作者：王秀文，刘养清，薛占成，仝永斌，贾梦蛟，张辉，丁波
【摘要】 目的 确定连翘叶较好的干燥方法，为连翘叶的开发利用提供部分依据。方法 采用RP-HPLC法，色谱柱为XTerraTMRP8(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%醋酸＝12∶88；连翘酯苷的检测波长为328 nm，柱温为30 ℃。结果 阴干、微波干燥、吸水纸吸湿干燥、蒸2～10 min、煮2～10 min处理的连翘叶中连翘酯苷含量较高；晒干、烘干、红外干燥、真空干燥处理的连翘叶中连翘酯苷含量较低。结论 综合连翘酯苷含量、成本及操作难易度的因素，蒸2～10 min或煮2～10 min是连翘叶比较适宜的干燥方法。
【关键词】 连翘叶；干燥方法；连翘酯苷；反相高效液相色谱法
Abstract：Objective Better drying methods of Forsythia suspense leaves was studied to provide some basis for the development and utilization of Forsythia suspense leaves. Methods A RP-HPLC method was used on XTerraTMRP8 (3.9 mm×150 mm， 5 μm) column with acetonitrile-0.1% acetic acid solution (12∶88) as mobile phase for forsythoside. The detection wavelength of forsythoside was at 328 nm and detection temperature was 30 ℃. Results The contents of forsythoside was higher when dry， microwave drying， absorbent paper drying， steaming 2～10 min， cooking 2～10 min was used to deal with Forsythia suspense leaves. The contents of forsythoside was lower when dried， drying， infrared drying， vacuum drying was used to deal with Forsythia suspense leaves. Conclusion Steaming 2～10 min， cooking 2～10 min is more appropriate for drying of Forsythia suspense leaves， when factors of the contents of forsythoside， the cost and ease of operation were considerd.
Key words：Forsythia suspense leaves；drying methods；forsythoside；RP-HPLC
连翘为落叶灌木木犀科植物连翘Forsythia suspensa (Thtmb.) Vahl的果实，为40种常用大宗药材之一，年用量约800万kg，并不断增大[1]。目前山西连翘的生产存在如下问题：野生资源日趋减少且开发不平衡，产地抢青现象时有发生，造成连翘资源的紧缺，这就促使人们寻找扩大连翘资源的途径。前人的研究也表明，连翘叶蒸晒品的连翘酯苷含量比生晒品高[2]。本课题在前人研究基础上，通过对9种不同干燥方法处理的连翘叶中连翘酯苷含量的测定，对连翘叶干燥方法进行优选，以便为连翘叶的进一步开发利用提供有价值的参考。
1 材料
1.1 仪器与试剂
高效液相色谱仪，包括美国DIONEX全自动进样液相色谱仪，PDA二极管阵列检测器，P680四元泵，CTT-100ASVP柱温箱系统控制器；FA/JA万分之一电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；METTLER.TOLEDO AB135-S十万分之一分析天平(上海天平仪器厂)；SK250H超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；红外灯(250 W)；WP700微波炉(1 000 W，2 450 MHz，天津乐金电子电器有限公司)；DZF-6052电热真空干燥箱(郑州南北仪器设备有限公司)；GZX-9146MBE数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂)。乙腈(色谱纯，天津科密欧有限责任公司)，95%乙醇(色谱纯，天津科密欧有限责任公司)，冰醋酸(分析纯，天津巨星有限责任公司)，甲醇(色谱纯，天津科密欧有限责任公司)。连翘酯苷标准品(上海友思生物技术有限公司)。
1.2 样品
