关于一种简便实用的肿瘤体外侵袭模型

作者：常恒　张殿忠　马保安　文艳华


【关键词】 肿瘤侵袭
　　关键词: 肿瘤侵袭;体外;模型
　　
　　1 材料和方法
　　
　　1.1 材料 侵袭细胞，鸡胚，培养基，琼脂小牛血清，胰蛋白酶，HIPES恒温培养箱，CO2 孵箱，倒置显微镜等.
　　
　　1.2 方法 ①细胞球体的制备:用弯头吸管将长满瓶壁的瘤细胞层横割划成面积约1cm2 的方块，倒出培养液，加入适量2g L-1 的胰蛋白酶（不含EDTA）消化液，在倒置显微镜下边消化边观察，当划痕处出现细胞层卷起后立即终止消化，倒出消化液，加入含150g L-1 小牛血清的RPMI1640培养液3～5mL，吹打细胞使其呈小片状脱落，将细胞小片连同培养液一起移入底部铺有20g L-1 琼脂的培养瓶内，置37℃CO2 （50mL L-1 ）孵箱内培养2～3d即成细胞球体;②球体器官块的制备:取孵育9d的鸡蛋，用750mL L-1 的酒精消毒后，超净台中从气室侧打开蛋壳，将鸡胚移入灭菌的培养皿中，剪开胸腔，取出心脏，剪去心房及大血管，用不完全培养液冲洗后将其剪成0.4mm3 的小块，将组织块移到200目的细胞筛上，再清洗2次后，移入底部铺有20g L-1 琼脂的培养瓶中，加RPMI1640完全培养液6mL（注意使心肌块均匀分布，否则易互相粘连），置37℃CO2 （50mL L-1 ）孵箱内培养2～3d即可;③侵袭复合体的制备:将制备好的细胞球体与组织块球体移入底部铺有琼脂的24孔板内，每孔移入一对组织，使其紧密接触，培养2h后，每孔小心加入RPMI1640完全培养基1mL（勿将复合体冲散），继续培养.一般每2d换1次培养液即可，在培养1，3，5，7，10和14d后取材制作组织切片进行分析;④组织切片制作:用吸管将侵袭复合体（一般每次取3～5个）移入拭镜纸（2cm×2cm），包裹后置入固定液中固定24h，脱水盒中常规脱水、石蜡包埋、切片、HE染色.
　　
　　2 结果
　　应用本实验方法分别观察骨肉瘤细胞系OS-9901［1］ ，成骨肉瘤细胞系SOSP-9607及CM-319细胞（待发表）的侵袭性，均得到满意结果.其中OS-9901细胞接触培养4d就将心肌块完全侵袭.
　　
　　3 讨论
　　我们研究的模型可用于:①确定组织培养细胞的恶性程度;②一个母细胞系分离出相似亚群后，进行侵袭能力的比较;③分析用已知癌基因转染细胞的侵袭性;④研究肿瘤侵袭机制;⑤筛选具有潜在抗侵袭因子和抗侵袭的药物.其特点是:①简便、实用，尤其适合尚不具备旋转摇动仪的实验室使用;②模拟了体内器官及实体瘤的结构，使侵袭更直观，更接近体内侵袭实际情况;③实验周期短，一般瘤细胞7～14d，恶性程度高的瘤细胞3～7d即可查见明显的侵袭现象.
　　参考文献:
　　
　　［1］张殿忠，范清宇，马保安，周 勇，张惠中，裘秀春.人骨肉瘤细胞系OS-9901的建立及其生物学特性［J］.第四军医大学学报，1999;20（12）:1048-1050.