关于四逆汤对肾性高血压大鼠肾及心脑病变的影响

【摘要】 目的 探讨四逆汤对高血压大鼠肾及心脑等器官病理学改变的影响。方法 取健康雌性Wistar大鼠24只，随机分为正常对照组、肾性高血压组、四逆汤治疗组，每组8只。应用双肾动脉夹闭法建立肾性高血压动物模型，应用RBF2型大鼠尾动脉血压计测量血压。四逆汤治疗组给予四逆汤灌胃4周，肾性高血压组同期给予生理盐水灌胃，正常对照组不做任何处理。观察各组大鼠肾及心脑的组织病理学改变。结果 四逆汤治疗组血压降至正常；肾性高血压组大鼠肾、心、脑结构较正常对照组均有不同程度的改变；四逆汤治疗组大鼠肾脏入球小动脉壁厚度较肾性高血压组明显变薄（F=11.086，q=2.82，P&<0.05），心肌细胞横截面积显著减小（F=13.607，q=2.83，P&<0.05），脑血管病理改变较对照组无显著性差异。结论 四逆汤对高血压具有一定的治疗作用，在降压的同时能够一定程度减轻肾、心、脑的病理改变。
【关键词】 四逆汤 高血压 血管性 病理状态 解剖学 肾 心脏 脑 大鼠
［ABSTRACT］ObjectiveTo study the effects of Sinitang on histopathologic changes in kidney， heart and brain in renal hypertensive rat.MethodsHealthy female Wistar rats (n=24) were evenly and randomly pided into normal control (NC) group， renal hypertension (RH) group and Sinitangtreated (ST) group. The renal hypertensive models were established by doublecliping the renal arteries. Sinitang was given through an intragastric tube to the rats in ST group for four weeks， while normal saline was given to those in RH group at the same time， and no any treatment given to the rats in NC group. The histopathologic changes of each group were then observed. ResultsExtensive pathological changes were noted in the kidney， heart and brain in RH group compared with that in NC group. The pathologic structure changes of kidney in ST group were obviously lightened than that in RH group， and the wall of afferent arteriole of glomerulus of ST group was thinner than that in RH group (F=11.086，q=2.82，P&<0.05); the average cross section area of myocardial fiber in ST group was smaller than that in RT group (F=13.607，q=2.83，P&<0.05); while no significant difference in brain histopathologic changes was noticed. ConclusionSinitang can relieve the pathologic changes in kidney and heart of renal hypertensive rats by reducing blood pressure.
　　［KEY WORDS］Sinitang; hypertension， renovascular; pathologic status， kidney; heart; brain; rats
　　四逆汤在临床上广泛应用于休克、腹泻、麻疹重症、胃下垂、放射性白细胞减少症、肝痈、复发性口疮、咳喘等虚寒性急慢性疾病的治疗，究其药理机制，与高血压的发病机制颇有关联［1，2］。然而，目前还未见关于四逆汤治疗高血压的报道。高血压的并发症多而重，特别是对心、脑、肾等重要靶器官的损害，是造成其病死率高的主要原因。有效的抗高血压治疗可对高血压靶器官起到保护作用。本实验旨在观察四逆汤对肾性高血压大鼠的血压及心、脑、肾主要器官组织病理学的影响。
　　1 材料和方法
　　1.1 实验动物及分组
　　成年健康雌性Wistar大鼠24只，3月龄，体质量180～200 g，SPF级，由青岛市药物检验所实验动物中心提供。22 ℃室温下常规喂养。随机分为正常对照组、肾性高血压组和四逆汤治疗组，每组8只大鼠。