连翘叶采集于山西省安泽县黄花岭，经山西中医学院中药鉴定教研室牛燕珍老师鉴定。将鲜连翘叶混匀后等分为数份，分别晒干、阴干、40 ℃烘干、微波干燥、红外干燥、真空干燥、吸水纸干燥和蒸、煮处理。晒干系将鲜药置于室外阳光下，直接曝干；阴干系将鲜药薄摊于室内通风处，自然晾干；烘干系将鲜药置于恒温箱中，控制温度为40 ℃，将药材干燥；微波干燥系将鲜药置于微波炉中进行干燥；红外干燥系将鲜药在红外灯下干燥；真空干燥系将鲜药在真空干燥机中干燥；吸水纸干燥系用吸水纸将鲜药干燥。蒸、煮处理系指对鲜药蒸、煮不同时间后，与阴干同等条件干燥样品。药材干燥后，用小型粉碎机粉碎，粉末在60 ℃下干燥4 h，置于干燥器中备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱XTerraTMRP8(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%醋酸＝12∶88；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：328 nm；进样量：5 μL；理论塔板数按连翘酯苷计算不低于5 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取连翘酯苷对照品约3.44 mg，置于1 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得3.44 mg/mL对照品的储备液。精密吸取该对照品储备液0.2 mL，置2 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，即得0.344 mg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取连翘叶样品约0.1 g，置于10 mL容量瓶中，加75%乙醇溶解并稀释至刻度，称重，于超声清洗器中超声提取40 min，再称定重量，用75%的甲醇补足重量，摇匀，静置30 min，用0.45 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取连翘酯苷对照品溶液2、4、8、16、24 μL，按“2.1”项下方法进行测定，以峰面积对对照品的进样量作工作曲线，得回归方程为：Y＝20.868X－2.127 3(r＝0.999 4)，连翘酯苷在0.688～8.256 μg范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取5 μL 0.344 mg/mL连翘酯苷对照品溶液，按“2.1” 项下方法进行测定，连续进样6次，测定峰面积，经计算，RSD＝1.8%。
2.6 重复性试验
精密称取煮5 min处理的样品6份，每份约0.1 g，按“2.3” 项下方法平行制备供试品溶液，分别取5 μL进样测定，测得连翘酯苷的平均含量为12.30%，RSD＝1.1%。
2.7 稳定性试验
精密吸取煮5 min处理的样品溶液5 μL，分别在0、1、2、4、6、8 h进样，测定峰面积，经计算，连翘酯苷的平均含量为12.32%，RSD＝0.65%。由试验结果可知，样品溶液在8 h内稳定。
2.8 回收率试验
精密称取已测定含量的连翘叶9号样品6份，每份约0.05 g，置于10 mL容量瓶中，分别加入连翘酯苷对照品溶液(3.44 mg/mL)，其余按“2.3”项下方法制备，分别取5 μL测定，连翘酯苷的回收率为98.85%，RSD＝1.9%(n＝6)。
2.9 样品测定
当用不同干燥方法处理时，测得的连翘酯苷含量有显著差别。吸水纸干燥和微波干燥后，连翘酯苷含量比较高，其含量分别为13.56%、13.19%。阴干、蒸5 min、煮2 min或煮10 min后，连翘酯苷含量也比较高，其含量分别为12.12%、12.44%、12.86%、12.82%。而真空干燥、晒干、烘干、红外干燥处理的连翘酯苷含量较低，其含量分别为6.74%、4.87%、2.43%、2.21%。测定结果见表1；色谱图见图1。表1 样品测定结果（略）
3 讨论
3.1 流动相配比的选择
试验中比较了不同配比的流动相：乙腈-0.1%醋酸水溶液＝10∶90、15∶85、10∶80、12∶88，结果以乙腈-0.1%醋酸水溶液12∶88流动相系统，连翘酯苷与其他杂质组分获得较好的分离，且峰形对称。
3.2 干燥方法的选择
虽然微波干燥和吸水纸干燥连翘酯苷含量很高，但前者成本比较高，而后者不适于大规模生产，因而应用受到一定的限制。而阴干易受天气影响，天气不好则药材易发生霉变，所以其应用受到一定的限制。而采用蒸或煮的方法来干燥样品，连翘叶中连翘酯苷含量也较高，且这两种方法成本较低，操作简便，因而是连翘叶比较理想的干燥方法。
3.3 蒸、煮时间的优化
根据测定结果可知，无论是采用蒸还是煮，处理2、5、10 min后，连翘酯苷含量均较高，且差别不大，当蒸或煮超过10 min，随着处理时间的延长，连翘酯苷含量随之降低。我们还发现，干燥后药材外观色泽深浅与连翘酯苷含量呈负相关，即药材色泽越深，连翘酯苷含量越低。连翘酯苷为一种酚性成分，一直都被视为连翘的主要有效成分之一，但其结构较为复杂，遇酸、碱或高温等不稳定，易引起分解，所以对其含量进行检测更加显得重要。
参考文献
[1] 李 敏.中药材市场动态及应用前景[M].北京：中国医药科技出版社， 2006.303.
[2] Ding G， Liu YZ. Study progress in Chinese traditional medicine Forsythia suspense and its genus plants[J]. J Chin Med Mat，1994， 17(10)：42－44.