作者：王德才 李同德 徐晓燕 陈海生 李超
【摘要】 ：目的 观察泰山四叶参乙醇提取物和水提取物的抗氧化作用。方法 将小鼠随机分为6组，分别每日1次等容量灌胃给予5%吐温-80(20 mL/kg)、维生素C(0.1 g/kg)、四叶参醇提物(10、20 g/kg)和四叶参水提物(10、20 g/kg)，给药14 d后杀鼠取血、肝、脑，测定其超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)的含量。结果 四叶参水提物和醇提物20 g/kg剂量组能显著提高血清GSH水平，提高血清、肝匀浆和脑匀浆SOD、GSH-Px活性，降低MDA含量；四叶参水提物10 g/kg剂量组血清和肝匀浆SOD、GSH-Px、GSH水平也见明显升高，MDA含量也显著下降。结论 泰山四叶参醇提物和水提物均具有一定的抗氧化作用，水提物的作用较醇提物明显。
【关键词】 四叶参 抗氧化 小鼠
Abstract：Objective To study the antioxidative effect of the ethanol extract (e-EXT) and aqueous extract (a-EXT) of Codonopsis lanceolata from Mount Taishan in mice. Method The mice were pided into six groups at random. After the mice were orally treated with 5% Tween-80 (solvent， 20 mL/kg)， Vitamin C (0.1 g/kg)， e-EXT (10， 20 g/kg) and a-EXT (10， 20 g/kg) once daily for 14 days respectively， the blood， liver and brain were collected for determining SOD， GSH-Px， GSH and MDA levels. Results The SOD， GSH-Px and GSH levels were enhanced significantly， and the MDA levels were reduced markedly in serum， liver and brain homogenate of the mice treated with 20 g/kg e-EXT and a-EXT. In the serum and liver homogenate of 10 g/kg a-EXT group， the levels of SOD， GSH-Px and GSH were increased， the contents of MDA were decreased. Conclusion The ethanol extract and aqueous extract of Codonopsis lanceolata from Mount Taishan could enhance the antioxidative ability of the mice， especially the large-dose aqueous extract.
Key words：Codonopsis lanceolata；antioxidation；mice
四叶参(Codonopsis lanceolata Benth.et Hook.F.)又名轮叶党参、羊乳、山海螺、山胡萝卜等，系桔梗科党参属多年生草质缠绕藤本植物，在我国主要分布于东北、华南、西南等地区，在泰山山系也有分布。四叶参为药食两用植物，在民间采其春季幼苗或根作山珍食用，美味可口，是难得的上好佳肴。传统上其根入药，具有清热解毒、止咳祛痰、补虚通乳、健身补气等功效，用于肺痈咳嗽、病后虚弱、产后缺乳等症，与泰山何首乌、黄精、紫草一道被称为“泰山四大名药”[1]。本实验以不同剂量泰山四叶参乙醇提取物和乙醇提取后的水提取物连续给小鼠灌胃，观察其对小鼠抗氧化能力的影响，为泰山四叶参的开发提供理论依据。
1 材料
1.1 动物
健康昆明种小白鼠，雄性，体重18～22 g，由本院实验动物中心提供。标准颗粒饲料，IVC笼分笼饲养，自由饮水，人工照明。
1.2 试剂与仪器
超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、谷胱甘肽(GSH)测试盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒、丙二醛(MDA)测试盒均购于南京建成生物工程研究所，批号20060619、20060610、20060614、20060610；牛白蛋白，国药集团化学试剂有限公司产品，批号F20050615；维生素C，山东省莒南制药厂生产，批号051001。其它试剂均为国产分析纯。
S-54紫外可见分光光度计，上海棱光技术有限公司；FS-1电动匀浆机，金坛市富华仪器有限公司；HSS-1B数字超级恒温浴槽，成都仪器厂；XW-80A微型漩涡混合仪，上海沪西分析仪器厂；LD5-2A台式离心机，北京医用离心机厂；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵，郑州长城科工贸有限公司。
2 方法
2.1 四叶参提取物的制备
四叶参采自泰山东麓，洗去泥土，干燥，粉碎。分别以6、4倍量95%乙醇浸泡24 h，加热回溜提取2次，每次1.5 h，合并滤液浓缩至膏状，得醇提物。醇提后的药渣晾至无醇味，分别以6倍量、4倍量水浸泡4 h后，常压煎煮2次，合并滤液浓缩至膏状，得水提物。两种提取物均以5%吐温-80为溶媒，配制成折合原药材0.5、1.0 g/mL的混悬液供实验用。
2.2 分组与给药
雄性小鼠78只，随机分为6组：正常对照组(5%吐温-80，溶媒，20 mL/kg)、维生素C组(0.1 g/kg)、醇提物低剂组和高剂组(10、20 g/kg)、水提物低剂组和高剂组(10、20 g/kg)。各组小鼠分别等容量灌胃给药，每日1次，连续14 d。末次给药1 h后，摘眼球采血分离血清。各组小鼠随机取10只迅速解剖取出肝脏和脑，于-80 ℃保存备用。
2.3 检测指标与方法
检测血清SOD活性以及GSH、MDA的含量，以及组织匀浆SOD、GSH-Px活性和MDA含量。用灭菌生理盐水做匀浆介质，4 ℃下制得10%肝匀浆和脑匀浆(w∶v)，4 ℃、3 000 r/min离心15 min，取上清液待检测用。用考马斯亮兰法测定组织匀浆蛋白质含量，用无菌生理盐水稀释至所需浓度。SOD和GSH-Px活性以及GSH和MDA含量均按照试剂盒说明书，用分光光度法测定。
2.4 统计学方法
实验数据以x±s表示，用SPSS10.0统计软件进行统计处理和方差分析，组间比较采用q检验。
3 结果
(见表1～表3)表1 四叶参提取物对小鼠血清SOD活力及GSH、MDA含量的影响(略)注：与正常对照组比较，*P&<0.05，**P&<0.01(下同)表2 四叶参提取物对小鼠肝匀浆SOD、GSH-Px活力及MAD含量影响(略)注：与维生素C组比较，△P&<0.05表3 四叶参提取物对小鼠脑匀浆SOD、GSH-Px活力及MAD含量影响(略)
4 讨论
活性氧自由基使体内脂质与蛋白质等发生氧化反应，导致细胞膜、组织、酶和基因等受损，与机体衰老、中枢神经系统退行性疾病、心脑血管病等密切相关。在机体抗氧化防御体系中，GSH、SOD、GSH-Px对氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用，其含量或活性的高低反映了机体清除自由基能力的强弱；MDA作为脂质过氧化反应的分解产物之一，其含量能反映细胞膜被氧化的程度[2]。
综合分析本实验结果可以看出，泰山四叶参醇提物及水提物对提高机体GSH含量和SOD、GSH-Px活性、抑制MDA的生成等都有较强的作用，抗自由基、抗氧化作用与维生素C相当，某些指标优于维生素C。本实验还发现，泰山四叶参水提物较醇提物显示出更强的抗氧化能力。醇提后的水提物主要成分可能是多糖类，其是否是抗氧化作用的主要成分，还需要进一步的研究证实。
【参考文献】
[1] 王德才，李同德，康颂建.泰山四大名药之一 ——四叶参[J].食品与药品，2006，8(9)：73－75.
[2] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学[M].第3版.北京：人民卫生出版社，2002.546－549.