【摘要】 ：目的 建立双花滴耳液中绿原酸含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Kromasil C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液(15∶85)，检测波长为328 nm，流速：1.0 mL/min，柱温：室温。结果 平均回收率为99.8%，相对标准偏差为1.51%(n＝5)。结论 本试验所建立的高效液相色谱法绿原酸在0.102 4～0.614 4 μg线性关系良好。
【关键词】 双花滴耳液 绿原酸 高效液相色谱法
Abstract：Objective To establish the method of content determination of chlorogenic acid in Shuanghua eardrop. Methods High performance liquid chromatography (HPLC) was adopted with Kromasil C18 column (5 μm， 4.6 mm×250 mm) and acetonitrile-0.4% phosph acid solution (10∶85) as the mobile phase. The detective wavelength was 328 nm， the flow rate was 1.0 mL/min， column temperature was room temperature. Results Average recovery was 99.8%， relative standard error was 1.51% (n＝5). Conclusion The linearity relationship of chlorogenic acid was good at the range of 0.102 4～0.061 44 μg.
Key words：Shuanghua eardrop；chlorogenic acid；HPLC
双花滴耳液是甘肃省中医医院研制的中药复方制剂，由金银花、连翘等4味中药组成，具有消肿止痛、解毒排脓、敛湿祛腐、生肌之功效，临床上用于化脓性中耳炎的治疗。该处方成分复杂，为了控制药品质量，我们采用高效液相色谱(HPLC)法对其中绿原酸的含量进行测定[1]，结果满意，可作为该制剂定量控制指标之一。
1 仪器与试药
LC-2010A型高效液相色谱仪(日本岛津)；UV-250PC(日本岛津)；超声波振荡器(上海超声波仪器厂)；METTLER AE240电子天平。对照品绿原酸(中国药品生物制品检定所提供，供含量测定，批号110753-200413)；双花滴耳液(甘肃省中医医院制剂室自制)。试剂除乙腈为色谱纯外，其它均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)；检测波长为328 nm；流动相：乙腈-0.4%磷酸水溶液(15∶85)；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；进样量：10 μL。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取60 ℃真空干燥至恒重的绿原酸对照品6.4 mg，用甲醇溶解并定容至50 mL，准确吸取4 mL，以乙醇定容至10 mL，制成浓度为0.051 2 mg/mL的对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取本品10 mL，置50 mL量瓶中，加无水乙醇30 mL，超声处理30 min，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，以0.45 μm滤膜滤过，即得。
2.4 阴性对照液的制备
按处方比例及制备工艺，配制不含金银花的阴性对照品，并照上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。
2.5 线性关系考察
精密吸取绿原酸对照品溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL分别进样，按上述色谱条件进行测定，并以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y＝78 348.12X＋314.58，相关系数r＝0.999 8。结果表明，绿原酸在0.102 4～0.614 4 μg范围与其峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.6 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液10 μL，按上述色谱条件进行测定，连续重复进样5次，绿原酸峰面积RSD＝0.92%，结果表明，该法的精密度良好。
2.7 稳定性试验
取上述对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10 h测定，结果对照品溶液峰面积积分值RSD＝0.83%，供试品溶液峰面积积分值RSD＝0.90%，表明绿原酸对照品及样品在10 h内稳定。
2.8 重复性试验
取5份同一批号供试品10 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，绿原酸的平均含量为1.303 mg/10 mL，RSD＝1.24%。实验表明，该法重复性的良好。
2.9 加样回收率试验
取5份同一批号已知含量的双花滴耳液5 mL，精密加入0.92 mg绿原酸对照品，按“2.3”项供试品溶液的制备方法操作，按上述色谱条件测定，平均回收率为99.8%，RSD＝1.51%。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.10 样品测定
取双花滴耳液的5个批号，按“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品，按上述色谱条件测定，结果见表2。表2 样品测定结果(略)
3 讨论
在测定该制剂中绿原酸的含量时，曾参照文献[2-3]方法对流动相进行了筛选，比较了甲醇-0.2%磷酸、乙腈-1%乙酸、60%甲醇-10%磷酸氢二钠溶液和乙腈-0.4%磷酸溶液，其中以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相时，绿原酸与相邻峰基线分离较好。
本实验建立的HPLC法侧定双花滴耳液中绿原酸含量的方法操作简便、结果准确、灵敏度高、重现性好、回收率高、干扰小，可以用于双花滴耳液的质量控制。
【参考文献
】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出板社，2005.附录ⅥD：33.
[2] 刘 冰，王蓉华，徐永波.HPLC法同时测定银黄胶囊中绿原酸、黄芩苷含量[J].中国药事，2006，20(5)：303.
[3] 孟品佳，孙毓庆.高效液相色谱法分离金银花成份及测定绿原酸含量[J].药物分析杂志，1990，10(1)：58.