer patients[J]. Clin Cancer Res， 2003， 9(2):606612.

　　3 Terabe M， Berzofsky JA. Immunoregulatory T cells in tumor immunity[J]. Curr Opin Immunol， 2004， 16:157162.

　　4 Seo N， Hayakawa S， Takigawa M， et al. Interleukin10 expressed at early tumour sites induces subsequent generation of CD4+ Tregulatory cells and systemic collapse of antitumour immunity [J]. Immunology， 2001， 103(4):449457.