【摘要】 目的 研究盐酸格拉司琼片剂的人体药代动力学。方法 采用甲醇-0.05M醋酸钠缓冲液（70∶30，pH=6.0，含0.25%三乙胺）为流动相，以HPLC法测定30名男性健康志愿者单剂量口服2 mg受试片剂后的血药浓度。结果药-时数据经3p87程序处理，得到格拉斯琼的Cmax为10.6±4.0μg·L-1；达峰时间tmax分别为 1.37±10.2h；消除相半衰期t1/2ke为7.19±4.11h； AUC0→36h为 79.9±51.1 μg·L-1. h；AUC0∞为85.0±54.5μg·L-1· h。结论 本HPLC方法可快速测定药物血药浓度，操作简洁，分析快速准确。格拉司琼片剂药动学参数表明，血药浓度和药代动力学参数个体间变异较大，建议临床使用此药时应根据病人的具体情况采用个性化用药方案，以达到最佳疗效。
【关键词】 格拉司琼 药动学 高效液相色谱法
格拉司琼(granisetron)是一种高选择性5HT3受体抑制剂，效应高，作用时间长，具有良好的组织、体液分布性，消除速度快且耐受性好使该药安全可靠。可静注或口服给药，抑制化疗和放疗引起的恶心和呕吐效果良好［1］。本试验以盐酸格拉司琼片作试验制剂，在30名男性健康志愿者身上取得了格拉司琼片剂在人体内的药动学参数。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂、仪器 盐酸格拉司琼片剂：史克必成公司（SmithKline Beecham Pharmacerticals）生产，批号：BN008134 CHN。规格1mg。盐酸格拉司琼对照品（浙江海正药业股份有限公司提供，批号981008，纯度99.5%），盐酸甲氧氯普胺用作内标，含量：&>99%。甲醇： 美国Fisherbrand产品。 Waters高效液相色谱系统（600低压梯度泵，717自动进样器，474荧光检测器，Mellenium32色谱工作站）；XW80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂）；KS型康氏振荡器（广州市富城仪器厂）；LXJⅡ离心沉淀机（上海医用分析仪器厂）；高速离心机（美国雅培公司TDx仪附件）。
1.2 血浆样品的采集 据陶欣等报道，9例正常人口服格拉司琼片2 mg后，AUC0∞为68.09±42.68 μg·L-1· h（标准差达到平均数的2/3）［2］。表明口服格拉司琼片后吸收程度的个体差异大。因此，本试验用30例志愿者进行试验。30名男性志愿者，年龄22±1 岁，身高169±4 cm，体重62±5 kg。所有志愿者均经体检证实无胃肠道疾病、肝肾功能及血糖正常，且试验前一个月内未服用任何药物。试验期间禁烟酒，也不得服用任何其它药物。受试者随机分为两组，空腹12 h后于试验当天早晨服药，服药后继续禁食及禁糖水4 h，取血点为：0（服药前）、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、8、12、24、36 h时间点接受静脉抽血，每次约4 ml。离心分离出血浆，置-30℃低温冰箱中冷冻保存至测定。
1.3 血浆药物浓度的测定
1.3.1 色谱条件 色谱柱为Spherisorb CN（150×4.6mm，5μm）；柱温25℃。流动相为甲醇-0.05M醋酸钠缓冲液（70：30，pH=6.0，含0.25%三乙胺），进样量10μl；流速1 ml·min-1。检测波长为：λex=305nm，λem=365nm。
1.3.2 标准溶液配制 精密称取盐酸格拉司琼对照品适量，置于50ml容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容，得格拉司琼储备液（200μg·ml-1）；将格拉司琼储备液以水稀释，配制浓度分别为4、10、20、40、100、200、250、300 μg·L-1的格拉司琼标准液。
1.3.3 血浆样品的处理及测定 吸取血浆0.5 ml，加入内标溶液（60 μg·L-1）25μl及0.1M NaOH溶液250μl，旋涡混合。加入乙酸乙酯1.5ml，水平振荡10min，rpm2500离心10 min，分离乙酸乙酯层，N2吹干。重复提取一次。残渣加入0.01 M HCl 溶液100μl，旋涡混合1 min，10500 rpm离心10 min。吸取50μl进样。如浓度高于标准曲线范围的样本，稀释后测定，再用测定结果乘以稀释倍数。记录色谱图，以样品峰面积As与内标峰面积Ai之比值Y代入标准曲线计算血药浓度。
