【摘要】 目的 观察痛痹方对佐剂性关节炎大鼠踝关节组织病理改变的影响。方法 将大鼠随机分成正常组、模型组、痛痹方高剂量组、痛痹方中剂量组、痛痹方低剂量组、雷公藤多甙片组，每组10只，除正常组外，其余各组用弗氏完全佐剂诱导关节炎发生，观察各组大鼠踝关节滑膜、关节腔、周围软组织炎症反应等组织病理改变情况，进行综合病变评分。结果 与模型组相比，痛痹方高、中剂量组和雷公藤多甙片组的大鼠踝关节组织病理改变均有明显减轻(P&<0.05或P&<0.01)。结论 痛痹方有抑制类风湿性关节炎组织病理改变的作用。
【关键词】 痛痹方；佐剂性关节炎；病理改变
Abstract：Objective To observe the effect of Tongbi Prescription on pathomorphological changes of ankles in adjuvant arthritis rats. Methods Rats were randomly pided into six groups: normal control group， model control group， three Tongbi Prescription treated group (respectively with high-， mid- and low-dosages)， Tripterygium glycosides treated group (each n=10). Except for the rats of normal control group， the others were injected with Freund’s complete adjuvant. The pathomorphological changes of ankles of each group were measured. Results The pathomorphological changes of high- and mid- dosages Tongbi Prescription treated group and Tripterygium glycosides treated group were lightened than those of model control group obviously (P&<0.05 or P&<0.01). Conclusion Tongbi Prescription can alleviate the changes of the pathomorphology affected with rheumatoid arthritis.
Key words：Tongbi Prescription；adjuvant arthritis；pathomorphological changes
类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种病因不明的自身免疫性疾病，其主要的病理变化包括关节滑膜增生、关节软骨及骨组织破坏。痛痹方是金实教授治疗RA的经验方，应用于临床已取得良好疗效。本研究主要是通过观察痛痹方对大鼠佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis，AA)模型踝关节组织病理改变的影响，探讨痛痹方治疗RA的机理。
1 实验材料
1.1 药物与试剂
痹痛方浸膏粉，由青风藤、桂枝、知母、蜈蚣、白芍等中药组成，每克浸膏相当于6.47 g原药材，人日用量为136 g原药材/60 kg体重，由南京中医药大学第一临床医学院实验中心提供。卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所；液体石蜡和甲醛均为南京化学试剂厂产品；雷公藤多甙片，三九黄石制药厂。
1.2 动物
SD大鼠，上海斯莱克实验动物责任有限公司提供，生产许可证：SCXK(沪)2003-0003；实验动物使用许可证：SCXK (苏)2002-0123。
2 实验方法
2.1 佐剂性关节炎模型的建立[1]
2.1.1 弗氏完全佐剂(FCA)制备
BCG于80 ℃水浴灭活1 h， 用灭菌液体石蜡制成7.5 mg/mL 的乳剂，得FCA。
2.1.2 佐剂性关节诱发
取体重为150 g左右的健康雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮内注射FCA 0.1 mL，约10 d左右，出现继发性多发性关节炎。
2.2 分组及处理
动物随机分为6组，每组10只，即：正常组、模型组，给予等容量蒸馏水；痹痛方高剂量组，给予痹痛方25 g原药材/kg体重；痹痛方中剂量组，给予痹痛方12.5 g原药材/kg体重；痹痛方低剂量组，给予痹痛方6.25 g原药材/kg体重；雷公藤多甙片组，给予雷公藤多甙片0.06 g/kg体重。均灌胃给药，给药体积为30 mL/kg体重。
2.3 病理组织学检查方法
实验结束后处死动物，取其踝关节固定于10%福尔马林内，脱钙后常规石蜡包埋，切片厚4～5 μm，HE染色，由病理专业人员阅片，观察关节滑膜被覆上皮有无细胞变性、增生，间质有无炎细胞浸润及肉芽组织形成；关节腔有无减小或闭塞，关节软骨有无破坏或纤维化，关节周围皮下组织有无炎细胞浸润或纤维化，根据关节各部位病变轻重程度，依次定量为1分(轻度或少量)、2分(中度或多量)、3分(重度或大量)、4分(极重度)，无病变组织定为0分。关节周围皮下组织病变以半量计算。累加所有分数，得出总分，计算出每组每只动物的均分，分值越高提示损伤越严重，反之则说明经药物处理后损伤减轻，治疗有效。
2.4 统计学方法
所有数据均用x±s表示，采用方差分析，有显著差异者进一步用Bonferroni test或Student's t检验比较组间差异。
