关于对劣质瑞氏染色粉处理前后的体会

瑞氏染色粉（简称瑞氏粉）是瑞氏染色法不可缺少的主要原料之一，其瑞氏粉的质量决定着试剂配制的成功与染色效果。在工作中曾遇到过变了质的瑞氏染色粉，曾一度认为甲醇质量不纯导致了配制上的失败。所以，使用不同厂家、批号的甲醇进行了数次的配制，结果是细胞核普遍不着色或着淡灰蓝色，核浆界限不清，核上附有黑点等。这说明关键问题不在甲醇而是在于瑞氏粉。需从瑞氏粉的化学成分与性质来对其染色效果进行分析。
　　瑞氏粉是碱性美蓝（氯化美蓝）和酸性伊红钠盐在水中混合时，形成一种溶解性低的中性沉淀物，即是瑞氏粉。其外观呈黑蓝色，有金属光泽之粉沫状。有关资料介绍，在染色过程中红细胞着红色或深蓝色，白细胞核不着色或着色较差呈灰蓝色，界限不清，核上附有黑点等，是染液偏酸或偏碱所致。偏酸可用饱和美篮甲醇液，偏碱可用伊红甲醇液分别调节至染色满意为止。那么，白细胞核不着色，说明是染色液中碱性部分不足所致。根据这一特点又采用了饱和美篮甲醇液进行调节，染色结果同上。然后又滴加了几滴10%NaOH 后，再染色结果同上。考虑是瑞氏粉本身的问题，对其进行了处理，结果取得了成功。现介绍如下。
　　1 方法与结果
　　1.1 取2 个500 ml 烧瓶，分别加入瑞氏粉5 g。
各加新蒸馏水120 ml，用火徐徐加热到80～90 ℃后，冷却至50～60 ℃时，保温过滤以除去染色粉中的碳酸盐类和杂质。分别将滤纸上的染色粉烤干备用。
　　1.2 取4 个1000 ml 烧瓶，每瓶按要求各加染色粉1.4 g，甲醇500 ml，浓h3O21 ml，甘油10 ml。先把甲醇和染色粉混合，激烈震荡5 min，再加h3O2、甘油，充分混匀，置37 ℃恒温箱中，每天激烈震荡一次，放7 d 后取出。
　　1.3 染色液放置7 d、15 d、30 d 后进行染色，结果核浆分明，各种细胞易于识别。
　　2 讨论
　　甲醇质量不佳，可影响染色效果。但使用不同厂家、批号所配制试剂均失败，可排除甲醇质量问题。所用的瑞氏粉均是购置时间很长的产品，保管不善易于吸潮变质，外观呈现灰蓝色碎片或干块状，配制后染色效果欠佳。
　　通过劣质粉处理而证明，潮解的瑞氏粉遇到空气中CO2 生成h3CO3，再解离成HOC3-，HOC3-再和染色粉中金属离子结合，生成了碳酸盐类。经过加热处理后，使碳酸盐类重新解离，在未形成结晶前，也就是50～60 ℃之间保温过滤，使其全部滤出，从而恢复了原来的黑蓝色，有金属折光之感。所以恢复了正常的染色功能。