1.4 标准曲线制作 精密量取空白血浆0.5 ml，置10 ml具塞离心管中，分别加入不同浓度的格拉司琼标准溶液25μl，混匀，其浓度分别为0.2、0.5、1、2、5、10、12.5、15 μg·L-1。按血浆样品的处理与测定方法操作，以不同浓度格拉司琼系列溶液的As和Ai来计算Y（Y=As/Ai），以Y值为纵坐标，格拉司琼浓度C为横坐标进行直线回归。
1.5 回收率与方法重现性评价
1.5.1 回收率及精密度 分别于0.5 ml空白血浆中加入低、中、高3种浓度的格拉司琼标准溶液25μl，混匀，其浓度分别为0.5、5、15 μg·L-1，每个浓度制备5份，按血浆样品的处理与测定方法操作，以标准曲线方程计算出格拉司琼血药浓度，以测得值与加入值之比计算回收率，以1 d内测得的格拉司琼浓度计算日内精密度，以一周内5次，连续制备并测定4个分析批，测定的格拉司琼浓度计算日间精密度。
1.5.2 冻融试验 取已知浓度的血浆样品2 ml，分别置于－20℃条件下冻存，反复冻融2次，按照“血浆样品的处理与测定”方法测定冻融前后偏离度。
2 结果
2.1 色谱行为 在上述色谱条件下，格拉司琼与内标分离良好，保留时间分别为8.35 min和9.75 min，见图1。
图1 格拉司琼色谱图（略）
1.空白血浆色谱图；2.格拉司琼色谱图；3.内标色谱图；4.血浆样品色谱图；A.格拉司琼；B.内标
2.2 线性关系与检测限 在0.2～15 μg·L-1浓度范围内，格拉司琼峰面积比Y与浓度C有良好的线性关系，标准曲线方程为：Y=0.2287C-0.0243（r=0.9993），最低检测浓度为0.2μg·L-1。见图2。
图2 格拉司琼标准曲线（略）
2.3 回收率与重现性 回收率及精密度 高、中、低三种浓度回收率见表1。日内RSD≤4.9%，日间RSD≤8.5%。日内与日间的的精密度均小于10％。冻融试验测定结果见表2。试验结果表明检测方法的回收率与精密度符合生物样品分析的要求。
表1 回收率与精密度（略）
表2 冻融试验偏离度的测定结果（略）
2.4 血药浓度测定结果 30名健康志愿者分别口服格拉司琼片剂和胶囊剂后平均药-时曲线见表3和图3。
表3 30名志愿者口服格拉司琼片2 mg后血药浓度（略）
将血药浓度-时间资料经3p87程序拟合，格拉司琼片剂的主要药动学参数为： Cmax为10.6±4.0μg·L-1；达峰时间tmax分别为 1.37±10.2h；消除相半衰期t1/2ke 为7.19±4.11h； AUC0→36h为 79.9±51.1 μg·L-1.h；AUC0-∞为85.0±54.5μg·L-1·h。
图3 30名志愿者单次口服2mg格拉司琼片剂后的药时曲线（略）
3 讨论
本文在参考国外文献的基础上［３］，先后采用了几种不同组分、比例的流动相，优化了色谱条件。经实验，采用甲醇-0.05M醋酸钠缓冲液（70：30，pH=6.0，含0.25%三乙胺）为本品含量测定的流动相，所得峰形较好，分离度令人满意。具有操作简洁、无干扰、分析快速准确的特点，符合人体药动学的要求。
30名健康志愿者单剂量口服2 mg的格拉司琼片剂后的血药浓度时间曲线显示，血药浓度和药代动力学参数个体间变异较大，因此建议临床使用此药时应根据病人的具体情况适当调整给药剂量，以达到最佳疗效。
参考文献
［１］ Huang，-C-T;Chen， -C-T;Tsai， -T-H:Pharmacokinetics of granisetron in rat blood and brain by microdialysis［J］．Life-Sci． 1999，64(21):1921～1931．
［2］ 笪红远，凌树森．格拉司琼的研究进展［J］．中国临床药理学杂志，1999，15(5): 374～380．
［3］ 陶 欣，朱秀平，卓海通，等.格拉司琼片人体生物利用度和药代动力学研究［J］．中国临床药理学杂志， 1999，15（1）：45～47．