【摘要】 目的 测定白细咳喘膏中芥子碱硫氰酸盐的含量，为制定该制剂的质量标准奠定基础。方法 采用HPLC法，色谱柱：DIKMA inertsil(pH=3，5 μm，250 mm×4.6 mm)；以乙腈为流动相A，以3%醋酸溶液为流动相B，按比例进行梯度洗脱；检测波长：326 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。结果 线性范围为0.8～4.0 μg(r=0.999 6，n=5)，平均回收率100.83%，RSD=1.95%(n=5)。结论 该法快速、简便，重现性和稳定性良好，可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 白细咳喘膏；高效液相色谱法；白芥子；芥子碱硫氰酸盐；含量测定
Abstract：Objective To determine the content of Sinapine thiocyanate in the Baixi Kechuan Cream by HPLC and to lay foundation for establishing the quality control standard of the preparation. Methods The HPLC system consisted of the column of DIKMA inertsil (pH=3， 5 μm， 250 mm×4.6 mm). The acetonitrile and 3% acetic acid were used as the mobile phase A and B， respectively， and gradient elution was used. The detective wavelength was 326 nm and the flow rate was 1.0 mL/min. The column temperature was room temperature. Results The method was linear within the range of 0.8～4.0 μg (r=0.999 6， n=5). The average recovery was 100.83%， and RSD=1.95% (n=5). Conclusion The method is quick， simple， highly reproductive and steady， and it can be used for quality control of the preparation.
Key words：HPLC；Semen Sinapis albae；Sinapine thiocyanate；content determination
白细咳喘膏由白芥子、延胡索、甘遂等药味组成，临床多采用穴位贴敷法治疗小儿反复呼吸道感染及支气管哮喘。文献资料表明，白芥子、延胡索及甘遂的主要活性成分适宜于乙醇提取[1-3]，因此，该制剂采取了三药合并乙醇回流提取的工艺。白芥子具有温肺豁痰利气、散结通络止痛的功效，其乙醇提取物有明显的镇咳和平喘作用[1]，为处方中君药。本实验采用高效液相色谱法测定白芥子的主要成分芥子碱硫氰酸盐的含量，为制定该制剂的质量标准提供依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100 series，Degasser G1379A，QuatPump G1311A， VWD G1314A；RE52CS-2旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
白芥子、延胡索、甘遂药材经鉴定符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)[4]的有关规定。芥子碱硫氰酸盐对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号111702-200502)；白细咳喘膏由北京儿童医院药检室自制(批号20060109、20060110、20060111)。乙腈为色谱纯(加拿大Caledon 公司)，甲醇、乙醇、醋酸为分析纯(北京化学试剂公司)，水(屈臣氏蒸馏水)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：DIKMA inertsil(pH=3，5 μm，250 mm×4.6 mm)；以乙腈为流动相A，以3%醋酸溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为326 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；理论塔板数按芥子碱峰计算不低于3 000。表1 流动相洗脱梯度表（略）
2.2 测定波长的选择
对芥子碱硫氰酸盐对照品溶液在波长200～400 nm进行紫外扫描，其最大吸收波长为326 nm，故选择326 nm为检测波长。2.3 对照品溶液的制备
精密称取芥子碱硫氰酸盐对照品2 mg，用流动相(乙腈-3%醋酸溶液，2∶8)10 mL溶解，制成每1 mL含0.2 mg的溶液，即得。
2.4 供试品溶液的制备
取本品内容物2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，密塞，称定重量，加热回流1 h，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，置冰箱中冷藏3 h，取上清液，滤过，精密吸取续滤液8 mL，水浴蒸干，残渣加流动相(乙腈-3%醋酸溶液，2∶8)溶解，转移至10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.5 阴性对照品溶液的制备
按处方组成制备不含白芥子的样品，照“供试品溶液的制备”方法处理，即得。
2.6 空白试验
分别精密吸取对照品、供试品及阴性对照品溶液各10 μL，按上述色谱条件，各进样10 μL测定，结果在该条件下，芥子碱硫氰酸盐的色谱峰峰形较好，分离度符合要求，空白溶液在与芥子碱硫氰酸盐对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。色谱图见图1。
转贴于2.7 线性关系的考察
分别精确吸取对照品溶液4、8、12、16、20 μL进样，记录各样品对应色谱峰的峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，芥子碱硫氰酸盐进样量为横坐标，测得回归方程：Y=3 163.3X+ 353.58(r=0.999 6)，表明芥子碱硫氰酸盐在0.8～4.0 μg范围内线性关系良好。
2.8 精密度试验
精密吸取供试品溶液10 μL，重复进样5次，测得芥子碱硫氰酸盐峰面积，结果RSD=1.48%，表明本法精密度良好。
2.9 稳定性试验
精密吸取供试品溶液10 μL，分别于1、2、4、8、12、24、48 h进样，依法测定芥子碱硫氰酸盐各时间点的峰面积，结果RSD=1.55%，表明供试品在48 h内基本稳定。
2.10 重复性试验
取同一批号样品5份，照“供试品溶液的制备”项下方法分别制备5份供试液，依法测定，芥子碱含量平均值为0.105 8 mg/g， RSD=2.09%，表明该检测方法重现性良好。
2.11 加样回收率试验
采用加样回收法。精密称取5份已知含量的同一批号的样品，分别精密加入芥子碱硫氰酸盐对照品甲醇溶液，按供试品溶液的制备方法制备及上述色谱条件测定含量并计算回收率，结果表明本法具有良好的回收率。见表2。 表2 加样回收率试验结果（略）
2.12 样品含量测定
按拟定的供试品溶液制备方法和色谱条件，测定3批样品，结果见表3。根据测定结果，暂订为本品每支含白芥子以芥子碱硫氰酸盐(C16h34O5，SCN)计，不得少于18 mg。表3 样品含量测定结果(略)
3 讨论
实验中供试品溶液用甲醇定容时，发现峰形较差，改用流动相后，取得满意效果。实验证明，用高效液相色谱法测定白细咳喘膏中芥子碱硫氰酸盐的含量，方法简便，重复性及稳定性良好，结果准确可靠，可用于该制剂成品的质量控制。
【参考文献】
[1] 张学梅，刘凡亮.白芥子提取物的镇咳、祛痰及平喘作用研究[J].中草药，2003，34(7)：635－637.
[2] 李秉钧，黄晓巍.正交试验法优选延胡索的醇提工艺[J].中国中医药现代远程教育，2004，2(4)：30－31.
[3] 郑维法.甘遂醇提物中4种二萜类化合物的体内抗病毒活性研究[J].中草药，2004，35(1)：65－68.
[4] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.111.