作者：陈贵海，武丽，臧知明，邓巍，黄金刚，运晨霞
【摘要】 目的 探讨原发性高血压病和2型糖尿病患者抵抗素、脂联素与血瘀证的关系。方法 以原发性高血压和糖尿病患者为对象，空腹取静脉血制备血浆、血清，酶免法检测血清脂联素、抵抗素，放免法检测血清瘦素、胰岛素和血浆内皮素、肿瘤坏死因子，酶法检测血清血糖、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇。使用SAS 9.1 for windows分析各项指标与血瘀证的关系。结果 糖尿病组血瘀证检出率0.423，高血压病组为0.246，差异有统计学意义;血瘀证检出率随着病程延长而增高。与非血瘀证组比较，血瘀证组瘦素、内皮素、肿瘤坏死因子水平升高，脂联素、胰岛素水平降低，血清抵抗素差异无统计学意义。与原发性高血压病患者比较，2型糖尿病患者抵抗素、脂联素、瘦素、胰岛素水平均升高，而内皮素、肿瘤坏死因子差异无统计学意义。结论 脂联素与血瘀证形成负相关;肥胖致瘀可能是由脂肪因子调节血管活性因子实现的;肥胖性血瘀可能与抵抗素水平无关。
【关键词】 原发性高血压;2型糖尿病;肥胖;血瘀证;抵抗素;脂联素
Abstract：Objective To investigate the correlation between resistin， adiponectin and the blood stasis syndrome in diabetic and primary hypertension patients. Method The primary hypertension and diabetes patients were drawn vein blood to make plasma and serum. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method was used in checking serum adiponectin and resistin. Radioimmuoassay method was applied in checking serum insulin， leptin， ET and tumor necrosis factor (TNF). The fasting blood sugar， total cholesterol (TC)， triamid-glycerin (TG)， high dense lipoprotein-cholesterol (HDL) and low dense lipoprotein- cholesterol (LDL) were detected by the chemi-enzymic method. The relation between the indexes and blood stasis syndrome was analyzed by SAS9.1 for windows. Results The detectable rate of the blood stasis syndrome in the diabetic patients was 0.423， while 0.246 in the primary hypertension patients. The difference was significant in statistics. Incidence of blood stasis syndrome increased with the course of illness. Compared with the non-blood stasis syndrome group， the content of leptin， ET and TNF in the blood stasis syndrome group significantly raised， but the content of adiponectin and insulin diminished. The content of resistin did not have obviously change. Compared with the primary hypertension patients， the level of leptin， adiponectin， resistin， insulin in the diabetic patients raised， but there wasn’t significant difference in the level of ET and TNF. Conclusions There is negative correlation between adiponectin and the blood stasis syndrome. The link between obesity and the blood stasis syndrome may be through fat factor regulating vasoactive factor. The blood stasis syndrome caused by obesity maybe have nothing to do with the consistency of resistin.
