关于高效液相色谱法测定种子三达丸中芍药苷的含量

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论文字数:**** 论文编号:lw2023112351 日期:2025-08-16 来源:论文网

     作者:张国民,杨工昶,齐赤虹,王海迪

【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定种子三达丸中芍药苷含量的方法。方法 色谱柱采用Kromasil-C18(5 μm, 4.6 mm×250 mm);流动相为甲醇-水(30∶70);检测波长为230 nm;流速为1.0 mL/min。结果 芍药苷在0.11~2.14 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9,n=5),平均回收率为98.2%(RSD=1.72%,n=6)。结论 本方法简便、可靠、准确,可用于该制剂的质量控制。

【关键词】 种子三达丸;芍药苷;高效液相色谱法;含量测定

   Determination of Peoniflorin in Zhongzi Sanda Pill by HPLC ZHANG Guo-min, YANG Gong-chang, QI Chi-hong, et al 1.Kaifeng Institute for Drug Control, Kaifeng 475002, China;2.Henan Medical and Pharmaceutical School, Kaifeng 475001, China  Abstract:Objective To establish a HPLC method for determination of Peoniflorin in Zhongzi Sanda Pill. Method Kromasil-C18 column (5 μm, 4.6 mm×250 mm) was used. Mobile phase was methanol-water (30∶70). The detective wavelength was at 230 nm. The flow rate was 1.0 mL/min. Results There was a good linear relationship between the injection amount 0.11~2.14 μg and a good peak form for Peoniflorin in Zhongzi Sanda Pill. The average recovery rate was 98.2% (RSD=1.72%, n=6). Conclusion This method is convenient, effective and accurate for the quality control of Peoniflorin in Zhongzi Sanda Pill.

  Key words:Zhongzi Sanda Pill;Peoniflorin;HPLC;content determination

  种子三达丸由益母草、丹参、白芍等23味药组成,具有调经止痛的功效,用于月经不调、行经腹痛、头晕目眩、赤白带下、四肢浮肿等症的治疗。种子三达丸是原部颁标准《中药成方制剂》[1]第三册收载的品种,方中白芍是君药之一,其主要成分为芍药苷,具有镇静、解痉、抗炎、抗凝血、抗血栓等多方面的作用[2]。原质量标准中无含量测定项,为了有效控制药品质量,确保该制剂的疗效,本试验选用芍药苷作为质量控制的定量指标,采用HPLC法对其进行测定含量,方法简便、准确。

  1 仪器与试药

  Agilent1100型高效液相色谱仪(VWD检测器);CX250超声波清洗器(北京);AE-200电子天平(瑞士)。

  芍药苷对照品(批号110736-200423,中国药品生物制品检定所提供);样品和阴性对照品均由北海凯运药业有限公司提供。乙腈、甲醇为色谱纯,水为自制超纯水,其余试剂均为分析纯。

  2 方法与结果

  2.1 对照品溶液的制备

  精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液,即得。

  2.2 供试品溶液的制备

  将本品剪碎,取约3 g,精密称定。精密加入稀乙醇25 mL,密塞,称定重量,加热回流30 min,放冷,再称定重量,用稀乙醇补足减失的重量,摇匀,离心,取上清液,通过中性氧化铝柱(200~300目,约10 g,内径1 cm),取续滤液,即得。

  2.3 阴性对照液的制备

  取不含白芍的处方同法制备的阴性样品,按“2.2”项下方法制备成阴性对照液。

  2.4 色谱条件及系统适用性试验

  色谱柱:Kromasil-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm);流动相:甲醇-水(30∶70);检测波长:230 nm;流速:1.0 mL/min;柱温为室温,理论塔板数按芍药苷峰计应不低于2 000。

  2.5 线性关系的考察

  精密称取芍药苷对照品2.68 mg,置25 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。分别精密吸取1、5、10、15、20 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以芍药苷的进样量(μg)为横坐标、峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,计算,得回归方程:Y=1 372.8X+0.244 5(r=0.999 9,n=5)。结果表明,芍药苷在0.11~2.14 μg范围内呈良好的线性关系。

  2.6 方法可行性考察

  精密吸取对照品溶液、阴性对照液与供试品溶液各10 μL,分别注入液相色谱仪,测定,结果见图1。阴性样品溶液对测定无干扰,芍药苷与其他组分分离良好,方法可行。

  2.7 精密度试验

  精密吸取同一对照品溶液10 μL,重复进样5次,测定芍药苷的吸收峰面积,RSD=1.44%,表明精密度良好。

  2.8 稳定性试验
  
  取同一批号样品(批号20060118)的供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、10 h进行测定,记录峰面积,芍药苷峰面积的RSD=0.84%。表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

  2.9 重复性试验

  取同一批号样品(批号20060118)剪碎,精密称取6份,每份3 g,按“2.2”项下方法制备供试液,依上述色谱条件测定,计算,芍药苷的平均含量为0.845 mg/g,RSD=1.67%。表明该方法重复性良好。

  2.10 加样回收率试验
  
  精密称取已知含量的样品(批号20060118)6份,分别精密加入芍药苷对照品溶液(1.27 mg/mL)1 mL,再精密加入稀乙醇24 mL,按供试品溶液制备方法制备,依法测定。6次平均回收率为98.2%,RSD=1.72%。结果见表1。表1 回收率试验结果(略)

  2.11 样品测定
  
  取10批样品,按上述确定的方法和色谱条件进行测定,结果见表2。表2 芍药苷含量测定结果(略)

  3 讨论

  流动相的选择

参考文献

[3-4],曾分别选以下流动相:①乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86),②乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85),③甲醇-0.1%磷酸溶液(30∶70),④甲醇-水(30∶70),⑤甲醇-水(28∶72)。结果表明,在流动相④条件下芍药苷峰与其它色谱峰达到较好分离,且峰形对称、尖锐。为保证色谱条件的可重复性,故选择流动相④作为流动相。

  供试品提取溶剂曾采用稀乙醇、甲醇、70%甲醇进行提取,结果表明,稀乙醇对芍药苷提取效率较高,故选择稀乙醇作为提取溶剂。提取后采用离心,取上清液,通过中性氧化铝柱,取续滤液的方法,避免了有机溶剂萃取的影响,具有简便、快速、无毒等特点。

  试验表明,本含量测定方法简便可靠,易于操作,重现性好,可作为本品质量控制的有效方法。

参考文献


[1] 中华人民共和国卫生部药政局.中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第三册)[S].1993.121.

  [2] 王朝虹,闵知大.芍药化学成分及药理研究[J].时珍国医国药,1999, 10(7):544.

  [3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005.68,634-636.

  [4] 吴 毅,张文惠,王永刚.HPLC法测定安坤颗粒中芍药苷含量[J].江西中医学院学报,2002,14(1):42.

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