作者：李先茂，李燕，赵彤，朱梅刚，张进华
【关键词】 霍奇金淋巴瘤
【Abstract】 AIM: To study the expression of CD99 of ReedSternberg cells in classical Hodgkin’s lymphoma (cHL). METHODS: Eight cHL cases were confirmed according to the new WHO pathological classification. Immunohistochemistry for CD99 was performed with SABC method， and the CD99 expression of cell lines was tested by flow cytometer. RESULTS: The positive expression of CD99 was 0% (0/8). The CD99 expression of DG75 and Jurkat cell lines was （87.3±0.4）% and （96.8±0.6）%， and the CD99 expression of L428 cell line was （3.8±0.4）%. The CD99 expression of HDLM2 cell line was (66.4±0.3）%. CONCLUSION: Downexpression of CD99 in HRS cells may be a useful index for the diagnosis of classical Hodgkin’s lymohoma.
【Keywords】 Hodgkin’s lymphoma; immunohistochemistry; CD99 gene
【摘要】 目的：探讨经典型霍奇金淋巴瘤(cHL) RS细胞CD99蛋白表达情况. 方法：将8例cHL全部按WHO新分类标准进行确诊，采用免疫组织化学SABC法进行CD99染色，观察每一病例RS细胞阳性表达率；流式细胞仪检测B淋巴瘤DG75细胞株，T淋巴瘤Jurkat细胞株，霍奇金淋巴瘤L428， HDLM2细胞株CD99蛋白表达情况. 结果：8例cHL中RS细胞CD99阴性表达率为100% (8/8); DG75细胞株CD99表达阳性（87.3±0.4）%，Jurkat细胞株CD99表达阳性（96.8±0.6）%，L428细胞株CD99表达阳性（3.8±0.4）%，HDLM2细胞株CD99表达（66.4±0.3）%阳性. 结论：CD99基因在霍奇金淋巴瘤表达缺失可作为诊断cHL的参考依据.
【关键词】 霍奇金淋巴瘤； 免疫组织化学； CD99基因
0引言
经典型霍奇金淋巴瘤(classical Hodgkin’s lymphoma， cHL)具有典型的RS细胞(ReedSternberg cell)及特异免疫表型. CD30， CD15这两种mAb免疫组织化学法可协助诊断和鉴别诊断cHL. 新近发现HL的发病还与CD99基因表达缺失有关［1］. 我们观测RS细胞CD99的表达以为临床诊断提供参考.
1材料和方法
1.1材料
ｃＨＬ 8（男5，女3）例，年龄10～ 57（平均21.5）岁. 全部病例经重新切片复查，按ＷＨＯ造血和淋巴组织肿瘤疾病新分类，由我室朱梅刚教授协助确诊. 抗体ＣＤ99为鼠抗人mAb(Ｄａｋｏ公司)，按1∶80稀释，SABC免疫组化染色试剂盒(福州迈新生物技术有限公司)，PBS代替一抗作阴性对照. 人HL细胞株L428， HDLM2由美国内布拉斯加州医学中心Wing C (John) Chan教授赠送. DG75，Jurkat细胞株本室保存.
1.2方法
石蜡包埋组织连续切片4 μm厚，除常规HE染色外，按 SABC免疫组化方法显示CD99，DAB显色，苏木素复染. 用 TBS缓冲液代替第一抗体作阴性对照. 细胞置RPMI 1640培养液(内含100 mL/L胎牛血清、100 u/L青霉素、100 mg/L链霉素)中培养(37℃，50 mL/L CO2). 每2～3 d换液. 流式细胞仪(ＦＣＭ)检测待检细胞CD99分子表达 将待测培养细胞生长至指数期1000 r/min离心5 min，去上清，用ＰＢＳ(10 mmol/L，ｐＨ 7.4)洗 2次，每管加荧光标记的鼠抗人CD99抗体20 μL，4℃作用30 min，用洗涤液洗2次，加适量ＰＢＳ(10 mｍｏｌ/Ｌ，ｐＨ 7. 4)配成细胞悬液， 流式细胞仪(EPICSXL型，美国BeckmanCoulter公司)，收集100 000个细胞，用同型对照调整非特异性结合细胞小于2%;然后待测标本逐一上机测试，打印测定结果.
2结果
2.1CD99染色阳性细胞膜上线状棕黄色着色（Fig 1）. 8例cHL中RS细胞CD99免疫组化染色阴性表达率为100% (8/8)，RS细胞周围可见不同程度棕染的背景细胞.
2.2流式细胞仪检测DG75细胞株CD99表达阳性（87.3±0.4）%，Jurkat细胞株CD99表达阳性（96.8±0.6）%，L428细胞株CD99表达阳性（3.8±0.4）%，HDLM2细胞株CD99表达（66.4±0.3）%阳性.
编码CD99的mic2基因位于X和Y染色体短臂假染色体区（PAR）的Xp22.32pter和Yp11pter上，而连锁分析提示PAR是HL的潜在致病基因区. CD99蛋白是一个Mr为32 000的糖基化的跨膜蛋白，在大多数细胞表面表达，目前它的功能还没有完全清楚，可能参与血细胞分化过程中的细胞间的黏附，及未成熟胸腺细胞、神经元细胞的凋亡等［2］. 霍奇金淋巴瘤中 RS细胞CD99表达缺失是由于LMP1基因高表达阻遏了CD99基因的转录所致［3］；将反义CD99转染B淋巴瘤IM9细胞可导致CD99表达缺失，出现H/RS细胞的形态、免疫、基因表型等大部分特征［4］ .
CD30，CD15是诊断cHL较为特异的抗体，可作为cHL诊断及鉴别诊断的参考依据［5，6］. CD30虽为霍奇金淋巴瘤相关抗原，但除了霍奇金淋巴瘤外，还可见于其他类型的细胞，尤其是活化的大淋巴细胞和间变性大细胞性淋巴瘤 (ＡＬＣＬ)［7］. ＣＤ15为单核细胞粒细胞相关抗原，可知CD15和CD30并非cHL的绝对特异性抗体， 病理切片免疫组化观察及HL细胞株流式细胞仪检测均发现H/RS细胞CD99表达缺失，HDLM2细胞株CD99表达阳性率较高，但 HDLM2细胞株是T淋巴细胞起源的HL细胞株，HL起源T淋巴细胞的概率大约是5%［8］，所以我们认为CD99可作为诊断霍奇金淋巴瘤cHL的参考依据.
参考文献
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