【摘要】 ：目的 建立测定养胃软胶囊中厚朴酚、和厚朴酚的含量测定方法。方法 高效液相色谱法采用Phenomenex Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相：甲醇-水(22∶78)，流速：1.0 mL/min，检测波长294 nm，柱温40 ℃，进样量10 μL。结果 厚朴酚线性范围0.058 8～0.882 0 μg，r＝0.999 9，平均回收率为99.35%，RSD＝1.94%；和厚朴酚线性范围0.020 4～0.306 0 μg，r＝0.999 8，平均回收率为99.21%，RSD＝2.10%(n＝6)。结论 本法分离好，快速、简便，可作为该产品的质量控制方法。
【关键词】 养胃软胶囊 厚朴酚 和厚朴酚 高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish a method for determination of puerarin in Yangwei Soft Capsule. Methods HPLC was used for quantitative ananlysis. The Phenomenex Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm， 5 μm) column was used， and mobile phase was composed of methanol-water (22∶78). Detection wavelength was at 294 nm， the flow rate was 1.0 mL/min， column temperature was at 40 ℃， the injection volume was 10 μL. Results The linear response ranges from 0.058 8～0.882 0 μg of magnolol (r＝0.999 9， n＝6). The average recovery of magnolol is 99.35%， RSD＝1.94%. The linear response ranges from 0.020 4～0.306 0 μg of honokio (r＝0.999 8， n＝6). The averagy recovery of honokio is 99.21%， RSD＝2.10%. Conclusion The method is simple， accurate， and suitable for the determination of the purarin in compound preparations.
Key words：Yangwei Soft Capsule；magnolol；honokio；HPLC
养胃软胶囊是由陈皮、厚朴、茯苓、甘草、广藿香等14味中药组成的复方制剂，为《卫生部药品标准》第7册(1993年)收载品种，具有温中和胃的功效，主治不思饮食、呕吐酸水、胃脘满闷、四肢倦怠等症。原质量标准中无含量测定项，2005年版《中华人民共和国药典》(一部)中具有化湿和中功效的藿香正气水中也含有上述厚朴等5味药[1]，采用厚朴中厚朴酚的含量作为测定指标。故本品首选厚朴中主要有效成分厚朴酚、和厚朴酚作为定量控制指标，建立高效液相色谱法测定成品中含厚朴酚、和厚朴酚的含量标准 [2]。该法灵敏度高、专属性好、重现性好。
1 仪器与试药
岛津LC－10ATvp高效液相色谱仪，DAD检测器。
养胃软胶囊(批号051008，051010，051012)，广西桂龙制药公司产品；厚朴酚对照品(批号0729-9805)、和厚朴酚对照品(批号110730-9204)，由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Phenomenex Kromasil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)分析柱；流动相：甲醇-水(78∶22)；检测波长：294 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃。
2.2 检测波长的确定
经紫外扫描，厚朴酚、和厚朴酚在294 nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为294 nm。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含厚朴酚30 g、和厚朴酚10 g的溶液，即得。
2.4 供试品溶液的制备
取本品20粒，倾出内容物，混匀，取1.0 g，精密称定，加20 mL水，加盐酸5滴，摇匀，用氯仿萃取3次，每次20 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解并精密稀释至25 mL量瓶中，摇匀，即得。
2.5 系统适用性试验
按处方量配制缺厚朴药材的阴性对照样品，照正文含量测定项下方法测定，比较了供试品溶液，厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液和阴性对照样品液的色谱图，结果在该色谱条件下，样品中厚朴酚、和厚朴酚峰与其它组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照液中色谱峰对测定无干扰(见图1)。
2.6 线性关系的考察
分别精密量取厚朴酚、和厚朴酚对照品储备溶液(厚朴酚浓度为0.294 mg/mL，和厚朴酚浓度为0.102 mg/mL)0.2、0.6、1.0、1.4、2.0、3.0 mL置于10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。厚朴酚回归方程为：Y＝1 472 893.126X＋2 380.125，r＝0.999 9；和厚朴酚回归方程为：Y＝1 518 087.221X－3 498.525，r＝ 0.999 8。结果表明，厚朴酚在0.058 8～0.882 0 μg范围内有良好的线性关系，和厚朴酚在0.020 4～0.306 0 μg范围内有良好的线性关系。
2.7 精密度试验
精密吸取厚朴酚、和厚朴酚对照品溶液(浓度分别为0.029 4、0.010 2 mg/mL)10 μL，重复进样6次，按上述色谱条件测定，峰面积积分值的RSD分别为0.55%、0.95%。
2.8 样品溶液稳定性试验
精密称取供试品(批号051008)1.024 5 g，照上述方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，每间隔一定时间进样，厚朴酚、和厚朴酚峰面积积分值的RSD分别为0.62%、0.84%。结果表明，供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.9 重复性试验
取同一批号的养胃软胶囊6份，按正文含量测定方法平行试验，测得厚朴酚平均含量为0.741 08 mg/g，RSD＝1.82%；和厚朴酚平均含量为0.256 78 mg/g，RSD＝1.91%。
2.10 加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批样品约0.5 g，分别精密加入厚朴酚、和厚朴酚对照品适量，按“供试品溶液的制备”方法制备供试液，平行试验6份，按上述色谱条件测定，计算回收率，结果表明本方法具有良好的回收率。见表1、表2。表1 和厚朴酚加样回收率试验结果（略）表2 厚朴酚加样回收率试验结果（略）
2.11 样品测定
取本品3批，按上述方法测定，计算厚朴酚与和厚朴酚的总量，结果分别为0.998、1.012、1.032 mg/g。
3 讨论
试验中曾比较了甲醇直接超声提取法与氯仿萃取法，结果表明，前者提取液颜色较深，杂质峰多，干扰测定，且污染色谱柱，故选用氯仿萃取法；并对氯仿提取的次数进行了比较，结果提取3次可提取完全。试验中进行了耐用性考察，即用不同的色谱柱和不同比例的流动相进行了比较，结果该样品在本色谱条件下对常用的不同品牌的色谱柱都能得到较好的分离。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.661.
[2] 夏厚林，盛 燕，周晓梅，等.高效液相色谱法测定复方厚朴颗粒中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J].时珍国医国药，2006，17(10)：1983.