【摘要】 目的 优选消喘贴膏的最佳提取工艺。方法 采用高效液相色谱法，测定方中白芷的主要成分欧前胡素含量，用L9(34)正交设计法筛选乙醇提取的最佳条件。结果 消喘贴膏的最佳提取工艺为：乙醇浓度90%，溶剂用量为2倍药材量，回流时间1 h，回流次数2次。结论 该提取工艺稳定，提取率高。
【关键词】 消喘贴膏；欧前胡素；高效液相色谱法；正交设计
Abstract：Objective To optimize the preparation process of Xiaochuan Tiegao. Methods The effective compound imporatorin of Dahurian Angelica Root was determined by HPLC. The best condition of preparation process for the ethanol-extraction method was investigated by L9(34) orthogonal design. Results The optimum technical condition：adding 2 times ethanol， cooking 1 hour and 2 times with 90% ethanol. Conclusion The method is reliable， accurate and easy to operate.
Key words： Xiaochuan Tiegao；imporatorin；HPLC；orthogonal design
消喘贴膏是由白芷、白芥子、细辛、延胡索等6味中药制成的中药外用复方制剂，具有止咳、化痰、平喘的功能，主要用于慢性支气管炎、支气管哮喘。方中白芷为君药，而且处方量较大，其有效成分欧前胡素具有抗菌、平喘及抗过敏等作用。为了发挥药物的最佳疗效和经济效益，优化制备工艺，本试验以欧前胡素含量为指标，用正交实验法优选了最佳提取工艺条件，为工业化提取生产提供依据。
1 仪器与材料
Alliance 2690高效液相色谱仪(美国Waters)，PDA-2996二极管阵列检测器(美国Waters)，Empower数据处理系统(美国Waters)。
欧前胡素对照品(批号11826-200410)购于中国药品生物制品检定所；白芷等药材购于北京卫仁中药饮片厂，经鉴定，白芷为伞形科植物杭白芷Angelica dahurica (Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.var.formosana (Boiss.) Shan et Yuan的干燥根，符合2005版《中华人民共和国药典》(一部)规定[1]；消喘贴膏(自制)，批号20060516、20060517、20060518。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 欧前胡素高效液相色谱测定方法的建立
2.1.1 色谱条件
色谱柱：Sunfire-C18柱(4.6 mm×150 mm， 5 μm)；流动相：甲醇-水(65∶35)；流速：1 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：300 nm；进样量20 μL。理论塔板数按欧前胡素峰计算应不低于3 000，分离度大于1.5。色谱图见图1。
2.1.2 对照品溶液的制备
精密称取欧前胡素对照品5 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，配成0.01 mg/mL的对照品溶液。
2.1.3 标准曲线的制备
分别精密吸取上述对照品溶液4、8、12、16、20、24 μL，分别进样测定。以欧前胡素进样量(μg)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。计算回归方程为：Y＝11 984 344X－6 590.87，r＝0.999 8(n＝6)。结果表明，欧前胡素在0.04～0.24 μg范围内呈良好的线性关系。
转贴于 2.2 醇提取正交实验
根据处方药味有效成分的溶解特性，以乙醇为溶媒，采用回流法进行提取。提取过程中，综合考虑多种因素，优化回流提取的条件，选定乙醇浓度(A)、溶剂用量(B)、回流时间(C)、回流次数(D)为考察的4个因素，以欧前胡素含量为评价指标，按L9(34)正交设计法进行回流提取实验。因素水平设计见表1。按表2所安排的实验进行操作，每份试验称取药材1/4处方用量，加乙醇回流提取，滤过，合并滤液，浓缩后真空干燥。分别取干膏粉0.5 g，研成细粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，加乙醚10 mL超声提取2次，每次15 min，放冷滤过，滤液挥干，残渣加甲醇溶解，并定容至10 mL量瓶中，摇匀，分别吸取各20 μL，注入高效液相色谱仪，测定欧前胡素的含量。结果见表2。表1 因素水平表（略）表2 正交实验结果（略）
2.3 方差分析
将正交实验结果进行方差分析，结果见表3。表3 欧前胡素提取工艺正交实验方差分析表（略）注：F0.05(2.2)=19.0，F0.01(2.2)=99。
表2显示，各因素作用主次为A&>D&>C&>B，最佳工艺条件为A1B1C1D2。由表3方差分析表明：A因素对实验结果的影响具有显著性(P&<0.05)，B、C、D因素无显著性差异(P&>0.05)，从生产上节约时间和能源、降低成本考虑，选B1C2D2，故得出合理的提取工艺条件A1B1C2D2 ，即加入2倍量90%乙醇回流提取2次，每次1 h。
2.4 验证实验
为验证上述结果的准确性，保证提取工艺的合理可行，按上述已确定工艺条件A1B1C2D2安排重复试验，结果见表4。表4 验证实验结果（略）
按上述得出的提取工艺进行验证实验，共3次，平均含量为83.74%，高于正交表中9个实验结果中的最高分。从上述结果可以看出，所筛选出来的工艺合理可行，稳定可靠，具有可操作性和重现性。
3 讨论
消喘贴膏为我院传统制剂，原制备工艺是将药材粉碎直接配制，我们将白芷等药材的有效部位进行提取。采用HPLC法测定白芷中欧前胡素含量的色谱条件源于2005年版《中华人民共和国药典》(一部)，但以多种比例甲醇-水(55∶45、60∶40、65∶35)试验选择流动相，当比例为65∶35时，分离效果最好。
本试验通过正交实验法优选了消喘贴膏的最佳提取工艺条件，即加入2倍量90%乙醇回流提取2次，每次1.0 h。在最佳实验的基础上，按最佳工艺进行了验证实验，结果证明，该提取工艺简单、提取率高、操作控制容易、稳定性好，适合于工业化生产。
【参考文献】
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.69.