Key words：primary hypertension;type 2 diabetes;obesity;blood stasis syndrome;resistin;adiponectin
本研究选择与肥胖密切相关的原发性高血压病、2型糖尿病患者为研究对象，通过对血清抵抗素、脂联素、瘦素等脂肪因子及血浆内皮素等血瘀证相关指标的观察，分析肥胖与血瘀证之间的相互关系，为活血化瘀治疗肥胖及预防肥胖相关性疾病提供依据。
1 资料与方法
1.1 病例选择标准
观察病例均来源于2006年6月-2007年5月广西壮族自治区南宁市中医医院内科病房住院患者。
纳入标准：①糖尿病诊断根据1999年WHO专家咨询报告的标准[1]：空腹血糖≥7.0 mmol/L，或糖耐量试验服糖后2 h血糖≥11.1 mmol/L，或随机血糖≥11.1 mmol/L。②高血压病诊断采用1999年10月中华人民共和国卫生部、高血压联盟制定的《中国高血压防治指南(试行本)》[2]：收缩压≥18.7 kPa或舒张压≥12.0 kPa为高血压。③年龄在45～75岁之间。
排除标准：①继发性高血压、继发性糖尿病;②高血压病患者合并心肌梗死、脑出血或2型糖尿病患者合并酮症酸中毒、高渗性休克等严重并发症者;③伴重度心肺功能不全、重度心律失常，肝脏、肾脏、造血系统等严重原发性疾病者;④精神病患者，或妊娠、哺乳期妇女;⑤年龄不满45岁或超过75岁者;⑥拒绝参加研究者。
符合纳入标准①+③或②+③，而且不符合排除标准者纳入研究范围，并根据患者临床表现分为血瘀证组与非血瘀证组。血瘀证诊断按中国西医结合">中西医结合学会活血化瘀专业委员会于1982年制定、1986年修订的血瘀证诊断标准[3]。
1.2 仪器与试剂
TDL-5000B放免专用冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂);SN-695B型智能放免γ测量仪(上海原子核研究所日环仪器一厂);MK3酶标仪(热电上海仪器有限公司)。脂联素、抵抗素ELISA试剂盒(美国ADL公司生产，上海卓康生物科技有限公司代理);肿瘤坏死因子、内皮素放免试剂盒(北京北方生物技术研究所);胰岛素放免试剂盒(天津协和医药科技有限公司);瘦素放免试剂盒(中国人民解放军总医院科技开发中心放免所)。
1.3 观察指标及方法
空腹测体质量、身高后，取静脉血5 mL，于含有30 ?L EDTA和40 ?L抑肽酶的试管中加入2 mL血液，混匀，于空白试管中加入血液3 mL自凝。抗凝血立即以4 ℃、3 000 r/min离心10 min，取血浆1 mL，置-20 ℃冰箱保存备用。自凝管在室温下自凝析出血清后，以4 ℃、4 000 r/min离心20 min，取血清1.5 mL，分为2份，酶法检测血清空腹血糖、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇，另一份置-20 ℃冰箱保存备用。
取血浆或血清1份，室温下复融，以4 ℃、3 000 r/min离心5 min，取上清液测定。根据药盒说明书提供的加液程序操作，由MK3酶标仪检测，或SN-695B型智能放免γ测量仪预先编制程序，直接给出有关参数、标准曲线，计算样品浓度。
酶免分析在广西中医学院微生物与免疫学实验室进行，放免检测在广西中医学院附属瑞康医院同位素实验室完成。
1.4 统计学方法
采用SAS 9.1 for windows软件包完成。计数资料采用χ2检验，等级资料采用Ridit分析，计量资料用—(—资)±s表示，方差齐性检验采用方差分析，组间比较采用t检验(方差不齐时采用t’检验)，并作总体样本多元线性相关分析。统计分析全部以P&<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 一般资料
共128例病例符合有关标准，纳入研究范围，其中高血压病患者57例，2型糖尿病患者71例。血瘀证组44例，非血瘀证组84例，血瘀证检出率0.344。研究过程中无病例脱落，128例全部进入结果分析。
血瘀证组44例中，男19例，女25例;体力劳动者19例，脑力劳动者25例;糖尿病30例，高血压病14例;平均年龄(56.4±7.02)岁;平均病程(8.84±3.92)年。非血瘀证组84例中，男46例，女38例;体力劳动者42例，脑力劳动者42例;糖尿病41例，高血压病43例;平均年龄(53.6±9.24)岁;平均病程(6.85±4.22)年。血瘀证组与非血瘀证组年龄、性别、职业构成等差异无统计学意义(P&>0.05);糖尿病组血瘀证检出率0.423，高血压病组为0.246，2组比较差异有统计学意义(χ2=4.387 0，P&<0.05)。血瘀证组与非血瘀证组病程分布(Ridit分析)及平均病程(t检验)比较见表1。可见，随着病程延长，血瘀证检出率明显增高;血瘀证组与非血瘀证组比较，平均病程差异有统计学意义(P&<0.05)。 表1 血瘀证与非血瘀证患者病程分布及平均病程比较注：Ridit分析以非血瘀证组为参照组
2.2 血瘀证组与非血瘀证组抵抗素、脂联素等的比较
与非血瘀证原发性高血压病、2型糖尿病患者比较，血瘀证组血清(浆)瘦素、内皮素、肿瘤坏死因子浓度升高，而脂联素、胰岛素降低，抵抗素差异无统计学意义。见表2。
2.3 原发性高血压病与2型糖尿病患者抵抗素、脂联素等比较
