作者:徐若华 万琪 王洪典 李兵 张巍
【关键词】 脑缺血
关键词: 脑缺血;DNA损伤;Klenow片段
1 材料和方法
1.1 材料 雄性4mo龄左右SD大鼠36只,体质量250~350g,本校实验动物中心提供;DNA聚合酶-I Klenow大片段、biotin-dATP,dGTP,dCTP,dTTP购自美国Gibco公司.
1.2 脑缺血模型 按文献[1]方法建立前脑缺血模型.
1.3 动物分组及组织切片制备 36只大鼠随机分组,实验组每组4只,假手术对照组每组2只,分缺血再灌注1,2,3,6,24和72h6个时间点,各组于相应时间点取脑,将其快速包埋于干冰中,选择视交叉部位切片,片厚10μm,储存于-70℃冰箱备用.
1.4 方法 玻片晾干,在40g L-1 多聚甲醛固定30min,0.01mol L-1 PBS漂洗5min×3次;在37℃湿温箱中,用含有10μmol L-1 的dGTP,dCTP,dTTP标记的dATP和40U mL-1 的E.coli Klenow片段及50mmol L-1 Tris-HCl,10mmol L-1 MgCl ,50mmol L-1 NaCl的混合液(pH8.0)孵育1h,0.01mol L-1 的PBS液终止反应,然后在PBS/小牛血清白蛋白(0.5g L-1 )中洗5min,再将生物素-卵白素-辣根过氧化物酶复合物(ABC1 300,Sigma)在PBS/小牛血清白蛋白中孵育1h,最后用0.5g L-1 DAB在PBS(0.01mol L-1 pH7.4)和0.5g L-1 h3 O
关于DNA聚合酶┐I Klenow片段原位检测缺血性神经元的DNA早期断裂
论文价格:0元/篇
论文用途:仅供参考
编辑:论文网
点击次数:0
Tag:
如果您有论文相关需求,可以通过下面的方式联系我们
客服微信:371975100
相关论文大全文章