作者：赵泽驹 陆立 付逆 罗旭
【摘要】 目的： 探讨犬完整膀胱的壁内神经节及其分布特点. 方法： 取6只犬膀胱用100 g/L甲醛固定6 mo，另取4只犬膀胱用80 g/L的甲醛固定24 h，分别用Sihlers 和HE染色法处理. 结果： 犬膀胱呈球形，肌纤维呈编织状分布. 膀胱壁内神经节呈紫兰色，肉眼观察神经纤维分支处可见膨大的深蓝色黑点，分布于膀胱的不同层面，各节间有多条神经纤维相互联系，神经节与其相连的神经纤维在膀胱壁内共同形成网状；近输尿管膀胱连接部的表浅的神经节较大，神经元及纤维较多，反之则少，尤其是膀胱顶部；神经节内的神经元为多极神经元；神经纤维经过神经节不一定形成突触联系，有的穿过2~3个神经节，此与交感神经链的结构类似. 结论： 犬膀胱壁内存在大量的神经节，分布于不同的层面，靠近膀胱输尿管连接部及外层纵肌内分布较为密集；壁内神经节与其相连的神经纤维交织成网状；神经节内多极神经元的数量不等；神经节与神经纤维的关系类似交感神经链.
【关键词】 狗；膀胱；神经节
0引言
肌内神经整体分布的研究目前在骨骼肌方面已有报道［1］ ，而肌内神经节和膀胱肌内神经分布的研究还少见报道. 本研究旨在结合HE染色法，进一步研究犬膀胱壁内神经节，并观察其分布规律.
1材料和方法
1.1材料选择遵义医学院实验动物中心的实验用犬10只，外科手术实验室为取材场所，解剖教研室肌神经研究室进行样本处理及固定.
1.2方法6只成年实验用犬，腹腔内麻醉，动物实验结束死亡时取其完整膀胱6个，修剪去除筋膜和脂肪，用100 g/L的中性甲醛固定6 mo，取出用流水冲洗12 h. 改良Sihlers肌内神经染色法［2］将冲洗后的样本置入30 g/L氢氧化钾浸解3 wk，SihlersⅠ液脱钙2～4 wk，SihlersⅡ液染色3 wk，SihlersⅠ液脱染至肌肉呈淡紫色，神经分支黑色，0.5 g/L碳酸锂中和1 h，逐级甘油梯度(400～1000 g/L)透明，X线阅片箱上观察、照相，描绘. HE染色：取4只犬，腹腔内麻醉，动物实验结束后取其完整膀胱，修剪去除筋膜和脂肪，按Sihlers染色所观察到的神经纤维及神经节（黑点）分布规律取材，用80 g/L的中性甲醛固定24 h，漂洗、包埋、水平切片（由外层到内层）、脱腊、染色、显微镜下观察摄像. 另外，取Sihlers染色后肌纤维透明，神经染色较好的膀胱1只，于阅片灯箱下仔细将神经纤维及神经节（黑点）取出，水平切片、HE染色或直接压片于显微镜下观察，摄像.
2结果
犬膀胱呈球形，由平滑肌纤维交织排列成相对紧密的肌束，各束之间自由地交叉，没有固定的方向，除膀胱颈外，整个膀胱犹如肌束所编织的复杂网状物，唯三角区可以看见相对明显的三层结构；与人膀胱中层环肌发达、明显增厚相比较，其外层纵肌较为突出；犬膀胱仍可分为颈、底、体、尖四部，但膀胱脐韧带不清楚. 膀胱的血管、神经走向肉眼较难辨认.
2.1Sihlers染色犬膀胱外形完整，肌质呈透明或半透明胶冻状，肌外神经干和肌内神经支呈深蓝色，尽管肌肉组织轻度皱缩，整个标本的三维关系依然存在，肌纤维呈编织状分布. 膀胱底两侧均可见一神经干与动脉伴行形成血管神经束（图1）. 神经纤维入膀胱后沿膀胱纵轴呈树枝状分布，神经纤维分支处几乎均可见一局部膨大的深蓝色黑点，于膀胱输尿管连接部及外纵肌内分布较密集，体积较大，前后中线区、顶部及内层肌分布稀少，体积小；每个黑点有至少有2根神经纤维与其联系，不同层面的黑点之间有神经纤维交通，黑点与神经纤维共同构成膀胱壁内神经网，终末黑点发出的纤维与膀胱肌发生联系. 神经纤维和黑点密集的部位组织取材，Sihlers染色后观察，发现有较多的神经纤维和神经节，神经细胞的基本外形存在，结构被破坏（图2）. 从Sihlers染色透明的膀胱壁上取下的神经纤维和黑点直接压片观察发现：神经节特征十分明显，每个神经节有多条神经纤维与其联系，有的神经纤维在靠近神经节处离开，有的神经纤维经过该神经节但并未发现有明显的突触联系，有的在该神经节内换元后发出节后纤维，此与交感神经链的结构类似（图2，3）.