　　1.2 动物模型建立
　　术前禁食（不禁水）6 h，安静清洁环境中饲养。应用双肾动脉夹闭法建立肾动脉狭窄性高血压动物模型。正常对照组动物不做任何处理。应用RBP2型大鼠血压计（北京中日友好医院临床医学研究所研制）检测血压。为防止操作过程中大鼠因激惹乱动影响所测血压和心率的准确性，各组动物于测量血压前应用100 g/L乌拉坦腹腔注射麻醉。反复测量血压3次，取均值，以血压大于17.3 kPa为模型成功的标志。不成功的动物及术中出血过多、手术操作时间超过30 min、术后2 h仍不苏醒以及状态不好的动物，予以剔除，另选动物补齐。
　　1.3 治疗方案
　　四逆汤提取物由北京大学天然药物与仿生药物国家重点实验室提供，实验动物全方给药，药物剂量为155 mg/kg。用蒸馏水将四逆汤提取物配制成20 g/L水溶液。建立动物模型1个月后，四逆汤治疗组动物按7.75 mL/kg灌胃，每日1次，连续应用14 d；肾性高血压组动物同步给予等量的生理盐水；正常对照组不做处理。
　　1.4 血压检测
　　给药14 d后应用RBF2型大鼠尾动脉血压计分别反复测量3组血压3次，取均值。
　　1.5 组织病理学观察
　　1.5.1 标本采集和处理 治疗结束后，麻醉动物，仰卧固定，打开腹腔，依次经腹主动脉灌注生理盐水200 mL、40 g/L多聚甲醛以及0.1 mol/L的 PBS 300 mL固定，迅速取心、肾、脑、组织，置于40 g/L多聚甲醛、0.1 mol/L PBS 300 mL后固定2 h，蒸馏水浸泡4 h，置于体积分数0.70乙醇保存备用。常规脱水、透明、浸蜡、包埋。肾脏沿长轴纵行切片，心脏垂直于长轴沿横切面切片，脑自视交叉后方连续冠状切片，厚度7 μm，每隔10张抽取1张，贴于经多聚赖氨酸处理的切片上，室温保存备用。
　　1.5.2 病理学观察 采用苏木精伊红染色法。石蜡切片常规脱蜡水化入水，蒸馏水冲洗后，置Harris苏木精染液，室温浸染5 min。蒸馏水漂洗后，用体积分数0.10的盐酸乙醇迅速分色，体积分数0.10稀氨水返蓝，再入伊红染色3 min，至细胞核呈蓝色、胞浆呈红色、背景透明为止。在100倍显微镜下，每一张心脏切片选择10个细胞核位于中央的心肌细胞，测量其横截面直径，取均值。每个肾脏标本选择10个入球小动脉，测量其动脉壁的厚度，取均值作为该标本肾脏入球小动脉的血管壁厚度。脑标本主要观察脑的各个部位血管的形态学改变以及神经元的病理变化。
　　1.6 统计学处理
　　应用SPSS统计学软件，计量资料以±s表示，组间比较采用方差分析和t检验。
　　2 结　　果
　　2.1 血压　　建立模型前3组动物的血压差异无显著性（F=0.023，P&>０.05）。治疗前，肾性高血压组和四逆汤治疗组的动物血压均明显升高(F=13.085，q=3.03、3.70，P&<0.05)，二者之间的差别无统计学意义（q=3.03，P&>0.05）。治疗后，肾性高血压组动物的血压未见变化，差异无显著性（t=0.300，P&>0.05）；四逆汤治疗组动物的血压显著下降（t=4.389，P&<0.05），且与正常对照组相比，差异无显著性（t=-1.007，P&>0.05）。见表1。
　　2.2 组织病理学
　　2.2.1 肾脏的病理学变化 肾性高血压组动物肾小球明显萎缩，个别有玻璃样变，入球出球小动脉管腔狭窄，管壁增厚，肾小管变性且排列紊乱，有各种管型，肾小管上皮细胞可见广泛的变性坏死，肾脏入球小动脉管壁较正常对照组显著增厚（F=11.086，q=3.38，P&<0.05）。四逆汤治疗组大鼠的入球小动脉厚度较肾性高血压组显著变薄（q=2.82，P&<0.05），和正常对照组相比差异仍有显著意义（q=2.82，P&<0.05）。见表2。
　　2.2.2 心脏的病理学变化 肾性高血压组动物心肌细胞肥大且排列紊乱，小动脉壁可见纤维性增生，毛细血管少，心肌细胞横截面直径较正常对照组显著增大（F=13.607，q=3.40，P&<0.01），四逆汤治疗组大鼠心肌细胞横截面直径较肾性高血压组差异有显著性（q=2.83，P&<0.01），和正常对照组相比差异无显著性（P&>0.05）。见表2。表1 治疗前后各组血压的变化表2 各组肾入球小动脉壁厚度及心肌细胞横截面直径比较
　　2.2.3 脑的病理学变化 肾性高血压组小动脉血管壁增厚，内弹力板增生，中层纤维素样增生，平滑肌层萎缩，管腔狭窄，血管与周围脑组织间隙增大；治疗组脑血管形态改变相对较轻。此外，各组大脑 皮质与海马神经细胞组织学未见明显变化。
　　3 讨　　论
　　高血压病人心、脑、肾等靶器官损害与血管重构密切相关［3］，其病因及病理机制集中于一些血管收缩因子，它们不仅升高血压，而且刺激微血管、大血管和心脏组织生长和重塑。
　　高血压病人的血管重塑广泛存在于各级动脉，几乎波及所有的组织器官，表现为大中型动脉管径扩大、管壁肥厚、峰值流速及最大剪切率降低、僵硬度增加、扩张性和顺应性减退。而小的阻力动脉管壁增厚、壁腔比值增大、阻力指数增大；细小动脉则表现为舒张末期流速降低、血管阻力增大，灌注不良［4，5］。除心肌肥厚外，高血压时多数靶器官并发症发生在靶器官内，是因为靶器官内较大的弹力血管和小肌性阻力动脉的硬化导致系列慢性缺血。

