【关键词】氯霉素 地塞米松磷酸钠 含量测定 HPLC
氯霉素滴耳液系中南大学湘雅医院常用普通制剂，其处方为每100mL含氯霉素250m g、地塞米松磷酸钠4mg。主要用于内耳道感染的治疗，内含氯霉素、地塞米松磷酸钠等成分。氯霉素和地塞米松磷酸钠分别在272、242nm波长处有最大吸收[1]，但在最大吸收波长处两者相互干扰，顾影响测定结果。笔者在查阅有关文献[2～5]与试验基础上，建立以高效液相色谱 (H P L C)法同时测定氯霉素滴耳液中氯霉素和地塞米松磷酸钠含量的方法，本方法简便、快速，结果准确，可做为医院制剂质控控制标准。
1 仪器与试药
I.1 仪器
Agilent 1100系列高效液相色谱仪(包括 Agilent G1310 A单元泵、Agilent G1316 A柱温箱、Agilent G1314 A可变波长检测器)；DiamonsilC18柱(迪马公司)；AG285电子分析天平(梅特勒—托利多公司)。
1.2 试药
氯霉素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130555-200923）；地塞米松磷酸钠对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100 0 1 6 -200914）；氯地滴耳液（中南大学湘雅医院自制，批号：100706、100723、100804）；甲醇（色谱纯，上海陆都化学试剂厂），磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），水为重蒸馏水（本院制）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18柱（200mm ×4.6 mm， 5μm）；流动相：甲醇-0.34 %磷酸二氢钾水溶液(65∶35，V/V，1.0m l/m i n)；流速：1.0m l/min；检测波长为240nm；柱温：30℃。对照品与样品的色谱图见图1。
A氯霉素和地塞米松磷酸钠标准品；B氯地滴耳液供试品
图1氯霉素和地塞米松磷酸钠标准品与地氯滴耳液样品色谱图
2.2 溶液的配置
2.2.1 对照品溶液制备
精密量取氯霉素对照品50.148m g、地塞米松磷酸钠对照品9.214m g，置于50m l棕色量瓶中，以甲醇溶解定容至50m l，作为对照品贮备液；精密吸取1m l对照品贮备液置于10m l量瓶中，加甲醇稀释到刻度，既得对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液制备
精密吸取供试品1m l，置于25m l棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，既得供试品溶液。
2.2.3 空白溶液制备
按处方比例制成不含氯霉素和地塞米松磷酸钠的空白样品，按供试品溶液项下方法制备，既得空白溶液。
2.3 线性关系考察
精密吸取对照品贮备液0.2，0.4，0.6，1，2，3，4m l，以甲醇定容至10m l量瓶中，得到氯霉素浓度分别为20.16，40.32，60.48，100.80，201.60，302.40，403.20μg/ml；地塞米松磷酸钠浓度分别为 4.16，8.32，12.48，20.80，41.60，62.40，83.20μ g/m l的系列溶液，摇匀。在2.1项下色谱条件下，分别进样10μ l，测定峰面积。以浓度（C）为横坐标，以峰面积（A）为纵坐标，作线性回归，氯霉素在20.16～403.20μ g/m l 浓度范围内线性关系良好，方程为：A = 6.221C+ 9.1667，r = 0.9999；地塞米松磷酸钠在4.16～83.20μg/ml浓度范围内线性关系良好，方程为：A =16569C + 20.65，r = 0.9998。
2.4 精密度试验
取同一批供试品（批号：100706），按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，连续进样5次，记录各组分峰面积，求R S D，结果氯霉素、地塞米松磷酸钠RSD分别为0.072%、0.124%。
2.5 溶液稳定性
取同一批供试品（批号：100706），按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，分别于配制后0，1，2，4，8，12，24h测定，结果表明供试品溶液在8h内稳定。结果，氯霉素和地塞米松磷酸钠峰面积的RSD值分别为0.94%、1.48%。
2.6 重复性试验
取同一批供试品（批号：100706）样品5份，按2.2.2试验中供试品溶液制备方法制得供试品溶液，各取10μl进样，测定，记录各组分峰面积，求RSD，结果氯霉素、地塞米松磷酸钠RSD分别为0.48%、0.62%。 2.7 加样回收率试验
精密量取已知含量的样品1m l，置于3个10m l量瓶中，分别加入精密称定的氯霉素和地塞米松磷酸钠对照品适量，用甲醇稀释至刻度，摇匀，配成标准曲线范围内的低、中、高浓度的溶液，进样10μl，重复3次。以峰面积按外标法计算两组分的含量。测得氯霉素和地塞米松磷酸钠的加样回收率及精密度见表1。
2.8 样品测定
取本院制剂3个批次，按2.2.2项项下方法配制样品溶液，按上述色谱条件重复进样3次，进行测定，记录其峰面积，按外标法计算氯霉素及地塞米松磷酸钠含量的RSD值，结果见表2。
3 讨论
3.1 动相的选择
2005版《中国药典》规定地塞米松磷酸钠的含量测定方法为 H P L C法[1]，以三乙胺溶液（取三乙胺7.5m l，加水至1000m l，用磷酸调节p H至3.0±0.05）-甲醇-乙腈（55：40：5）为流动相，但反复几次预试验，均达不到分离要求；后根据
参考文献
[2]，流动相为甲醇：0.34 %磷酸二氢钾溶液(60：40 ，V/ V)，在预试验中曾参考此条件，分离度，理论踏板数均达到分离要求，但由于色谱柱与文献报道有别，保留时间较有所改变，待全部出峰所需时间为18分钟左右，后经多次试验，从峰形和分离度综合考虑，最终确定流动相为甲醇与0.34%磷酸二氢钾溶液比例定为65：35 (v/v)，在10 m i n内全部测出所需待测物质，并且分离效果符合药典所规定，达到快速准确测定要求。3.2 测波长的选择
由于地塞米松磷酸钠在240nm附近有最大紫外吸收，本制剂中氯霉素与地塞米松磷酸钠的浓度比为6.25∶1，为提高地塞米松磷酸钠的检测灵敏度，试验中选择地塞米松磷酸钠的最大吸收波长240nm为测定波长。
采用本实验方法测定地氯滴耳液中氯霉素及地塞米松磷酸钠含量，方法简便、准确、灵敏，重现性好，能同时测定地氯滴耳液中两组分的含量，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]中华人民共和国药典委员会．中国药典(二部) [S]．2005年版，北京：化学工业出版社，2005．
[2]黄奠坤，雷鹏，戴智勇．高效液相色谱法同时测定氯地滴耳液中主药的含量[J]．中国药房，2002，13（8）：497-498．
[3]唐坤，李卫强．H P L C法同时测定地氯滴耳液中氯霉素和地塞米松磷酸钠的含量[J]．中国药师，2009，12（9）：1260-1262．
[4]郭宇鹏，邱汝先，张玉武．H P L C法测定氯地滴眼液中氯霉素和地塞米松磷酸钠含量[J]．中国药师，2002，5 (2)：85．
[5]李湘斌，刘建平，唐帆等．H P L C法同时测定地氯滴眼液中地塞米松磷酸钠及氯霉素含量[J]．中南药学，2004，2 (3)：148．