与原发性高血压病患者比较，2型糖尿病患者抵抗素、瘦素、胰岛素、脂联素浓度均升高(P&<0.05或0.01)，而内皮素、肿瘤坏死因子差异无统计学意义。见表3。表2 血瘀证与非血瘀证患者抵抗素、脂联素、瘦素、胰岛素、内皮素、肿瘤坏死因子水平比较(—(—素)±s)注：抵抗素试剂盒提供的正常参考值为小于200 ?g/L表3 原发性高血压病、2型糖尿病患者抵抗素、脂联素、瘦素、胰岛素、内皮素、肿瘤坏死因子水平比较(—(—素)±s)
3 讨论
原发性高血压病、2型糖尿病的发病均与肥胖有关，而且肥胖者脑卒中发病率、冠心病发病率也都高于非肥胖者。通过对肥胖等相关疾病进行研究，发现代谢综合征病变过程中多伴有血管内皮细胞功能障碍、凝血和纤溶系统改变等，往往并发大血管、微血管并发症。近年来认识到内皮损伤参与了高血压的发生、发展过程。当内皮细胞受损时，一氧化氮和前列环素分泌减少，血栓素和内皮素分泌增加，促进血管收缩，外周阻力增加，引起血压升高。糖尿病患者的高胰岛素、高血脂能改变血管平滑肌细胞(VSMC)的形态结构，促进VSMC的增殖;高浓度的糖和氧化低密度脂蛋白可直接损害内皮细胞，也可引起内皮源性血管活性因子平衡失调。近年来认为，血管内皮细胞是血瘀形成的病理基础，而高血压病、糖尿病均有血管内皮细胞分泌功能的改变，所以，可以认为高血压病、糖尿病普遍存在血瘀的趋势。本临床资料中，血瘀证检出率为0.344，而且糖尿病患者血瘀证检出率为0.423，高血压病患者为0.246，差异有统计学意义(χ2=4.3870，P&<0.05)，表明糖尿病较高血压病更易于形成血瘀证;而且随着病程延长，血瘀证检出率明显增高(95%可信区间为0.511 6～0.722 2)，与中医学“久病入络”理论一致。
抵抗素(Resistin)是2000年由Steppan发现的一种由脂肪细胞分泌的蛋白激素。其生物学效应尚不完全清楚，主要是对抗胰岛素，使血糖水平升高、脂肪细胞增生而致肥胖，而且在糖尿病发病过程中具有重要意义。许多研究结果均支持抵抗素与中心型肥胖、胰岛素抵抗有关。尽管近期有研究认为人类血中抵抗素主要来源于巨噬细胞而非脂肪组织，与啮齿动物不同，抵抗素可能不是人类2型糖尿病发病的关键因素[4]。但我们的研究结果仍然显示抵抗素水平在高血压病与糖尿病患者之间存在显著差异。另一方面也有研究结果显示，抵抗素可促进内皮细胞活化、参与血管内皮细胞功能稳态的调节[5]，推测抵抗素在2型糖尿病心血管病变发生发展过程中可能有重要病理生理学作用。但我们的研究未发现抵抗素在血瘀证与非血瘀证组之间存在差异，表明抵抗素不是肥胖性血瘀证形成的主要原因。同时发现糖尿病组抵抗素水平明显高于高血压病组，表明抵抗素与高血压病关系不密切。
脂联素(Adiponectin，Acrp30)是1995年由Scherer发现的一种脂肪细胞特异性分泌的蛋白激素。研究发现其含量与体质量指数呈负相关，糖尿病患者血浆中脂联素含量比非糖尿病患者低，而伴有动脉粥样硬化的糖尿病患者含量更低，表明脂联素在调节糖代谢中具有重要作用。脂联素还有抗动脉粥样硬化的效应，并参与血管损伤的修复。研究显示，糖尿病组脂联素水平高于高血压病组;而血瘀证组低于非血瘀证组，表明脂联素与血管系统的联系更密切，具有防止血瘀证形成的作用。
血瘀证组瘦素水平显著高于非血瘀证组(P&<0.05)，与前期的研究结果一致[6]，提示瘦素与肥胖血瘀证形成有关。有研究发现内皮细胞上存在瘦素受体[7]，而且瘦素与内皮素、血压、体质量指数以及脂肪百分比正相关，表明瘦素有可能对内皮细胞功能产生影响，而且这种影响可能是肥胖者血瘀证形成的主要原因之一。
本研究发现，随着病程的延长，血瘀证检出率有增高的趋势，符合中医学“久病入络”理论。一般认为肥人多气虚、多痰湿，随着病程的延长，气虚血瘀或痰瘀互结是病理发展的必然结果，因此，应进一步加强活血化瘀治疗肥胖病的研究。
参考文献
[1] 世界卫生组织非传染性疾病监测部.WHO专家咨询报告：糖尿病的定义、诊断、分型与糖尿病并发症(摘登)[J].辽宁实用糖尿病杂志，2000，8(4)：52-53.
[2] 中华人民共和国卫生部，中国高血压联盟.中国高血压防治指南(试行本)[S].1999.
[3] 第二届全国活血化瘀研究学术会议.血瘀证诊断标准[J].中国中西医结合杂志，1987，7(3)：129.
[4] Janke J， Engeli S， Gorzelniak K， et al. Resistin gene expression in human adipocytes is not related to insulin resistance[J]. Obes Res，2002，10：1-5.
[5] Li MS， Chao HW， Paul WM， et al. Rwsistin promotes endothelial cell activation：further evidence of adipokine-endothlial interaction[J]. Circulation，2003，108：736-740.
[6] 陈贵海.肥胖与血瘀证形成的相关性研究[J].山东中医药大学学报， 2002，26(2)：126-131.
[7] Lord GM， Matarese G， Howard JK， et al. Leptin modulates the T-cell immune response and reverses starvation-induced immunosuppression[J]. Nature，1998，6696：897-901.