2.2HE染色根据Sihlers染色中发现的膀胱神经纤维上有黑点的地方对应部位取材切片染色发现：每一张切片上均有典型的神经纤维及神经节，神经节内细胞为多极神经元，部分切片上可见有神经纤维经过神经节，此与取出的神经节直接压片观察的结果吻合；不同部位不同层面的切片上所见的神经节的密度不同，靠近膀胱输尿管连接部及外纵肌层的神经节较粗大、密集（图4）.
3讨论
膀胱是储存和排泄尿液的肌性囊性器官，其功能的实现主要受神经调节，但其神经分布与骨骼肌不同，神经纤维与肌纤维的比例约为1∶4，分为交感和副交感两种成分. 两种纤维在膀胱不同部位的分布密度也不相同，副交感神经主要分布于膀胱体部，交感神经主要分布在颈部，并且主要是胆碱能神经［3］，神经分布的不同一般与其区域的功能调节有关. 膀胱神经为内脏神经，节前神经纤维一般需经过神经节换元后才能到达效应器，但膀胱壁内神经节整体是怎样分布的，神经节与神经纤维间的关系如何，未见确切的文献报道.
图1犬膀胱肌内神经分布模拟(背面观)（略）
LU: 左侧输尿管； NB： 左侧神经支； NG： 神经节.
图2Sihlers染色犬膀胱三角区附近部分肌内神经分布（背面观）（略）
图3Sihlers染色处理犬膀胱后，直视下取出的神经节染色后观察HE ×100（略）
图4新鲜犬膀胱壁内神经节组织图HE ×100（略）
人与动物膀胱壁内存在大量的神经节和纤维，通过膀胱切片免疫组化等方法已证实［4］，它们在膀胱壁内的分布也有相对较细的描述，但主要是通过切片断层判断的，我们在HE染色的切片中也观察到；但肉眼状态下观察到膀胱壁内的神经节和神经纤维还未见报道，本实验通过改良的Sihlers染色法处理犬膀胱，使其呈半透明或透明状，膀胱壁内神经节着色，在阅片灯箱上清晰的观察到了神经节的三维分布，发现犬的膀胱壁内神经节非常丰富，分布不均，大小不等，膀胱背侧较腹侧多，最外层较其它各层多，膀胱输尿管连接部约1.0 cm周围尤为密集，且神经节体积较大，其内神经细胞较多，此与Gabella G用免疫组化方法在雌性荷兰猪膀胱切片上观察到的情况类似［5］，这样的分布推测可能与犬膀胱肌最外层较其它层厚及膀胱输尿管连接部在抗尿液返流的作用有关；相同与不同层面的神经节间存在神经纤维交通，每个神经节至少与两根神经纤维相连，整个膀胱壁就形成了以神经节为纽带的三维网状结构，从透明的膀胱壁上取下的神经纤维和神经节直接压片，我们发现神经节与纤维均有外膜，神经纤维有的经过神经节但不一定与其有突触联系，有的于神经节附近分支到另一个神经节；肉眼连续追踪一根神经干都会发现，神经节与其纤维形成串珠样结构，类似交感神经的交感链，这是否与支配膀胱的神经成分较为复杂，其功能又存在精细调节有关，有待进一步探索.
Sanders等［6］认为肌内神经在肌内形成吻合，与肌活动的精细调节有关. Liu等［2］认为这样的神经支配类似侧枝血供，可能与神经损伤后神经再生和神经再支配有关. 膀胱内的吻合较多，可归因于两方面：一是壁内存在较多的神经节，二是膀胱的舒缩存在精细调节.
参考文献
［1］ Peker T， Gulekon N， Turgut BH， et al. Observation of the relationship between the shape of skeletal muscles and their nerve distribution patterns: a transparent and microanatomic study［J］. Plast Reconstr Surg，2006，117(1):165-176.
［2］ Liu J， Kumar VP， Shen Y， et al. Modified Sihlers technique for sdudying the distribution of intramural nerve branches in mammalian skeletal muscle［J］. Anat Rec，1997，(3):137-144.
［3］ Arrighi S， Bosi G， Cremonesi F， et al. Immunohistochemical study of the preand postnatal innervation of the dog lower urinary tract: Morphological aspects at the basis of the consolidation of the micturition reflex［J］. Vet Res Commun，2007，11(5):179-185.
［4］ 于启海，季海萍，刘润肌，等. 小儿膀胱的神经分布［J］. 山东医药，2003，43(35):5-7.
［5］ Gabella G. Intramural neurons in the urinary bladder of the guineapig［J］. Cell Tissue Res，1990， 261(2):231-237.
［6］ Sanders I， Wu BL， Mu LC， et al. The human communicating nerve［J］. Arch Otolaryngol Head Neck Surg，1994，120(2):1321-1328.
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