不同炮制方法对天麻中天麻素含量的影响

　　　　 作者：尹珉，毛克臣，陈志峰，庄志红，黄健，曹艳楠，何晓东

【摘要】 　　目的 考察不同的炮制方法对天麻中主要化学成分天麻素含量的影响。方法 采用RP-HPLC法。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 ?m)，流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液(3∶97)，流速为1.0 mL/min，柱温为25 ℃，检测波长为230 nm。对不同产地经过硫磺熏蒸与未经过硫磺熏蒸的天麻进行含量测定。结果 样品平均回收率为100.29%，RSD＝1.82%(n＝6)。在天麻的炮制加工中，经过硫磺熏蒸的天麻，天麻素含量分别为0.15%、0.19%、0.11%，未经过硫磺熏蒸的天麻，天麻素含量分别为1.44%、0.44%、0.82%。结论 在天麻的炮制加工中经过硫磺熏蒸对天麻素的含量影响较大。

【关键词】 天麻；天麻素；炮制；硫磺；高效液相色谱法；含量测定
　　
　　Abstract：Objective To investigate the effect of different processing methods on the main chemical constituents of Gastrodia-gastrodin. Methods RP-HPLC method was used with columns Agilent Eclipse XDB-C18 (150 mm×4.6 mm， 5 μm)， mobile phase of acetonitrile-0.05% phosphoric acid solution (3∶97)， flow rate of 1.0 mL/min， column temperature was 25 ℃， detection wavelength was 230 nm. Gastrodia of three different areas were measured. Results The average recovery was 100.29%， RSD＝1.82% (n＝6). Gastrodin contents of Gastrodia processed with sulfur fumigation were 0.15%， 0.19%， 0.11% respectively. Gastrodin contents of Gastrodia without sulfur fumigation were 1.44%， 0.44%， 0.82% respectively. Conclusion Sulfur fumigation has great impact on gastrodin content in processing of Gastrodia.
　　
　　Key words：Gastrodia；Gastrodin；processing；sulfur；HPLC；content determination
　　
　　天麻为兰科植物天麻Gastrodia elata Bl.的干燥块茎，又称为赤箭、木浦、明天麻，主产于贵州、四川、云南、湖北、陕西等地。冬、春二季采挖，冬季产者称“冬麻”，春季产者称为“春麻”。采挖后除去地上茎，洗净，及时擦去环节上的鳞叶及粗皮，随即用清水或矾水微浸，以防变黑，再蒸透取出，切薄片晾干或烘干。天麻的商品规格分野生、家种两种，现在市场销售的大多是家种的[1]。天麻性平、味甘，归肝经，具有熄风止痉、平肝潜阳的功能，主要用于治疗头痛、眩晕、肢体麻木、小儿惊风、癫痫抽筋、破伤风[2]。天麻的主要化学成分为天麻素(即对羟基苯甲醇-b-d-葡萄吡喃糖)，并含对羟基苯甲醇、对羟基苯基甲醚4(4-羟苯氧基)-苯基甲醚、双醚(4-羟苯基)、琥珀酸、赤箭、β-谷甾醇等，其中天麻素是其饮片质量的标定检测成分。本试验采用反相高效液相色潽(RP-HPLC)法，选取贵州、大别山、陕西3种不同产地的天麻，考察天麻在炮制加工过程中经过硫磺熏蒸与未经过硫磺熏蒸天麻素的含量变化，以了解硫磺熏制对天麻中天麻素含量的影响。

　　1 仪器与试药
　　
　　Agilent 1200高效液相色谱仪，包括Agilent G1311A四元泵(Quatpump)、Agilent G1322A真空在线脱气机(Degasser)、Agilent G1329A自动进样器(ALS)、Agilent G1315D DAD检测器、Agilent 1200化学工作站、Agilent G1316A(TCC)柱温箱，色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 ?m)， AL204型电子天平(METTLER TOLEDO)。天麻素对照品购自中国药品生物制品检定所(批号110807-200205)，天麻为陕西天麻、贵州天麻、大别山天麻，经本院药剂科鉴定为Gastrodia elata Bl。乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件
　　
　　色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(150 mm×4.6 mm，5 ?m)；流动相：乙腈-0.05%磷酸水溶液(3∶97)；流速：1.0 mL/min；柱温：25 ℃；检测波长：230 nm；进样量为10 ?L。色谱柱的理论板数(n)按天麻素峰计算为5 000。在此色谱条件下，天麻素与其他组分均能达到基线分离。

　　2.2 对照品溶液的制备
　　
　　精密称取在80 ℃减压干燥1 h的天麻素对照品适量，加流动相制成每1 mL含50 ?g的溶液即得。

　　2.3 供试品溶液制备
　　
　　取本品，在80 ℃减压干燥、粉碎，取粉末(过四号筛)约0.8 g，精密称定重量，加热回流提取3 h，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，滤过，取续滤液10 mL，浓缩至近干，残渣加流动相，转移至10 mL量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。

　　2.4 线性关系
　　
　　精密吸取天麻素对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，分别用稀乙醇稀释。按上述色谱条件进样测定。以天麻素平均峰面积积分值为纵坐标、质量浓度为横坐标进行线性回归，其线性方程为：Y＝20.368X－101.42，相关系数r＝0.987 (n＝6)。结果表明，天麻素在20～120 ?g/mL范围内进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。

　　2.5 回收率试验
　　
　　采用加样回收法。精密称取已测定含量的同一样品6份，分别加入天麻素对照品，按供试品溶液的制备方法制备供试液，进样，记录色谱图，计算回收率。平均回收率为100.29%，RSD＝1.82，结果见表1。表1 加样回收率试验结果(略)

　　2.6 样品测定
　　
　　分别精密吸取对照品溶液与供试品(样品1～6)溶液各10 ?L，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，样品含量按干燥品计算，结果见表2。不同炮制方法HPLC测定结果见图1。表2 天麻素含量测定结果(略)

　　3 讨论
　　
　　通过试验观察，在天麻的炮制加工过程中，经过硫磺熏蒸过的天麻中天麻素的含量分别为0.15%、0.19%、0.11%，未经过硫磺熏蒸过的天麻中天麻素含量分别为1.44%、0.44%、0.82%。硫磺熏蒸对天麻中天麻素的含量影响较大。按照2005年版《中华人民共和国药典》(一部)天麻中天麻素含量的规定，本品按干燥品计算，含天麻素不得少于0.20%[3]。经过硫磺熏蒸后天麻中天麻素的含量普遍低于现行的质量标准。
　　
　　在天麻的炮制加工过程中，使用硫磺熏蒸虽具有保鲜、防霉、防虫的效果，加工切制出的饮片也整洁美观，但由于硫磺熏蒸对天麻素的含量影响较大，且硫磺含有钙、铝、硅、砷、铁、镁、钛、铬、锰等多种元素，有的含砷量还较高，倘若饮片在加工中被污染，会对人体产生有害影响，故应禁止使用硫磺熏蒸。

参考文献