3 结果
3.1 各组大鼠踝关节组织病理改变情况
3.1.1 正常组
关节表面被覆薄层透明软骨，细胞排列整齐、关节面光滑，软骨内无血管和神经。关节囊由结缔组织构成，囊腔光滑，表面覆有1～4层滑膜细胞。软骨下为骨组织，由编织骨组成。关节周围由肌腱横纹肌结缔组织组成，表面被有复层鳞状上皮。1只关节滑膜有轻度充血，滑膜细胞有轻度变性，其它各只各部位组织结构正常，未查见明显病理变化。
3.1.2 模型组
关节滑膜：滑膜细胞有轻度到中度变性、中度增生，呈短绒毛状或指突状伸入关节腔内。滑膜有少量到多量炎细胞浸润，并有少量到多量肉芽组织形成。关节腔：腔内未见炎性渗出物，但8只关节软骨有中度到重度破坏、表面有纤维结缔组织增生，2只纤维结缔组织增生明显，导致关节腔消失。周围软组织炎症反应：中度到重度炎细胞浸润，炎细胞以类上皮细胞为主，并形成结核结节样病变，4只尚有中性粒细胞呈灶性集聚，形成局部小脓肿。
3.1.3 痛痹方高剂量组
关节滑膜：细胞轻度变性6只，4只滑膜细胞均有增生，轻度的表现为滑膜细胞层次增多，中度或重度增生时呈绒毛状或指突状伸入关节腔内。此外4只滑膜有少量炎细胞浸润，其中2只有少量肉芽组织形成。关节腔：腔内未见炎性渗出物，但2只关节软骨有轻度到极重度破坏，表面有纤维结缔组织增生，其中1只，增生的纤维结缔组织使相邻两个关节面粘连，导致关节腔消失。周围软组织炎症反应：中度到重度炎细胞浸润，炎细胞以类上皮细胞为主，并形成结核结节样病变，外周有淋巴细胞浸润。
3.1.4 痛痹方中剂量组
关节滑膜：细胞轻度变性5只，滑膜细胞轻度增生3只，滑膜有少量炎细胞浸润2只，其中1只有少量肉芽组织形成。关节腔：腔内未见炎性渗出物，但2只关节软骨有中度变性坏死，表面有纤维结缔组织增生。周围软组织炎症反应：有少量到多量炎细胞浸润，炎细胞以类上皮细胞为主，形成结核结节样病变，外周有淋巴细胞浸润。
3.1.5 痛痹方低剂量组
关节滑膜：细胞轻度到重度变性6只，滑膜细胞均有中度和重度增生，呈长短不一的绒毛状或指突状伸入关节腔内。此外3只滑膜有少量到大量炎细胞浸润，其中3只有少量肉芽组织形成，外周有淋巴细胞浸润。关节腔：腔内未见炎性渗出物，但3只关节软骨有中度到重度破坏，表面有纤维结缔组织增生。周围软组织炎症反应：10只均有中度到重度炎细胞浸润，炎细胞以类上皮细胞为主，并形成结核结节样病变，1只尚有中性粒细胞呈灶性集聚，形成局部小脓肿。
3.1.6 雷公藤多甙片组
关节滑膜：细胞轻度到中度变性6只，8只滑膜细胞均有中度增生，呈较短绒毛状或指突状伸入关节腔内。此外2只滑膜有少量到大量炎细胞浸润，其中1只有少量肉芽组织形成。关节腔：腔内未见炎性渗出物，但1只关节局部表面有轻度纤维结缔组织增生。周围软组织炎症反应：病变不明显。
3.2 各组大鼠踝关节组织病理改变轻重程度的比较
(见表1)表1 关节病变轻重程度评分结果(略)注：与模型组比较，**P<0.01，*P<0.05。
4 讨论
RA是一种累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫性疾病，病因尚不清楚。其病理特征主要是滑膜增殖和赘生，关节软骨及软骨下骨侵蚀。增生的炎症组织进一步破坏关节内和关节周围组织，造成关节畸形和功能失常。本实验采用的AA模型大鼠是公认的反映RA发病机制的动物实验模型，其组织病理学改变包括滑膜的细胞增生和以组织细胞和淋巴细胞浸润为主的滑膜炎并有血管翳形成；软骨和骨的局灶性破坏可致关节纤维性强直，与人类RA具有部分相似性[2]。
RA属于中医学“痹证”的范畴。中医学认为其形成主要是因为人体营卫之气不固，风、寒、湿邪侵袭，导致气血运行不畅，经络阻滞，停痰留瘀，凝结为痹。由于本病反复发作，风寒湿邪久郁，必然化热伤阴，加之素有寒邪未除，故常见寒热错杂的病机。据此创制的痛痹方具有温经散寒、清热利湿、活血通络的功效。方中青风藤祛风通络止痛，其有效成分青风藤碱可上调AA大鼠腹腔巨噬细胞及关节滑膜细胞内IкB表达，从而降低NF-кB活性，最终导致炎症介质白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生成减少[3]；桂枝祛风散寒、温经通络，可改善组织血液循环，使病变组织得以修复，对毛细血管通透性增加及角叉菜胶性足肿胀有抑制作用[4]；知母清热利湿，其有效成分知母总多糖对多种致炎剂引起的急性毛细血管通透性增高、炎性渗出增加、组织水肿均有明显的抑制作用，对慢性肉芽组织增生也具有显著抑制作用[5]；白芍缓急止痛，其有效成分白芍总苷可改善AA大鼠的病理状况，减轻足肿胀，恢复过低的细胞免疫功能，改善CD4+/CD8+ T细胞比例；蜈蚣搜风通络止痛，其水提取物对巴豆油引起的小鼠耳水肿、大鼠烫伤引起的皮片水肿及大鼠琼脂性关节炎均有明显的抑制作用。
本实验结果显示，与正常组相比，模型组病变最重，每只大鼠均有程度不等的病理改变，主要表现为踝关节滑膜细胞增生、炎性细胞浸润；关节腔内关节软骨有中度到重度破坏，表面有纤维结缔组织增生，甚至导致关节腔闭塞；关节周围软组织见明显的炎症反应。而痛痹方高、中剂量组和雷公藤多甙片组的大鼠踝关节组织病理改变则明显减轻，尤其是痛痹方中剂量组和雷公藤多甙片组的大鼠踝关节滑膜细胞增生、炎性细胞浸润均较轻，关节软骨破坏较轻、纤维化不明显，未见关节面粘连，周围软组织炎症反应不明显。由此可推知，痛痹方与雷公藤多甙片一样能有效抑制关节滑膜细胞增生、炎性细胞浸润，从而减轻关节滑膜炎症反应，阻止关节内和关节周围组织破坏。痹痛方治疗RA的机制可能与此有关。
【参考文献】
[1] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1991.723－725.
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