　　本研究结果表明，四逆汤可以使肾性高血压大鼠的血压降至正常水平，并使肾入球小动脉壁厚度显著变薄，心肌细胞横截面积显著减小，脑的病理改变减轻，说明四逆汤具有降压作用，并且能够减轻甚至逆转高血压大鼠心血管系统以及靶器官的病理改变，但是四逆汤并不能使肾脏血管的病理改变恢复至完全正常的水平，说明其逆转高血压病理改变的作用是有限的。
　　有研究证实，四逆汤能够扩张血管，抑制血管平滑肌细胞和心肌细胞的增生［6］。大量研究表明，四逆汤能调节机体内多种血管活性因子的生成和释放，这一效应可能与其扩血管作用以及抑制平滑肌细胞增殖有关[7～9]，这可能是四逆汤降血压和改善高血压大鼠靶器官病理改变的主要机制，如四逆汤能够调节一氧化氮（NO）的产生和释放，NO与高血压发生发展过程中血管的重塑密切相关［10］。此外，四逆汤还能够降低红细胞的聚集性和改善其变形能力，显著降低全血表观黏度和全血黏弹性，从而改善血液流变性［11，12］，改善整个循环状态。四逆汤还被证明具有抗氧化作用，其能够促进体内抗氧化酶的表达，并增强酶的活性，表现出有效清除氧自由基的效应［13］，并能改善缺血组织的能量代谢［14］。以上因素综合作用对靶器官起到积极的保护作用。
【参考文献】
［1］马天舒，刘平. 四逆汤对心血管系统作用的研究进展［J］. 中药药理与临床， 2002，18(1):4849.

［2］赵连友，王先梅． 高血压发病机制的研究现状［J］． 解放军医学保健杂志， 2004，6(2):6770.

［3］HAYASHI T， NAKAYAMA Y， TSUMURA K， et al. Reflection in the arterial system and the risk of coronary heart disease ［J］. Am J Hypertension， 2002，15(5):405409.

［4］SUKERNIK M R， WEST O D， CHITTIVELU B， et al. Hemodynamic predictors of atherosclerosis in the thoracic aorta［J］. Echocardiography， 1998，15(2):157161.

［5］EISKJAER H， CHRISTENSEN T， PEDERSEN B E. Abnormal structure and increased stiffness of the femoral arterial wall in young patients with sustained essential hypertension ［J］. J Intern Med， 1989，226(4):235239.

［6］薛迎生，王景峰，聂如琼，等. 四逆汤对兔球囊损伤后血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响［J］. 中国病理生理杂志， 2004，20(4):603608.

［7］刘平，葛迎春，马天舒，等. 低氧条件下四逆汤及组方药提取物对大鼠血管内皮细胞释放PGI2，TXA2和NO的影响［J］. 中国中药杂志， 2004，29(10):988991.

［8］李守文，李晶，刘晓红，等. 四逆汤对失血性家兔肿瘤坏死因子的影响［J］. 黑龙江医药， 2002，25(6):1920.

［9］刘筱蔼，吴伟康，杨仕云，等. 四逆汤体外对大鼠缺血胸主动脉环张力及其释放NO水平的影响［J］. 中国实验方剂学杂志， 2002，8(2):2830.

［10］马瑞霞，傅增泮，伦立民，等. 高血压病人血浆NO和ET水平与心脏结构和功能的关系［J］. 青岛大学医学院学报， 2002，38(3):259262.

［11］苏建文. 四逆汤对经皮冠状动脉成形术心肌顿抑的保护作用［J］. 中国药学杂志， 1997，32(12):740.

［12］唐铁军，陈建萍，吴伟康，等. 四逆汤制剂对血瘀模型大鼠血液流变性的影响［J］. 中国血液流变学杂志， 1999，9(3):139141.

［13］吴伟康，黑子清，孙惠兰，等. 四逆汤对高胆固醇喂饲所致动脉粥样硬化形成和氧化损伤的影响［J］. 中国动脉硬化杂志， 2003，11(6):505508.

［14］吴伟康，何光耀，罗汉川，等. 四逆汤与缺血心肌的能量代谢［J］. 中国中医基础医学杂志， 1996，2(2):2629.