【摘要】 目的 制定活血胶囊中丹参素和原儿茶醛的含量测定方法。方法 采用HPLC法，以丹参素和原儿茶醛为对照品，检测波长为280 nm，甲醇-0.5%醋酸水溶液(22∶78)为流动相。结果 丹参素在0.421～3.364 μg范围、原儿茶醛在0.212～1.699 μg范围有良好的线性关系，样品平均加样回收率丹参素和原儿茶醛分别为100.05%和99.39%，RSD分别为3.07%和1.62%。结论 本法结果准确，精密度及重现性较好，可作为该制剂的质量控制方法。
【关键词】 活血胶囊；高效液相色谱法；丹参素；原儿茶醛
Abstract：Objective To establish a method for determining the content of Danshensu and Protocatechuic Aldehyde in Huoxue capsule. Methods The HPLC method was adopted for the determination. Danshensu and Protocatechuic Aldehyde were used as the standard. Detection wave length was set at 280 nm， the mobile phase consisted of methanol-0.5 % HAc (30∶70). Results The linear range of Danshensu was 0.421～3.364 μg and Protocatechuic Aldehyde was 0.212～1.699 μg. The average recovery rate of Danshensu was 100.05% with RSD of 3.07% and Protocatechuic Aldehyde was 99.39% with RSD of 1.62%. Conclusion This method is accurate， specific and reliable for the quality control of Huoxue capsule.
Key words：Huoxue capsule；HPLC；Danshensu；Protocatechuic Aldehyde
活血胶囊由丹参、三七等6味药物组成，具有活血祛瘀、清血安神之功效，用于心绞痛、胸闷等病症的治疗。其中丹参为方中君药，具有活血祛瘀之功效。丹参酸类成分(有丹参素、原儿茶醛等)是丹参中的主要化学成分，具有明显的抗心肌缺血和增加冠状动脉血流量等生理活性。本试验以丹参素和原儿茶醛作为含量测定的指示性成分，采用高效液相色谱法测定其含量，以期为控制本制剂质量提供可靠的实验依据。
1 仪器、试剂与药品
岛津LC-10AC高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器，岛津C-7R色谱数据处理机；SK2200H型超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
丹参素和原儿茶醛对照品(中国药品生物制品鉴定所提供)；样品：自制(批号20040201、20040315、20040401、20040415、20040502、20040515)。本实验所用试剂除洗脱剂为色谱纯外，其它均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：C18；流动相：甲醇-0.5%醋酸水溶液(22∶78)；流速：0.8 mL/min；检测波长：280 nm；进样量：20 μL；分析方法：外标法；理论板数按丹参素和原儿茶醛峰计算应均不低于3 000，分离度大于1.5。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备
分别精密称取丹参素和原儿茶醛对照品2.102 5 mg和1.062 1 mg，分别置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得0.21 mg/mL的丹参素对照品溶液和0.11 mg/mL的原儿茶醛对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备
取100粒胶囊内容物，研细，精密称取10 g置锥形瓶中，精密加入甲醇100 mL，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10 mL，摇匀，进样前用微孔滤膜(0.45 μm)滤过。
2.2.3 阴性溶液的制备
按处方量称取不含丹参的其它药味，按制剂工艺制成制剂后，以供试品溶液制备方法制成阴性溶液。
2.3 色谱分离及空白试验
分别取丹参素和原儿茶醛对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液，分别进样，供试液色谱图中丹参素和原儿茶醛峰分离良好，理论板数均大于3 000(n=5)，分离度均大于1.5，阴性溶液在丹参素和原儿茶醛出峰处无干扰。
2.4 线性关系考察
分别吸取丹参素和原儿茶醛对照品溶液各5 mL混匀，分别精密吸取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样20 mL。以峰面积与对应浓度绘制标准曲线，求得丹参素的回归方程：A=1 822 017C–27 610，r=0.999 8，线性范围为0.421～3.364 μg；求得原儿茶醛的回归方程：A=2 781 165C–87 410，r=0.999 7，线性范围为0.212～1.699 μg。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液，分别放置2、4、6、8、14、24 h测定峰面积1次，丹参素和原儿茶醛的RSD分别为2.19%和1.97%，说明供试品在24 h内是稳定的。
2.6 精密度试验
分别取丹参素和原儿茶醛对照品溶液，各重复进样5次，测得丹参素和原儿茶醛峰面积的RSD分别为0.69%和1.06%。
2.7 样品测定
分别取6批样品，按供试品溶液的制备方法操作，测定每粒胶囊中丹参素和原儿茶醛的含量。结果显示，6批样品中丹参素的最高含量为1.62 mg，最低为1.331 mg；原儿茶醛的最高含量为0.701 mg最低为0.583 mg。考虑大生产及原料来源，放宽10%，故暂拟定本品每粒胶囊含丹参素不得少于1.19 mg，原儿茶醛不得少于0.524 mg。见表1。 表1 样品中丹参素和原儿茶醛的含量测定结果(略)
2.8 加样回收试验
精密称取已知丹参素和原儿茶醛含量的样品(批号20040502)6份，分别加入丹参素和原儿茶醛对照品，按供试品溶液的制备方法提取样品，进样测定，计算回收率。见表2。表2 回收率测定结果(略)
3 讨论
在样品提取时，分别选择水回流1 h，乙醇沉淀和甲醇超声提取30、45、60 min等方法进行了试验比较，发现以甲醇超声提取30 min效果最好，分离效果较理想。
文献报道中人参皂苷Rb1的测定方法很多，
参考文献
[1-2]选择HPLC法试验，在流动相的选择上我们比较了甲醇-0.5%醋酸水溶液、甲醇-0.1%磷酸等系统，结果以甲醇-0.5%醋酸水溶液(22∶78)为流动相分离效果最好，丹参素和原儿茶醛能与其它成分的峰达到极限分离。【参考文献】
[1] 王杰民，何怀冰，竺叶清，等.RP-HPLC法测定丹参药材中丹参素及原儿茶醛含量[J].上海医科大学学报，1991，18(1)：27.
[2] 张建中，吕迁洲，王新宏，等.HPLC测定活血合剂中丹参素、原儿茶醛的含量[J].中成药，2002，24(1)：20－22